梁曉強(qiáng)+朱培庭+張靜喆

摘 要 膽石病是外科常見(jiàn)病，膽石病研究模型的建立和完善對(duì)疾病的診斷及防治具有重要意義。本文綜述膽石病研究中應(yīng)用較多的體內(nèi)外模型的建立和作用。

關(guān)鍵詞 膽石病 實(shí)驗(yàn)研究 動(dòng)物模型

中圖分類(lèi)號(hào)：R975+.5/R965.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-1533（2014）18-0008-02

Research progress in experimental model of cholelithiasis

LIANG Xiaoqiang ZHU Peiting ZHANG Jingzhe

（Longhua Hospital ， Shanghai University of Traditional Chinese Medicine， Shanghai 200032， China）

ABSTRACT Cholelithiasis is a common disease. The experimental models including vivo and vitro are important in management of cholelithiasis. This article reviews the establishement and role of the experimental models which are widely used in scientific research of cholelithiasis.

KEY WORDS cholelithiasis； trial research； animal model

膽石病是外科常見(jiàn)病，其病因病機(jī)尚未完全闡明。因此，膽石病模型的建立與完善對(duì)該病的病因、診斷及防治具有重要意義，本文綜述近年來(lái)實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用較多的膽石病模型及對(duì)模型進(jìn)行的體內(nèi)外研究。

膽石病模型的體內(nèi)研究

目前，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型已成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)識(shí)生命科學(xué)客觀規(guī)律的主要工具。開(kāi)展膽石病防治領(lǐng)域的科學(xué)研究，同樣必須建立恰當(dāng)?shù)哪懯?dòng)物模型。膽囊結(jié)石通常分為膽固醇性結(jié)石、膽色素性結(jié)石及混合性結(jié)石，一般按研究目的不同選取不同的動(dòng)物和造模方法，常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有豚鼠、地鼠、倉(cāng)鼠、C57小鼠、大白兔等。

膽色素結(jié)石的造模方法

常用的膽色素結(jié)石的造模方法有：①藥物注射法：皮下注射潔霉素誘發(fā)豚鼠膽色素結(jié)石模型，周期1個(gè)月左右[1]。②喂飼法：主要是低營(yíng)養(yǎng)飲食，包括低脂致石、低蛋白飲食及低維生素飲食[2-4]，徐長(zhǎng)生等[5]采用在動(dòng)物普通飼料中加入1%酪蛋白、15%蔗糖、1%豬油、0.02%膽酸和0.05%膽固醇喂飼8周。③膽道梗阻感染法：常對(duì)狗、兔、猴等動(dòng)物手術(shù)造成膽道不同部位的梗阻和感染，誘發(fā)結(jié)石。④植入結(jié)石法：將膽色素結(jié)石植入豚鼠或家兔體內(nèi)，可用探頭無(wú)損傷觀察結(jié)石在動(dòng)物體內(nèi)的形態(tài)學(xué)動(dòng)態(tài)變化。目前應(yīng)用較多的是①和②造模方法。

膽固醇結(jié)石的造模方法

常用的膽固醇結(jié)石的造模方法有：①植入結(jié)石法：將膽固醇結(jié)石植入豚鼠或家兔體內(nèi)。②喂飼法：膽固醇結(jié)石致石飼料主要是以高膽固醇飲食為主，在不同動(dòng)物中，膽固醇含量稍有不同。其中喂飼法導(dǎo)致結(jié)石形成過(guò)程與人類(lèi)膽結(jié)石發(fā)生、發(fā)展過(guò)程接近，亦無(wú)手術(shù)創(chuàng)傷，該法成熟，具有操作簡(jiǎn)便、成功率高、重復(fù)性好、便于觀察等優(yōu)點(diǎn)。

早期研究中常采用動(dòng)物為豚鼠和家兔，目前易成石的C57/BL小鼠和抗成石的ARK小鼠應(yīng)用逐步增多。Wang[6]同時(shí)應(yīng)用C57/BL和ARK品系小鼠，觀察老齡化在膽囊膽固醇結(jié)石形成中的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)老齡化是膽固醇結(jié)石形成的危險(xiǎn)因素，可能與Lith基因有關(guān)。

膽石病模型的體外研究

有關(guān)膽囊結(jié)石的生成以往多集中于肝外膽道變化、膽囊成分改變及膽道動(dòng)力學(xué)等[7]。20世紀(jì)60年代前期主要著重于對(duì)結(jié)石成分的分析，至70年代中期學(xué)者們對(duì)膽汁熱力學(xué)平衡作了全面的探討，進(jìn)入80年代后，學(xué)者們對(duì)膽汁促成核/抑成核蛋白等成核動(dòng)力學(xué)因素進(jìn)行了深入研究。由復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院蔡端教授領(lǐng)銜的團(tuán)隊(duì)制備了代表性促成核蛋白-33 500泡蛋白的檢測(cè)試劑盒[8-9]，同時(shí)還觀察了代表性抑成核蛋白-骨橋蛋白（osteopontin， OPN）在不同膽汁體系中的成核作用及其與膽結(jié)石形成的關(guān)系。研究結(jié)果顯示，OPN在不同膽汁體系中均可抑制膽固醇成核，從而抑制膽固醇結(jié)石形成[10]。20世紀(jì)90年代以來(lái)，有關(guān)膽結(jié)石的研究已從之前單一方面的研究逐步演變成更關(guān)注結(jié)石形成的綜合因素（包括家族遺傳因素、飲食結(jié)構(gòu)、飲食習(xí)慣等）研究，并對(duì)結(jié)石發(fā)生的分子生物學(xué)機(jī)制進(jìn)行了全面的梳理和研究探索。然而，自從“致石性膽汁”的概念誕生后，加之發(fā)現(xiàn)在消除肝外膽道病變后仍存在病理性膽汁及結(jié)石再發(fā)時(shí)，人們對(duì)膽囊結(jié)石的認(rèn)識(shí)逐漸由肝外轉(zhuǎn)向肝內(nèi)，認(rèn)為由于肝臟相關(guān)酶及蛋白的功能改變或代謝異常產(chǎn)生的致石性膽汁有利于結(jié)石形成。同時(shí)，在促成石的相關(guān)成分中，除黏蛋白由膽囊上皮分泌外，大部分均來(lái)源于肝臟，而且，膽汁的形成和分泌主要由肝細(xì)胞完成，肝細(xì)胞是膽固醇合成及向膽汁酸轉(zhuǎn)化的重要器官。因此，肝臟本身功能的改變?cè)谀懩医Y(jié)石形成過(guò)程中的重要地位被確立，近年來(lái)肝臟及肝細(xì)胞已逐步成為結(jié)石形成機(jī)制的研究新熱點(diǎn)。于是單純的體內(nèi)研究已經(jīng)不能滿足學(xué)者研究的需要，許多有志之士開(kāi)始積極探索尋找膽石病體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，以便更好的開(kāi)展與膽石病成因相關(guān)因素的機(jī)制研究。

膽石病體外研究旨在觀察某個(gè)因素在膽石病形成中的重要意義或探討某些藥物在防治膽石病過(guò)程中的作用機(jī)制。目前，多著眼于炎性損傷、氧化應(yīng)激和膽固醇代謝在結(jié)石形成或藥物防治中可能的作用機(jī)制。體外研究中采用的細(xì)胞有原代培養(yǎng)肝細(xì)胞、人L-02肝細(xì)胞株及人HepG2肝癌細(xì)胞株。涉及的主要方法有H2O2誘導(dǎo)人L-02肝細(xì)胞氧化損傷模型[11]、t-BuOOH誘導(dǎo)人L-02肝細(xì)胞氧化損傷模型[12]、LXR-α激動(dòng)劑誘導(dǎo)膽固醇沉積模型[13]和原代分離膽色素結(jié)石豚鼠肝細(xì)胞，用相應(yīng)藥物進(jìn)行干預(yù) [14]。其中兩種氧化損傷模型多用于研究膽結(jié)石形成過(guò)程中的炎癥、氧化應(yīng)激等；膽固醇沉積模型主要用于研究膽固醇代謝在結(jié)石形成過(guò)程中的作用機(jī)制；直接分離提取原代肝細(xì)胞用于研究體外膽色素肝細(xì)胞模型。endprint

綜上所述，膽石病的實(shí)驗(yàn)研究除了建立動(dòng)物模型進(jìn)行體內(nèi)研究外，還需采用體外細(xì)胞模型研究膽石病成因及藥物防治。膽石病的實(shí)驗(yàn)研究可依據(jù)不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇適當(dāng)?shù)膭?dòng)物模型。

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（收稿日期：2014-06-13）endprint