張萬(wàn)鑫,馬婧怡,陳 虹,姜 勇,屠鵬飛,丁 慧
(1.石河子大學(xué)藥學(xué)院教育部新疆特種植物藥資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,新疆石河子 832002;2.北京大學(xué)中醫(yī)藥現(xiàn)代研究中心,北京 100083)
近年來(lái),越來(lái)越多的研究表明,管花肉蓯蓉(Tubulosa Cistanchis)及其所含的多種化學(xué)成分具有神經(jīng) 保 護(hù) 作 用[1-2],其 中 松 果 菊 苷 (echinacoside,ECH)經(jīng)研究證明具有明顯的抗氧化[3]、抗神經(jīng)元凋亡[4]、抗衰老[5]和改善學(xué)習(xí)記憶能力[6]等神經(jīng)保護(hù)作用。帕金森病(Parkinson's disease,PD)是一種慢性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退化性失調(diào),腦內(nèi)需要多巴胺來(lái)指揮肌肉的活動(dòng),缺乏足夠的多巴胺就產(chǎn)生各種活動(dòng)障礙,損害患者的動(dòng)作技能、語(yǔ)言能力以及其他功能。以往研究?jī)H對(duì)給予藥物ECH后PD大鼠紋狀體細(xì)胞外液中DA、DOPAC、HVA含量的變化做出檢測(cè)[7],本研究在此基礎(chǔ)上,除對(duì)紋狀體中多種單胺類(lèi)物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)外,也對(duì)海馬細(xì)胞外液中的5種單胺類(lèi)物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè),旨在進(jìn)一步探討ECH對(duì)PD大鼠腦神經(jīng)保護(hù)作用的可能機(jī)制。
1.1 藥物和試劑 水合氯醛(天津市福晨化學(xué)試劑廠);磷酸鋅水門(mén)汀(上海醫(yī)療器械股份有限公司產(chǎn)品,由液體和粉劑組成);ECH由北京大學(xué)藥學(xué)院屠鵬飛教授惠贈(zèng)(純度95%以上);美多巴(ROCHE公司);6-羥基多巴胺(6-OHDA)、多巴胺(DA)、3,4-二羥基苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)、去甲腎上腺素(NE)、5-羥色胺(5-HT)(均為Sigma公司);一水合檸檬酸(天津市津科精細(xì)化工研究所);檸檬酸三鈉(Acros公司);乙二胺四乙酸二鈉(JTBaker Chemical co);八烷基硫酸鈉(Sigma公司);甲醇(DIKMA公司);乙腈(DIKMA公司);腦微透析灌流液為復(fù)方氯化鈉注射液(北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司)。
1.2 儀器 美國(guó)BAS4100型大鼠腦立體定位儀;CMA/12探針及探針套管;CMA/120清醒動(dòng)物裝置;CMA/402微量泵;CMA/150低溫樣品自動(dòng)收集器;島津LC-20AB輸液泵;島津CTO-10ASVP柱溫箱;ANTEC DECAED2SDC電化學(xué)檢測(cè)器;玻璃碳工作電極和Ag/AgCl參考電極;C18色譜柱(Waters公司,ODS 5 μm,250 mm ×4.6 mm);島津色譜工作站(Esa公司)。
1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及模型制備 清潔級(jí)♂ SD大鼠,體質(zhì)量250~300g,購(gòu)于新疆實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,許可證編號(hào):SCXK(新)2011-0002。隨機(jī)分為對(duì)照組(Control)、模型組(Model)、ECH高劑量組(ECHH)、ECH中劑量組(ECHM)、ECH低劑量組(ECHL)和陽(yáng)性藥美多巴組(MD),每組8只。以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的水合氯醛(3.5 ml·kg-1)將大鼠麻醉后固定在定位儀上,顱頂皮膚脫毛,暴露出大鼠頂蓋,參照George Paxinos《大鼠腦立體定位圖譜》,利用三維立體定位技術(shù),以前囟為基點(diǎn),定位坐標(biāo)為①AP:-0.2 mm;ML:+3.0 mm;DV:-4.5 mm。②AP:-0.2 mm;ML:+3.0 mm;DV:-5.5 mm,除對(duì)照組外,其余各組大鼠紋狀體內(nèi)雙點(diǎn)注射6-OHDA,每點(diǎn)注射4 μl(3 g·L-1),對(duì)照組注射等量的維C生理鹽水,縫合皮膚切口。
1.4 術(shù)后給藥及微透析 于PD大鼠模型制作完畢后7 d,各組大鼠腹腔注射相應(yīng)的藥物或生理鹽水,每天1次,連續(xù)4周。其中對(duì)照組和模型組分別給予等量質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9%氯化鈉注射液1 ml·kg-1;ECH 高、中、低劑量組分別給予 ECH 40、20、10 mg·kg-1;陽(yáng)性藥組給予 MD 4.5 mg·kg-1。給藥結(jié)束后,依次以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的水合氯醛(3.5 ml·kg-1)麻醉大鼠,將套管植入大鼠右側(cè)紋狀體及海馬中,定位坐標(biāo)為① 紋狀體:AP:-0.2 mm;ML:+3.0 mm;DV:-4.5 mm,② 海馬:AP:+3.5 mm;ML:+2.0 mm;DV:-3.0 mm,待大鼠清醒后在其自由活動(dòng)狀態(tài)下插入微透析探針,用Ringer液以1.5 μl·min-1的速度同時(shí)灌流,每20 min 收集1 管透析液,每管透析液收集完畢后均立即置于-20℃冰箱保存,并在透析結(jié)束后轉(zhuǎn)存至-70℃冰箱,擇日測(cè)定。本實(shí)驗(yàn)中的 DA、DOPAC、HVA、NE、5-HT探針回收率分別為 49.89%、35.63%、28.42%、45.17%、24.22%。
1.5 HPLC-ECD分析 測(cè)定流動(dòng)相每升含一水合檸檬酸15 g、檸檬酸三鈉20.2 g、Na2EDTA 0.036 g、八烷基磺酸鈉0.18 g、甲醇100 ml。清洗流動(dòng)相為甲醇∶水(40∶60V/V)。設(shè)定流動(dòng)相流速為1.0 ml·min-1,柱溫箱溫度40℃,電化學(xué)檢測(cè)器工作電壓750 mV,增益為2nA,進(jìn)樣量為 20 μl。標(biāo)準(zhǔn)曲線用12.5、25、50、100、250、500、1 000 μg·L-1的含 DA、DOPAC、HVA、NE、5-HT的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液繪制。
2.1 ECH對(duì)PD大鼠紋狀體及海馬細(xì)胞外液中DA含量的影響 由Tab 1、2可知:整個(gè)灌流期內(nèi),模型組大鼠的紋狀體及海馬細(xì)胞外液中DA含量均明顯低于對(duì)照組(P<0.01),說(shuō)明模型成功。與模型組比較,各給藥組DA含量均有不同程度的升高(P<0.05,P<0.01)。
2.2 ECH對(duì)PD大鼠紋狀體及海馬細(xì)胞外液中DOPAC含量的影響 由Tab 3、4可知:整個(gè)灌流期內(nèi),模型組大鼠的紋狀體及海馬細(xì)胞外液中DOPAC
含量均明顯低于對(duì)照組(P<0.01),這一結(jié)果間接說(shuō)明模型成功。與模型組比較,各給藥組DOPAC含量均有不同程度的升高(P<0.05,P<0.01)。
Tab 1Effects of echinacoside on striatal extracellular fluid of DA in Parkinson's disease rats(±s,n=8)
Tab 1Effects of echinacoside on striatal extracellular fluid of DA in Parkinson's disease rats(±s,n=8)
**P <0.01 vs control group;△P <0.05,△△P <0.01 vs model group.
Perfusion time/min Content of DA in striatal extracellular fluid/μmol·L -1 Control Model ECHH ECHM ECHL MD 20 5.33 ±0.69 2.50 ±0.46** 5.01 ±0.28△ 4.85 ±0.86△ 4.81 ±0.59△ 5.11 ±0.82△△40 6.42 ±0.70 3.01 ±0.41** 5.83 ±0.68△△ 5.04 ±0.70△ 4.75 ±0.52△ 5.62 ±0.54△△60 8.56 ±0.63 4.03 ±0.54** 7.05 ±0.49△ 7.77 ±0.52△△ 7.01 ±0.26△ 8.25 ±0.69△△80 9.59 ±0.49 4.49 ±0.34** 8.55 ±0.63△△ 8.01 ±0.58△△ 7.36 ±0.47△ 8.36 ±0.51△△100 10.65 ±0.52 4.96 ±0.37** 9.58 ±0.58△△ 8.95 ±0.61△ 8.24 ±0.71△ 9.68 ±0.64△△120 11.56 ±0.49 5.41 ±0.44** 10.38 ±0.64△△ 9.82 ±0.35△ 8.95 ±0.69△ 10.29 ±0.58△△140 10.58 ±0.58 4.95 ±0.38** 9.34 ±0.52△ 8.62 ±0.67△ 7.79 ±0.48△ 9.87 ±0.35△△160 9.64 ±0.52 4.52 ±0.43** 9.05 ±0.69△△ 9.31 ±0.32△△ 8.96 ±0.44△ 8.86 ±0.38△△180 8.62 ±0.64 4.04 ±0.29** 8.25 ±0.56△△ 8.84 ±0.48△△ 7.92 ±0.39△ 8.31 ±0.47△△200 7.59 ±0.60 3.56 ±0.47** 7.06 ±0.60△△ 6.52 ±0.51△ 5.49 ±0.85△ 7.38 ±0.39△△
Tab 2 Effects of echinacoside on hippocampus extracellular fluid of DA in Parkinson's disease rats(±s,n=8)
Tab 2 Effects of echinacoside on hippocampus extracellular fluid of DA in Parkinson's disease rats(±s,n=8)
**P <0.01 vs control group;△P <0.05,△△P <0.01 vs model group.
Perfusion time/min Content of DA in hippocampus extracellular fluid/μmol·L -1 Control Model ECHH ECHM ECHL MD 20 5.81 ±0.55 2.88 ±0.32** 5.50 ±0.35△ 5.36 ±0.67△ 5.25 ±0.43△ 5.59 ±0.43△△40 6.98 ±0.61 3.53 ±0.51** 6.35 ±0.56△△ 5.57 ±0.51△ 5.20 ±0.32△ 6.21 ±0.56△△60 9.03 ±0.56 4.52 ±0.47** 7.53 ±0.31△ 7.19 ±0.48△ 7.47 ±0.28△ 8.76 ±0.58△△80 9.94 ±0.62 4.91 ±0.35** 9.11 ±0.47△△ 8.50 ±0.39△ 7.88 ±0.56△ 8.84 ±0.44△△100 11.12 ±0.49 5.40 ±0.46** 10.29 ±0.53△△ 9.42 ±0.35△ 8.69 ±0.53△ 10.20 ±0.37△△120 12.15 ±0.51 5.92 ±0.54** 10.87 ±0.57△△ 10.15 ±0.42△ 9.34 ±0.37△ 10.72 ±0.52△△140 11.16 ±0.45 5.32 ±0.40** 9.90 ±0.44△△ 9.11 ±0.56△ 8.27 ±0.42△ 10.31 ±0.31△△160 10.09 ±0.59 4.91 ±0.39** 9.48 ±0.59△△ 9.04 ±0.50△△ 9.05 ±0.38△ 8.96 ±0.38△△180 9.09 ±0.63 4.39 ±0.35** 8.79 ±0.43△△ 7.77 ±0.44△ 8.21 ±0.29△ 8.73 ±0.55△△200 8.23 ±0.57 3.98 ±0.41** 7.58 ±0.52△△ 6.89 ±0.39△ 5.98 ±0.35△ 7.96 ±0.36△△
Tab 3Effects of echinacoside on striatal extracellular fluid of DOPAC in Parkinson's disease rats(±s,n=8)
Tab 3Effects of echinacoside on striatal extracellular fluid of DOPAC in Parkinson's disease rats(±s,n=8)
**P<0.01 vs control group;△P<0.05,△△P<0.01 vs model group.
Perfusion time/min Content of DOPAC in striatal extracellular fluid/μmol·L -1 Control Model ECHH ECHM ECHL MD 20 14.83 ±1.27 6.73 ±0.58** 11.75 ±0.86△△ 10.58 ±1.12△ 8.87 ±0.87△ 12.14 ±0.69△△40 15.44 ±1.11 7.15 ±0.61** 12.57 ±1.05△△ 13.21 ±0.98△△ 10.58 ±0.69△ 12.21 ±0.52△△60 16.01 ±1.01 7.60 ±0.55** 14.23 ±0.89△△ 14.14 ±1.25△△ 12.51 ±0.92△ 13.89 ±1.05△△80 16.70 ±0.91 7.97 ±0.44** 14.46 ±1.21△△ 14.68 ±0.87△△ 12.21 ±1.02△ 14.21 ±0.65△△100 17.27 ±0.93 8.42 ±0.26** 14.66 ±0.96△ 15.21 ±1.04△△ 13.38 ±0.85△ 15.38 ±0.96△△120 17.92 ±0.85 8.80 ±0.85** 15.12 ±1.03△△ 14.96 ±0.79△ 13.89 ±0.77△ 15.35 ±0.57△△140 17.29 ±0.94 8.44 ±0.30** 14.38 ±0.87△ 14.21 ±0.96△ 11.52 ±1.06△ 15.04 ±1.01△△160 16.72 ±0.85 7.98 ±0.29** 14.26 ±0.97△△ 13.86 ±0.91△ 12.15 ±0.94△ 14.38 ±0.99△△180 15.95 ±0.85 7.61 ±0.40** 13.86 ±1.05△△ 13.51 ±1.08△ 10.26 ±0.38△ 14.01 ±0.85△△200 15.24 ±1.03 7.16 ±0.48** 13.25 ±1.01△△ 12.48 ±0.85△ 11.14 ±0.52△ 13.16 ±1.08△△
Tab 4 Effects of echinacoside on hippocampus extracellular fluid of DOPAC in Parkinson's disease rats(±s,n=8)
Tab 4 Effects of echinacoside on hippocampus extracellular fluid of DOPAC in Parkinson's disease rats(±s,n=8)
**P<0.01 vs control group;△P<0.05,△△P<0.01 vs model group.
Perfusion time/min Content of DOPAC in hippocampus extracellular fluid/μmol·L -1 Control Model ECHH ECHM ECHL MD 20 15.89 ±1.02 7.78 ±0.99** 12.95 ±0.55△ 11.68 ±0.69△ 9.65 ±1.01△ 13.57 ±0.94△△40 16.43 ±0.97 8.11 ±1.02** 13.68 ±1.12△△ 13.27 ±1.01△△ 11.35 ±0.89△ 13.68 ±0.85△△60 17.10 ±1.15 8.59 ±0.75** 15.24 ±0.69△△ 14.15 ±0.95△ 13.27 ±0.72△ 15.31 ±0.68△△80 17.94 ±0.89 9.03 ±0.89** 15.73 ±0.73△△ 15.90 ±0.83△△ 13.30 ±1.03△ 15.52 ±1.04△△100 18.46 ±0.87 9.37 ±0.52** 15.87 ±1.01△ 16.23 ±0.59△ 14.16 ±0.69△ 16.61 ±0.83△△120 19.11 ±1.20 9.69 ±1.13** 16.23 ±0.84△△ 16.07 ±1.02△ 14.69 ±1.02△ 16.59 ±0.77△△140 18.52 ±0.82 9.32 ±0.68** 15.51 ±0.90△ 15.30 ±0.74△ 13.34 ±1.18△ 16.34 ±0.63△△160 17.79 ±1.01 8.90 ±1.06** 15.43 ±1.05△△ 15.05 ±0.63△ 13.06 ±0.99△ 15.65 ±1.10△△180 17.12 ±0.97 8.48 ±0.75** 14.98 ±0.73△ 14.71 ±0.81△ 12.84 ±0.84△ 15.31 ±0.79△△200 16.40 ±0.73 8.07 ±0.94** 14.37 ±0.83△△ 13.88 ±0.97△ 12.01 ±1.05△ 14.48 ±0.92△△
2.3 ECH對(duì)PD大鼠紋狀體及海馬細(xì)胞外液中HVA含量的影響 由Tab 5、6可知:整個(gè)灌流期內(nèi),模型組大鼠的紋狀體及海馬細(xì)胞外液中HVA含量均明顯低于對(duì)照組(P<0.01),這一結(jié)果也間接說(shuō)明模型成功。與模型組比較,各給藥組HVA含量均有不同程度的升高(P<0.05,P<0.01)。
2.4 ECH對(duì)PD大鼠紋狀體及海馬細(xì)胞外液中NE含量的影響 由Tab 7、8可知:整個(gè)灌流期內(nèi),模型組大鼠的紋狀體及海馬細(xì)胞外液中NE含量均明顯低于對(duì)照組(P<0.01),說(shuō)明模型成功。與模型組比較,各給藥組NE含量均有不同程度的升高(P<0.05,P<0.01)。
2.5 ECH對(duì)PD大鼠紋狀體及海馬細(xì)胞外液中5-HT含量的影響 由Tab 9、10可知:整個(gè)灌流期內(nèi),模型組大鼠的紋狀體及海馬細(xì)胞外液中5-HT含量均明顯低于對(duì)照組(P<0.01),說(shuō)明模型成功。與模型組比較,各給藥組5-HT含量均有不同程度的升高(P<0.05,P<0.01)。
Tab 5Effects of echinacoside on striatal extracellular fluid of HVA in Parkinson's disease rats(±s,n=8)
Tab 5Effects of echinacoside on striatal extracellular fluid of HVA in Parkinson's disease rats(±s,n=8)
**P<0.01 vs control group;△P<0.05,△△P<0.01 vs model group.
Perfusion time/min Content of HVA in striatal extracellular fluid/μmol·L -1 Control Model ECHH ECHM ECHL MD 20 14.34 ±0.48 6.83 ±0.21** 11.26 ±0.51△△ 9.87 ±0.26△ 8.52 ±0.31△ 11.52 ±0.41△△40 14.74 ±0.46 7.04 ±0.22** 11.58 ±0.65△△ 10.08 ±0.31△ 8.69 ±0.58△ 11.61 ±0.59△△60 15.16 ±0.46 7.23 ±0.19** 12.35 ±0.39△△ 10.16 ±0.46△ 8.58 ±0.43△ 12.26 ±0.19△△80 15.56 ±0.42 7.24 ±0.19** 12.68 ±0.84△△ 12.35 ±0.69△ 9.87 ±0.62△ 12.75 ±0.57△△100 16.00 ±0.41 7.35 ±0.24** 13.41 ±0.57△△ 11.14 ±0.38△ 10.29 ±0.57△ 13.58 ±0.52△△120 16.35 ±0.38 7.81 ±0.14** 13.62 ±0.52△△ 11.19 ±0.52△ 9.97 ±0.36△ 13.49 ±0.73△△140 15.95 ±0.45 7.60 ±0.21** 13.01 ±0.14△ 10.95 ±0.28△ 9.85 ±0.62△ 13.69 ±0.54△△160 15.53 ±0.52 7.39 ±0.26** 12.69 ±0.38△△ 10.39 ±0.47△ 9.29 ±0.68△ 12.57 ±0.38△△180 15.15 ±0.52 7.18 ±0.18** 11.96 ±0.59△△ 10.09 ±0.46△ 8.89 ±0.75△ 11.59 ±0.19△△200 14.76 ±0.58 7.07 ±0.23** 11.39 ±0.24△△ 9.89 ±0.25△ 8.96 ±0.54△ 10.69 ±0.24△△
Tab 6Effects of echinacoside on hippocampus extracellular fluid of HVA in Parkinson's disease rats(±s,n=8)
Tab 6Effects of echinacoside on hippocampus extracellular fluid of HVA in Parkinson's disease rats(±s,n=8)
**P<0.01 vs control group;△P<0.05,△△P<0.01 vs model group.
Perfusion time/min Content of HVA in hippocampus extracellular fluid/μmol·L -1 Control Model ECHH ECHM ECHL MD 20 15.41 ±0.42 7.67 ±0.39** 12.45 ±0.55△△ 11.08 ±0.69△ 9.45 ±0.45△ 12.77 ±0.44△△40 15.83 ±0.56 7.90 ±0.42** 12.88 ±0.42△△ 11.27 ±0.51△ 9.56 ±0.39△ 12.98 ±0.27△△60 16.28 ±0.73 8.12 ±0.55** 13.64 ±0.69△△ 11.35 ±0.42△ 9.52 ±0.56△ 13.41 ±0.51△△80 16.70 ±0.48 8.15 ±0.59** 13.93 ±0.23△△ 13.49 ±0.43△△ 10.70 ±0.33△ 14.11 ±0.32△△100 17.04 ±0.33 8.20 ±0.62** 14.67 ±0.51△△ 12.23 ±0.62△ 11.19 ±0.69△ 14.86 ±0.62△△120 17.54 ±0.41 8.56 ±0.63** 14.93 ±0.44△△ 12.37 ±0.27△ 10.86 ±0.51△ 14.71 ±0.36△△140 17.10 ±0.56 8.43 ±0.38** 14.52 ±0.30△△ 12.10 ±0.34△ 10.72 ±0.29△ 14.98 ±0.69△△160 16.73 ±0.62 8.21 ±0.46** 13.93 ±0.55△△ 11.44 ±0.48△ 10.17 ±0.39△ 13.84 ±0.53△△180 16.32 ±0.28 8.08 ±0.55** 13.28 ±0.23△△ 11.19 ±0.35△ 9.78 ±0.14△ 12.88 ±0.44△△200 15.89 ±0.37 7.90 ±0.54** 12.57 ±0.53△△ 10.98 ±0.56△ 9.69 ±0.54△ 12.89 ±0.29△△
Tab 7Effects of echinacoside on striatal extracellular fluid of NE in Parkinson's disease rats(±s,n=8)
Tab 7Effects of echinacoside on striatal extracellular fluid of NE in Parkinson's disease rats(±s,n=8)
**P <0.01 vs control group;△P <0.05,△△P <0.01 vs model group.
Perfusion time/min Content of NE in striatal extracellular fluid/μmol·L -1 Control Model ECHH ECHM ECHL MD 20 22.26 ±0.26 10.56 ±0.35** 19.86 ±0.48△△ 17.36 ±0.57△ 16.98 ±0.26△ 20.36 ±0.25△△40 24.35 ±0.37 10.94 ±0.27** 20.27 ±0.37△ 18.15 ±0.28△ 18.05 ±0.55△ 20.59 ±0.61△△60 24.98 ±0.49 11.05 ±0.39** 21.42 ±0.26△△ 18.49 ±0.35△ 18.31 ±0.52△ 21.24 ±0.33△△80 25.66 ±0.51 11.31 ±0.47** 21.68 ±0.54△△ 19.11 ±0.44△ 19.06 ±0.32△ 21.39 ±0.56△△100 26.04 ±0.44 11.42 ±0.36** 22.31 ±0.67△△ 20.24 ±0.43△ 19.98 ±0.61△ 22.58 ±0.45△△120 26.28 ±0.39 11.78 ±0.52** 22.62 ±0.37△△ 19.92 ±0.43△ 19.57 ±0.43△ 22.46 ±0.68△△140 25.77 ±0.41 11.59 ±0.25** 23.01 ±0.28△△ 20.35 ±0.61△ 19.99 ±0.58△ 22.97 ±0.34△△160 25.39 ±0.56 11.27 ±0.71** 22.64 ±0.46△△ 20.26 ±0.51△ 19.34 ±0.71△ 22.69 ±0.29△△180 25.02 ±0.71 11.04 ±0.44** 20.73 ±0.57△△ 19.91 ±0.48△ 18.75 ±0.58△ 20.61 ±0.35△△200 24.45 ±0.38 10.88 ±0.35** 20.20 ±0.29△ 19.67 ±0.36△ 18.59 ±0.61△ 20.34 ±0.55△△
Tab 8Effects of echinacoside on hippocampus extracellular fluid of NE in Parkinson's disease rats(±s,n=8)
Tab 8Effects of echinacoside on hippocampus extracellular fluid of NE in Parkinson's disease rats(±s,n=8)
**P <0.01 vs control group;△P <0.05,△△P <0.01 vs model group.
ime Content of NE in hippocampus extracellular fluid/μmol·L -1 Perfusion t/min Control Model ECHH ECHM ECHL MD 20 23.89 ±0.35 11.76 ±0.41** 21.40 ±0.45△△ 18.91 ±0.25△ 18.41 ±0.31△ 21.97 ±0.27△△40 25.93 ±0.46 11.99 ±0.52** 21.77 ±0.27△ 19.69 ±0.26△ 19.44 ±0.27△ 22.24 ±0.38△△60 26.62 ±0.42 12.13 ±0.67** 22.97 ±0.36△△ 20.10 ±0.36△ 19.76 ±0.37△ 22.96 ±0.55△△80 27.41 ±0.58 12.37 ±0.29** 23.19 ±0.51△△ 20.64 ±0.31△ 20.70 ±0.42△ 23.13 ±0.49△△100 27.60 ±0.41 12.48 ±0.36** 23.84 ±0.28△ 21.73 ±0.51△ 21.51 ±0.57△ 24.21 ±0.52△△120 27.94 ±0.39 12.88 ±0.48** 24.15 ±0.32△△ 21.45 ±0.44△ 21.03 ±0.26△ 24.16 ±0.54△△140 27.40 ±0.51 12.67 ±0.35** 24.65 ±0.35△△ 21.78 ±0.46△ 21.39 ±0.31△ 24.56 ±0.37△△160 26.93 ±0.47 12.29 ±0.26** 24.21 ±0.24△ 21.79 ±0.29△ 20.77 ±0.44△ 24.36 ±0.57△△180 26.58 ±0.33 12.13 ±0.19** 22.32 ±0.47△△ 21.50 ±0.32△ 20.12 ±0.57△ 22.20 ±0.38△△200 25.99 ±0.40 11.90 ±0.22** 21.74 ±0.59△△ 21.23 ±0.43△ 20.01 ±0.29△ 21.94 ±0.33△△
Tab 9 Effects of echinacoside on striatal extracellular fluid of 5-HT in Parkinson's disease rats(±s,n=8)
Tab 9 Effects of echinacoside on striatal extracellular fluid of 5-HT in Parkinson's disease rats(±s,n=8)
**P <0.01 vs control group;△P <0.05,△△P <0.01 vs model group.
Perfusion time/min Content of 5-HT in striatal extracellular fluid/μmol·L -1 Control Model ECHH ECHM ECHL MD 20 8.35 ±0.26 4.28 ±0.43** 6.58 ±0.37△△ 5.87 ±0.27△ 5.24 ±0.31△ 6.47 ±0.87△△40 8.86 ±0.37 3.96 ±0.38** 6.95 ±0.31△ 6.03 ±0.37△ 5.67 ±0.47△ 6.89 ±0.92△△60 9.49 ±0.49 4.18 ±0.25** 7.31 ±0.41△△ 6.34 ±0.42△ 6.15 ±0.38△ 7.42 ±0.48△△80 10.31 ±0.51 4.55 ±0.53** 7.59 ±0.45△△ 6.86 ±0.51△ 6.74 ±0.52△ 7.66 ±0.62△△100 11.05 ±0.44 5.26 ±0.47** 7.98 ±0.54△△ 7.21 ±0.62△ 7.01 ±0.63△ 7.95 ±0.53△△120 11.28 ±0.39 5.86 ±0.61** 8.53 ±0.35△ 7.63 ±0.74△ 7.34 ±0.72△ 8.65 ±0.74△△140 10.82 ±0.41 5.11 ±0.72** 8.04 ±0.36△△ 7.52 ±0.48△ 7.33 ±0.69△ 8.06 ±0.28△△160 10.43 ±0.56 4.48 ±0.74** 7.58 ±0.72△△ 7.09 ±0.54△ 6.86 ±0.58△ 7.71 ±0.54△△180 10.01 ±0.71 4.01 ±0.38** 7.11 ±0.59△△ 6.85 ±0.43△ 6.41 ±0.69△ 7.30 ±0.37△△200 9.36 ±0.38 3.97 ±0.45** 6.87 ±0.44△△ 6.52 ±0.63△△ 5.95 ±0.74△ 6.94 ±0.46△△
Tab 10Effects of echinacoside on hippocampus extracellular fluid of 5-HT in Parkinson's disease rats(±s,n=8)
Tab 10Effects of echinacoside on hippocampus extracellular fluid of 5-HT in Parkinson's disease rats(±s,n=8)
**P <0.01 vs control group;△P <0.05,△△P <0.01 vs model group.
Perfusion time/min Content of 5-HT in hippocampus extracellular fluid/μmol·L -1 Control Model ECHH ECHM ECHL MD 20 9.16 ±0.45 4.92 ±0.25** 7.47 ±0.34△△ 6.69 ±0.31△△ 6.00 ±0.22△ 7.33 ±0.35△△40 9.72 ±0.37 4.88 ±0.18** 7.94 ±0.25△△ 6.88 ±0.46△ 6.51 ±0.35△ 7.96 ±0.54△△60 10.31 ±0.54 4.93 ±0.33** 8.53 ±0.27△△ 7.21 ±0.50△ 6.87 ±0.41△ 8.36 ±0.27△△80 11.29 ±0.61 5.45 ±0.28** 8.51 ±0.56△△ 7.69 ±0.28△ 7.44 ±0.42△ 8.60 ±0.38△△100 11.70 ±0.36 6.04 ±0.46** 8.90 ±0.62△△ 8.10 ±0.43△ 7.65 ±0.36△ 8.93 ±0.46△△120 12.15 ±0.42 6.72 ±0.35** 9.51 ±0.47△△ 8.57 ±0.24△ 8.21 ±0.43△ 9.62 ±0.51△△140 11.76 ±0.54 5.73 ±0.29** 8.99 ±0.44△△ 8.35 ±0.31△ 8.19 ±0.35△ 9.03 ±0.37△△160 11.32 ±0.33 5.30 ±0.17** 8.53 ±0.27△△ 7.92 ±0.25△ 7.59 ±0.19△ 8.75 ±0.25△△180 10.90 ±0.51 4.65 ±0.27** 8.02 ±0.38△△ 7.63 ±0.36△△ 7.15 ±0.27△ 8.34 ±0.36△△200 10.17 ±0.47 4.31 ±0.32** 7.81 ±0.30△△ 7.29 ±0.22△ 6.79 ±0.30△ 7.94 ±0.42△△
研究表明,PD的病變主要發(fā)生在黑質(zhì)和紋狀體,多巴胺能神經(jīng)元喪失,導(dǎo)致紋狀體內(nèi)乙酰膽堿-多巴胺兩種遞質(zhì)失去平衡而發(fā)病[8],從而導(dǎo)致PD大鼠出現(xiàn)靜止性震顫、肌強(qiáng)直、運(yùn)動(dòng)徐緩、姿勢(shì)反射減少、甚至?xí)霈F(xiàn)明顯的學(xué)習(xí)記憶障礙,并發(fā)癡呆等。由于大腦海馬區(qū)主要負(fù)責(zé)學(xué)習(xí)和記憶,因此本實(shí)驗(yàn)旨在研究PD的形成是否還與海馬細(xì)胞外液神經(jīng)遞質(zhì)的變化有關(guān),進(jìn)一步探討ECH治療PD大鼠的可能機(jī)制。
從以上結(jié)果可以看出,在整個(gè)灌流期內(nèi),模型組大鼠紋狀體及海馬細(xì)胞外液中各時(shí)間點(diǎn)的5種神經(jīng)遞質(zhì)含量均明顯低于對(duì)照組(P<0.01),說(shuō)明模型成功且可靠,PD大鼠除紋狀體外,海馬內(nèi)這5種遞質(zhì)的含量也有明顯的變化。而與模型組比較,ECH高、中、低劑量組和陽(yáng)性藥MD組各時(shí)間點(diǎn)5種遞質(zhì)的含量均有不同程度的升高(P<0.05,P<0.01),其中ECH高劑量組與陽(yáng)性藥MD組相差不大,個(gè)別存在一定誤差,可能是因?yàn)榇嬖趥€(gè)體差異,以及個(gè)體對(duì)藥物的耐受程度不同。
綜上,ECH對(duì)PD大鼠紋狀體及海馬細(xì)胞外液中的單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的含量減少具有改善作用,對(duì)于PD具有一定的治療作用,這是ECH對(duì)PD大鼠腦神經(jīng)保護(hù)作用的可能機(jī)制之一。
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