李建軍 馬清峰 張 靜 熊 亮，＃

高血壓是誘發(fā)心腦血管性疾病的主要危險因素之一，高血壓時湍流和剪切應(yīng)力的增加可導(dǎo)致動脈內(nèi)膜損傷，損傷部位易發(fā)生脂質(zhì)沉積和血小板聚集，從而發(fā)生粥樣硬化。頸動脈粥樣硬化（CAS）最初被認為是一種大中動脈退行性、增生性、全身性疾病。之后研究發(fā)現(xiàn)，CAS是一種與免疫和炎癥反應(yīng)密切相關(guān)的慢性疾病。作為重要炎癥信號通路的白細胞分化抗原40（CD40）和154（CD154，又稱CD40L）這一對受體-配體的相互作用參與了CAS的發(fā)生和發(fā)展［1］；基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）是CAS斑塊中炎癥細胞的產(chǎn)物，亦與CAS的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)［2］。本文通過對150例高血壓患者頸動脈內(nèi)膜中層厚度（CIMT）、硬化斑塊指數(shù)（Plaque Index，PI）和 血 清 CD40、CD40L 和MMP-9水平的測定，分析高血壓患者CAS與CD40、CD40L及MMP-9水平變化的關(guān)系，為防治、延緩CAS提供新的治療靶點。

1 資料與方法

1.1 對象及分組

2012-01至2012-12本院門診和住院的150例原發(fā)性高血壓患者，其中男87例，女63例，平均年齡（63.40±5.70）歲，平均收縮壓（20.60±1.40）KPa，平均舒張壓（15.96±1.70）KPa。原發(fā)性高血壓診斷符合1999年WHO／ISH關(guān)于高血壓的診斷標準［3］，并且排除繼發(fā)性高血壓、合并感染、血糖血脂異常及其它嚴重慢性病患者。CAS以2003年歐洲高血壓治療指南［4］中CIMT＞0.90mm為診斷標準，1.20mm＞CIMT≥0.90mm 為頸動脈粥樣增厚，CIMT≥1.20mm為頸動脈粥樣斑塊形成。150例高血壓患者分為CIMT正常組（n＝11）、CIMT增厚組（n＝30）和CIMT斑塊組（n＝109）。同時采用PI分級法［5］將150例高血壓患者分為PI 0級（CIMT＜1.2mm且無斑塊，n＝41）、PI 1級（CIMT介于1.2-2.0mm之間或僅有1個斑塊，n＝34）、PI 2級（CIMT介于2.1-4.0mm之間，有1個或數(shù)個斑塊，n＝62）和PI 3級（CIMT＞4.0mm，且有多個斑塊，n＝13）。50例健康體檢者為對照組，其中男34例、女16例，平均年齡（61.70±4.90）歲，血壓均在正常范圍內(nèi)（即收縮壓＜15.96KPa，舒張壓＜10.64KPa），未發(fā)現(xiàn)心腦血管疾病，血糖、血脂未見異常。各組患者與對照組性別、年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 檢查方法

1.2.1 彩色多普勒超聲檢測CIMT和PI：采用日本東芝Aplio XG（SSA-790A）全數(shù)字化彩色多普勒超聲診斷儀，于初次就診時測量?；颊呷〉驼硌雠P位，充分暴露頸部，探頭頻率7.5MHz，取長軸切面，分別測量雙側(cè)頸總動脈遠端1.0cm處CIMT最大數(shù)值，取雙側(cè)平均值為CIMT的平均值。同時于彩色多普勒超聲下觀察斑塊數(shù)量，結(jié)合CIMT來進行PI分級。

1.2.2 ELISA 測定血清 CD40、CD40L及 MMP-9水平：所有患者均在初次就診時抽取空腹肘靜脈血液，經(jīng)離心后分離血清，于-20℃冰箱保存，批量檢測。檢測前室溫解凍。CD40（貨號：EK0702）、CD40L（貨號：EK0573）和 MMP-9（貨號：EK0465）ELISA檢測試劑盒均購自武漢博士德生物有限公司。按照試劑盒操作說明書進行操作，采用UQUANT全波長酶標儀（美國Bio-Tek公司），檢測波長為450nm，校正波長為570nm，每個樣品設(shè)3個復(fù)孔，所得OD值通過CurveExpert1.3軟件換算成樣品濃度。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件。計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，多組間均數(shù)比較采用方差分析，兩兩比較采用t檢驗；兩指標值的相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)系數(shù)（r）法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同程度CIMT高血壓患者血清CD40、CD40L和MMP-9水平及與CIMT的相關(guān)性分析

如表1所示，各CIMT組血清CD40、CD40L和MMP-9水平均顯著高于對照組，并且隨著CIMT程度的增加，患者血清CD40、CD40L和MMP-9水平逐漸增高，各組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。相關(guān)性分析顯示，血清 CD40、CD40L和MMP-9水平與CIMT間均呈顯著正相關(guān)，r值分別為0.989，0.996和0.992（P 均＜0.05）。

表1 不同程度CIMT高血壓患者血清CD40、CD40L和MMP-9水平（±s，ng／ml）

表1 不同程度CIMT高血壓患者血清CD40、CD40L和MMP-9水平（±s，ng／ml）

注：與對照組比較，1）P＜0.01；與 CIMT正常組比較，2）P＜0.01；與 CIMT增厚組比較，3）P＜0.01

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2.2 不同PI分級高血壓患者血清CD40、CD40L和MMP-9水平及與PI的相關(guān)性分析

如表2所示，隨著頸動脈PI級別的增加，CD40、CD40L和MMP-9的濃度逐漸增高，各組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。相關(guān)性分析顯示，高血壓患者血清CD40、CD40L和MMP-9水平與其PI分級呈顯著正相關(guān)，r值分別為0.983、0.991和0.985（P 均＜0.05）。

3 討 論

頸動脈彩色多普勒超聲檢查是目前診斷CAS的首選方法，可清晰顯示血管CIMT、斑塊數(shù)量及大小等。PI與心腦血管疾病的發(fā)生密切相關(guān)，臨床將其作為衡量CAS程度的指標。流行病學(xué)研究［6］表明，若無癥狀人群的CIMT＞1.00mm，冠心病發(fā)病率可明顯增高，是早期識別高危人群CAS的可靠指標之一。PI作為評估頸動脈粥樣斑塊形成的直接指征，能定量檢測CAS斑塊大小和數(shù)量［7］。

表2 不同PI分級患者血清CD40、CD40L和MMP-9水平（±s，ng／ml）

表2 不同PI分級患者血清CD40、CD40L和MMP-9水平（±s，ng／ml）

注：與PI 0級組比較，1）P＜0.01；與PI 1級組比較，2）P＜0.01；與 PI 2級組比較，3）P＜0.01

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CAS性狹窄是缺血性腦卒中的重要危險因素，闡明CAS斑塊發(fā)生、發(fā)展及破裂機制對于尋求有效治療措施、預(yù)防缺血性腦血管病發(fā)生至關(guān)重要［8］。動脈硬化炎癥假說認為動脈硬化是血管壁的慢性炎癥，其中有許多炎性介質(zhì)和炎性細胞參與了這一過程，而作為重要炎癥信號的CD40／CD40L也在其中。正常血管內(nèi)皮細胞低表達CD40，而CAS的內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞和巨噬細胞均高表達CD40和CD40L。本文結(jié)果證實，相對于CIMT正常組和PI0級組，CIMT增厚各組和PI 1-3級組患者CD40和CD40L水平明顯增高。CD40／CD40L主要是通過影響一些黏附因子、細胞因子、MMPs等介導(dǎo)CAS的發(fā)生和發(fā)展［9］，不僅參與粥樣斑塊的形成，同時也引起粥樣斑塊不穩(wěn)定或脫落而產(chǎn)生嚴重后果。已有動物實驗［10］表明，通過降低 CD40／CD40L水平可降低CAS的發(fā)生和延緩CAS的進展。

MMP-9是MMPs的重要成員，主要由成纖維細胞、炎性細胞、心肌細胞等合成與分泌。作為AS斑塊中炎性細胞產(chǎn)物，參與巨噬細胞、中性粒細胞和淋巴細胞侵入機體組織。本文結(jié)果顯示不同程度CIMT和PI分級高血壓患者血清MMP-9水平明顯高于對照組，且隨著CIMT增厚和PI分級增加而逐漸升高。增多的MMP能使粥樣斑塊的纖維帽萎縮和間質(zhì)膠原降解，導(dǎo)致粥樣斑塊不穩(wěn)定［11］。

綜上所述，CD40／CD40L和MMP-9在CAS高血壓患者中的變化趨勢相同，均與CAS的嚴重程度顯著正相關(guān)，表明它們共同參與了CAS的發(fā)生和發(fā)展；同時提示CD40／CD40L和 MMP-9可能作為CAS防治的靶點，通過降低其水平達到防治CAS的目的。

1 Buchner K，Hnee V，Grafe M，et al.CD40ligand is selectively expressed on CD4+T cells and platelets：implications for CD40-CD40Lsignalling in atherosclerosis［J］.J Pathol，2003，201（2）：288-295.

2 Bellota S，Via D，Canavesi M，et al.HMG-CoA reductase inhibitors reduce MMP-9secretion by macrophages［J］.Arteroscler Thromb Vasc Biol，1998，18（11）：1 671-1 678.

3 Chobaniart AV，Bakris GI，Black HR，et al.The seventh report of the joint national Committee on prevention，detection，evaluation，and treatment of high blood pressure：the JNC7report［J］.JAMA，2003，289（19）：2 560-2 572.

4 杜 麗，邱 健.多種無創(chuàng)檢測指標與動脈硬化相關(guān)性的臨床研究進展［J］.中國實驗診斷學(xué)，2009，13（5）：708.

5 張小民，宋月霞，劉春榮，等.免疫因子sB7-H3與高血壓合并頸動脈粥樣硬化［J］.中華高血壓雜志，2007，15（9）：756-758.

6 Nambi V，Chambless L，F(xiàn)olsom A，et al.Carotid intima-media thickness and the presence or absence of plaque improves predic-tion of coronary heart disease risk in the atherosclerosis risk in communities（ARIC）study.J Am Coll Cardiol，2010，55（15）：1 600-1 607.

7 Xu Y，Li J，Luo Y，et al.The accocition between ankle-brathial index and candiouascular or all-cause morlatity in metabotic syndrome of eldely chinese［J］.Hypertens Res，2007，30（7）：613-619.

8 武曉玲，趙 瑾，遲路湘.影響頸動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的流體力學(xué)因素研究進展［J］.微循環(huán)學(xué)雜志，2007，15（4）：97-99.

9 Wierzbicki AS.Lipid-altering therapies and the progression of atherosclerotic disease［J］.Cardiovasc Intervent Radiol，2007，30（2）：155-160.

10 薛 凌，高夏青，張 揚，等.CD40-CD40L系統(tǒng)對主動脈粥樣硬化兔血漿粘附分子水平的影響［J］.中國實用醫(yī)藥，2012，7（23）：134-136.

11 Schonbeck U，Libby P.CD40signaling and plaque instability［J］.Circ Res，2001，89（12）：1 092-1 093.