張一云　唐菲　高雨等

【摘要】目的：探討通瘀去炎湯對小鼠急性毒性實驗、抗炎、止血及化瘀的作用。方法：采用最大給藥量測定方法評價通瘀去炎湯的毒性，采用小鼠耳廓腫脹測定方法和玻片法分別測定通瘀去炎湯的抗炎作用及凝血時間，采用雞紅細胞吞噬法對化瘀作用進行評價。結(jié)果：通瘀去炎湯達到最大給藥量160g/kg時未見毒性反應(yīng)；通瘀去炎湯高、中、低劑量組（16 g/kg、8g/kg、4g/kg）均能明顯抑制二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹（P<0.05）、能加速小鼠凝血的時間（P<0.05）、顯著提升小鼠巨噬細胞吞噬能力，增加吞噬率與吞噬指數(shù)（P<0.05）。結(jié)論：通瘀去炎方具有良好的抗炎、止血、化瘀作用，且安全閾值較高。

【關(guān)鍵詞】黎藥；通瘀去炎湯；藥效學(xué)；急性毒性；實驗研究

【中圖分類號】R29【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2014）17-0002-03

A preliminary pharmacodynamic and acute toxicity study of Tongyuquyantang of LiZhang Yi-yun1， Tang Fei1， Gao Yu1， Hou Shi-feng1，Yang Li-na2

1.Pharmaceutical institute of Hainan Province， Hainan Province，Haikou 571100，China；

2.Hainan Li Nationality Folk Medicine Research Association， Hainan Province，Haikou 572200，ChinaAbstract：Objective To study acute toxicity and pharmacodynamic effects of anti-inflammatory， hemostasia and removing blood stasis of Tongyuquyantang（TYQY）. Methods Acute toxicity of TYQY was evaluated by determination of maximum dose，the anti-inflammatory effect and clotting time were determined by mouse ear swelling and slide method，and stasis effect was evaluated by chicken erythrocytes phagocytosis. Results The maximum dose of TYQY（160g/kg） has no toxicity. TYQY（16g/kg、8g/kg、4g/kg） could significantly inhibit mouse ear edema induced by dimethylbenzene （P<0.05），accelerate clotting time（P<0.05），significantly improve the ability of murine macrophage phagocytosis，increase phagocytic rate and phagocytic index （P<0.05）. Conclusion TYQY has a good effect of anti-inflammatory， hemostasis ，removing blood stasis， and has the advantages of high safety threshold.

Keywords：Li medicine；Tongyuquyantang；pharmacodynamic； Acute toxicity；Experiment study

黎族民間醫(yī)藥作為中國傳統(tǒng)民族用藥的一種，用藥歷史具有3000多年[1]，但由于信息溝通方面的問題，一直未能得到有效的傳承和發(fā)展[4]。本課題研究的是黎族杞方言地區(qū)（五指山）藥王使用的通瘀去炎湯，由黎族民間醫(yī)藥研究協(xié)會楊麗娜女士提供，該方由4味藥組成，原植物皆產(chǎn)在海拔100～500米的丘陵和山地，在當?shù)刂髦胃黝惣毙匝装Y及內(nèi)外出血。為進一步開發(fā)該方，對處方進行了急性毒性研究和藥效學(xué)的初步研究，為該方的臨床應(yīng)用提供了實驗數(shù)據(jù)。

1實驗材料與方法

1.1實驗材料

1.1.1實驗動物KM小鼠，體重18～20g，雌雄各半，由長沙市天勤生物技術(shù)有限公司提供，許可證號：SCXK（湘）2009-0012，SPF動物房飼養(yǎng)。

1.1.2實驗藥物通瘀去炎湯由4味藥組成，取通瘀去炎湯處方藥材粉碎，用8倍量的水提取半小時，濾過，余下的藥渣用6倍量的水繼續(xù)提取半小時，合并濾液，濃縮至2g/ml（每ml含生藥材2g），備用；云南白藥膠囊，0.25g/粒，國藥準字Z53020799，由云南白藥集團股份有限公司生產(chǎn)，批號：ZBA1305；阿莫西林克林維酸鉀片：片劑，0.375g/片，國藥準字H20043183，由石藥集團中諾藥業(yè)（石家莊）有限公司生產(chǎn)，批號：160130108。

1.1.3試劑及儀器二甲苯、50ul移液槍、生物通風安全柜、離心機、顯微鏡、灌胃針、干凈載玻片、剪刀、鑷子、1ml注射針、生理鹽水、瑞氏染液、1%雞紅細胞。

1.2實驗方法

1.2.1急性毒性試驗[2-3] 經(jīng)預(yù)實驗，按最大體積（40ml/kg），最大濃度（2g/ml）灌胃給藥小鼠，未發(fā)現(xiàn)動物死亡，遂進行最大給藥量實驗。取18～20gKM種小鼠40只，雌雄各半，隨機分成兩組，即正常對照組和通瘀去炎湯組，每組20只，于實驗前禁食1晚，通瘀去炎湯組按40ml/kg體重，2g/ml藥物濃度，一天內(nèi)灌服2次，正常對照組灌服等量容積的蒸餾水，給藥后連續(xù)觀察14d小鼠的活動、體重及飲食狀況，并詳細記錄，計算最大給藥量。選擇最大給藥量的1/10、1/20、1/40分別作為藥效學(xué)實驗藥物的高、中、低劑量組。endprint

1.2.2抗急性炎癥實驗[2-3]取健康昆明種小鼠，18～20g，雌雄各半，隨機分為5組，每組10只動物，即空白對照組（給以相應(yīng)容積的蒸餾水）、阿莫西林克林維酸鉀片組（0.21g/kg）、通瘀去炎湯高劑量組（16g/kg）、中劑量組（8g/kg）、低劑量組（4g/kg），小鼠按0.2ml/10g/d灌胃給藥1次，連續(xù)給藥4d，末次給藥30min后，以移液槍在小鼠右耳涂以二甲苯0.05ml/只，左耳作為對照不進行任何處理，15min后處死動物，用直徑8mm的打孔器將左右雙耳同部位等面積切下，以萬分之一天平精密稱量，按以下公式計算并比較腫脹值、腫脹率及抑制率，，以此評價藥物的抗炎作用：腫脹值=右耳片重量-左耳片重量；腫脹率（%）=（腫脹值/左耳重量）×100%；抑制率（%）=（給藥組平均腫脹率-對照組平均腫脹率）/對照組平均腫脹率×100%。

1.2.3止血實驗[2-3]取健康昆明種小鼠，18～20g，雌雄各半，隨機分為5組，每組10只動物，即空白對照組（給以相應(yīng)容積的蒸餾水）、云南白藥組（0.26g/kg）、通瘀去炎湯高劑量組（16g/kg）、中劑量組（8g/kg）、低劑量組（4g/kg），各組小鼠按0.2ml/10g/d灌胃給藥1次，連續(xù)給藥4d，末次給藥30min后，用毛細管從小鼠球后靜脈叢取血于載玻片，血滴直徑約為5mm，立即用秒表計時。每隔10s（second）用清潔大頭針自血滴邊緣向里輕輕挑動一次，并觀察有無血絲挑起。從采血開始至挑起血絲止為凝血時間，比較各組凝血時間的差異。

1.2.4化瘀實驗[2-3]取健康昆明種小鼠，18～20g，雌雄各半，隨機分為5組，每組10只動物，即空白對照組（給以相應(yīng)容積的蒸餾水）、云南白藥組（0.26g/kg）、通瘀去炎湯高劑量組（16g/kg）、中劑量組（8g/kg）、低劑量組（4g/kg），各組小鼠按0.2ml/10g/d灌胃給藥1次，連續(xù)給藥5d。給藥第2天開始腹腔注射6%淀粉溶液1ml，連續(xù)3d。末次給藥后，小鼠腹腔注射1%雞紅細胞懸液2ml，輕揉腹部使之分散。30min后脫椎處死小鼠，腹腔注射生理鹽水2ml，剪開腹部用吸管吸取腹腔液，滴加一滴于干凈載玻片上，再滴加一滴生理鹽水稀釋。10min后棄去生理鹽水，待標本稍微干燥，在其上滴加3～4滴瑞氏染液染色5min，甩去染液，蒸餾水溫柔沖洗，晾干后置于顯微鏡下觀察。觀察并統(tǒng)計40X鏡下5個視野內(nèi)的巨噬細胞的總數(shù)、吞噬了紅細胞的巨噬細胞數(shù)及每個巨噬細胞吞噬的紅細胞數(shù)。按照如下公式計算并比較吞噬率及吞噬指數(shù)。吞噬率=（吞噬紅細胞的巨噬細胞/總計數(shù)巨噬細胞）×100%；吞噬指數(shù)=總吞噬的紅細胞數(shù)/吞噬紅細胞的巨噬細胞數(shù)。

1.2.5統(tǒng)計方法數(shù)據(jù)以“均數(shù)±標準差”（x±s）表示，數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布時進行t檢驗，不呈正態(tài)分布采用非參數(shù)檢驗。以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1急性毒性實驗（最大給藥量試驗） 在無法測出小鼠LD50情況下，進行了最大給藥量實驗。實驗中觀察到正常對照組和通瘀去炎湯組小鼠均于給藥后10min內(nèi)活動稍有緩慢，30min恢復(fù)正常，給藥14天內(nèi)，動物均無死亡，活動及飲食皆正常，眼、鼻、口無粘液性分泌物。對體重和進食量進行了統(tǒng)計，與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。計算最大給藥量為 160g/kg，相當于臨床人日用生藥量（即生藥0.5g/kg體重）的320倍。

3討論

黎族杞方言地區(qū)通瘀去炎湯主要由四味藥材組成，其中一味為海南草珊瑚，其他三種皆為產(chǎn)在海南熱帶雨林地區(qū)較為常見的草藥[5]。本文對通瘀去炎湯進行了急性毒性實驗和抗炎、止血、化瘀的藥效學(xué)研究。結(jié)果表明，通瘀去炎湯的最大給藥量為160g/kg，相當于臨床人日用生藥量（即生藥0.5g/kg體重）的320倍，安全閾值較高。同時，通瘀去炎湯高、中、低劑量組（16 g/kg、8g/kg、4g/kg）均能明顯抑制二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹（P<0.05）、能加速小鼠凝血的時間（P<0.05）、顯著提升小鼠巨噬細胞吞噬能力，增加吞噬率與吞噬指數(shù)（P<0.05）。其抗炎作用與與阿莫西林克林維酸鉀片（0.21g/kg）效果相當，止血作用與云南白藥膠囊（0.26g/kg）相當，而在化瘀作用上，通瘀去炎湯高、中劑量（16 g/kg、8g/kg）明顯強于云南白藥膠囊（0.26g/kg），通瘀去炎湯低劑量（4g/kg）與云南白藥膠囊（0.26g/kg）的效果相當。研究結(jié)果提示，本處方具有較好的抗炎止血作用，特別在清除由血管損傷，紅細胞外溢所引起的淤青和腫脹方面強于云南白藥。而對于本處方藥效實驗的深入研究、長期毒性實驗及機制研究等將在接下來的工作中進行進一步的探討。

參考文獻

[1]《黎族簡史》編寫組.黎族簡史[M].廣州：廣東人民出版社，1980.

[2]陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：656-658.

[3]徐叔云.藥理實驗方法學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1991.

[4]鄭才成.海南黎藥發(fā)展研究概況[J].中國民族醫(yī)藥雜志，2007，13（5）：2-3.

[5]鄭希龍，陳紅鋒，李榕濤，等.海南潤方言黎族藥用民族植物學(xué)研究[J].云南植物研究，2008，30（2）：195-210.

[6]關(guān)亞麗，潘琴，黃敏仁.民族植物學(xué)與海南黎藥資源開發(fā)[J].南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2009，33（4）：145-149.

（收稿日期：2014.07.16）endprint