彭春梅，趙 英

(內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010017)

清眩丸是由川芎、白芷、薄荷等5味藥材的生藥原粉加水制得的水丸，具有散風(fēng)清熱的功效，主治風(fēng)熱頭暈?zāi)垦?、偏正頭痛、鼻塞牙痛[1]1127。歐前胡素是方中白芷的主要活性成分[2]，具有興奮交感神經(jīng)、抗炎鎮(zhèn)痛等作用[3－4]。為了控制清眩丸的質(zhì)量，筆者選定歐前胡素為指標(biāo)性成分，并用高效液相色譜(HPLC)法[5]對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Lab Alliance高效液相色譜儀;Anastar色譜工作站。歐前胡素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110826－200307);清眩丸(赤峰大吉藥業(yè)集團(tuán)有限公司);甲醇為色譜純，水為二次重蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱:Agilent Zorbax SB －C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇－水(62∶38);流速:1 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):248 nm;柱溫:40℃。理論板數(shù)按歐前胡素峰計(jì)算應(yīng)不低于2 500。

2．2 溶液制備

取歐前胡素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含10 μg的溶液，即得對(duì)照品溶液。取裝量差異項(xiàng)下的本品，研碎，取本品粉末(過(guò)4號(hào)篩)約0．5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率250 W，頻率33 kHz)45 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取方中除白芷外其余4味藥材制得的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制得陰性對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn):分別精密吸取對(duì)照品溶液5 μL、供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀。結(jié)果陰性對(duì)照品溶液色譜中，在與供試品、對(duì)照品溶液色譜歐前胡素峰保留時(shí)間相應(yīng)位置上無(wú)吸收(圖1)，表明方中其他成分對(duì)歐前胡素含量測(cè)定無(wú)干擾，方法的專屬性良好。

線性關(guān)系考察:精密稱取歐前胡素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含歐前胡素16．6 μg的對(duì)照品溶液。分別精密吸取該溶液 0．1，0．3，0．5，0．7，0．9 mL，置 10 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別吸取上述溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖[6]，測(cè)定其峰面積，以峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)、歐前胡素進(jìn)樣量(X，ng)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=2 990．4 X －152．6，r=0．999 1(n=5)。結(jié)果表明，歐前胡素進(jìn)樣量在16．6～149．4 ng范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

穩(wěn)定性試驗(yàn):分別精密吸取同一供試品溶液10 μL，于制備后 0，3，6，9，12 h 時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD 為 0．93%(n=5)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

精密度試驗(yàn):精密吸取同一供試品溶液10 μL，按擬訂色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD為1．24%(n=5)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品(批號(hào)為070915)5份，按供試品溶液制備方法平行處理并測(cè)定，計(jì)算含量。結(jié)果含量平均值為0．474 mg/g，RSD 為 1．89%(n=5)，表明方法重復(fù)性良好。

圖1 高效液相色譜圖

加樣回收試驗(yàn):分別精密稱取5份已知含量為0．48 mg/g(批號(hào)為070915)的樣品0．5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，以2份為1組，共3組，每組分別精密加入歐前胡素對(duì)照品0.14，0.71，0.19 mg，按供試品溶液制備方法制備溶液，并依法測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 歐前胡素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

含量限度:2010年版《中國(guó)藥典(一部)》白芷藥材含量測(cè)定項(xiàng)下要求，“本品按干燥品計(jì)算，含歐前胡素(C16H14O11)不得少于0．080%”[1]98。3批白芷藥材中歐前胡素(C16H14O11)的含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。可見(jiàn)，白芷藥材中歐前胡素的轉(zhuǎn)移率均在95%以上。因此，確定樣品中歐前胡素含量限度為“本品每1 g含白芷以歐前胡素(C16H14O11)計(jì)，不得少于 0．20 mg”。

表2 白芷藥材中歐前胡素轉(zhuǎn)移率測(cè)定結(jié)果

樣品含量:取6批樣品，依法制備供試品溶液并測(cè)定含量。結(jié)果見(jiàn)表3，制備的6批樣品含量測(cè)定結(jié)果均符合含量限度要求。

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=2)

3 討論

選擇檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)，精密吸取歐前胡素對(duì)照品溶液，在200～600 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果歐前胡素在248 nm波長(zhǎng)處有最大吸收。

選擇流動(dòng)相時(shí)，參考2010年版《中國(guó)藥典(一部)》清眩丸含量測(cè)定項(xiàng)下要求，采用甲醇－水(63∶37)為流動(dòng)相測(cè)定[1]1127，結(jié)果歐前胡素峰與雜質(zhì)峰分離效果較差，分離度小于1．5，經(jīng)摸索試驗(yàn)，以甲醇－水(62∶38)為流動(dòng)相時(shí)分離效果較好，達(dá)到了藥典要求。

選擇樣品提取方法時(shí)，選取甲醇為溶劑，以歐前胡素提取量為考察指標(biāo)，按2．2項(xiàng)下供試品溶液制備方法操作，分別精密吸取對(duì)照品溶液5 μL和供試品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀。結(jié)果表明，樣品中歐前胡素含量轉(zhuǎn)移率在95%以上，基本提取完全，因此本品的提取溶劑和提取方法可行。

方法學(xué)考察結(jié)果表明，方法靈敏度高、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，可作為清眩丸的質(zhì)量控制方法[6－12]。

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