劉曼嬌，岳 波，唐大海，黃國其

淋巴細(xì)胞是構(gòu)成機(jī)體免疫系統(tǒng)的主要細(xì)胞群，在機(jī)體免疫應(yīng)答中起重要作用，淋巴細(xì)胞的數(shù)量和功能的變化與超敏反應(yīng)、免疫缺陷病、自身免疫性疾病、持續(xù)性病毒感染、腫瘤等關(guān)系密切，因此研究淋巴細(xì)胞絕對值與相關(guān)疾病的關(guān)系具有重要意義。淋巴細(xì)胞絕對值是血常規(guī)中的一項參數(shù)，很多醫(yī)院的正常參考范圍都是直接引用《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第3版的標(biāo)準(zhǔn)，這樣顯然欠妥。筆者認(rèn)為，該參考范圍應(yīng)用前需加以驗證，有條件的臨床實驗室應(yīng)根據(jù)自身不同檢測系統(tǒng)建立各自人群特征的參考區(qū)間［1]。

1 對象與方法

1.1 對象 選取2012年3－11月來我院體檢的上海地區(qū)各企事業(yè)單位職工(包括部隊、傳媒、醫(yī)療、工廠、公安系統(tǒng)等)作為研究對象，年齡18～60歲，所有選取對象經(jīng)我院各項檢查(肝功能、腎功能、血脂、血糖、B超、胸透、心電圖等)排除異常者。檢驗結(jié)果以均數(shù)±3倍標(biāo)準(zhǔn)差±3s)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行剔除，統(tǒng)計有效人數(shù)共3 081人，其中男1 778人，女1303人;按年齡分組，18～39歲為青年組，40～60歲為中年組，其中男青年組988人，男中年組790人，女青年組732人，女中年組571人。

1.2 標(biāo)本采集 檢測對象空腹，坐位，由檢驗科人員使用真空管采血法采集。

1.3 儀器與試劑 日本Sysmex公司XT-1800i五分類全自動血液分析儀和配套原裝試劑。

1.4 檢測項目 白細(xì)胞計數(shù)(WBC)、淋巴細(xì)胞百分比(LY%)、淋巴細(xì)胞絕對值等24個項目。淋巴細(xì)胞絕對值采用激光流式細(xì)胞檢測結(jié)合核酸熒光染色技術(shù)。

1.5 檢測方法 Sysmex XT-1800i五分類全自動血液分析儀每半年由廠家進(jìn)行1次校準(zhǔn)，并進(jìn)行校準(zhǔn)驗證。在校準(zhǔn)有效期內(nèi)參加上海市臨床檢驗中心的室間質(zhì)量評價，結(jié)果均合格，確保檢測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確度。每日標(biāo)本檢測前采用高、低2個濃度水平質(zhì)控品進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制，確保結(jié)果在控后才開始檢測。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 使用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗，各組數(shù)據(jù)均符合正態(tài)性分布，統(tǒng)計各組均值)和標(biāo)準(zhǔn)差(s)，使用參數(shù)法x±1.96s確定95%可信區(qū)間(CI，即參考范圍)，按照NCCLS指南，各組間比較采用Z檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 按性別分組 男女2組均符合正態(tài)分布，男性淋巴細(xì)胞絕對值分布見圖1。男性為(2.18±0.59)×109/L，女性為(2.06±0.57)×109/L。采用Z 檢驗進(jìn)行組間比較，男性高于女性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。由±1.96s分別得出 95%CI:男性為(1.02～3.35)×109/L，女性為(0.94 ～3.18)×109/L。

圖1 男性淋巴細(xì)胞分布直方圖

2.2 按年齡分組 各年齡組均符合正態(tài)分布，見表1。采用Z檢驗分別進(jìn)行同性別組間比較，男青年組略高于男中年組，女青年組略高于女中年組，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

表1 上海市不同性別不同年齡組間淋巴細(xì)胞絕對值比較

2.3 95%CI 將本次調(diào)查的95%CI與其他文獻(xiàn)和《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第3版比較，見表2。由于淋巴細(xì)胞絕對值符合正態(tài)分布，所以可以由x±1.96s算出95%CI，反過來，可以由95%CI推出均值和標(biāo)準(zhǔn)差。先計算出每個參考范圍的均值和標(biāo)準(zhǔn)差，然后采用Z檢驗分別與本結(jié)果進(jìn)行比較。除了南充地區(qū)女性和本地區(qū)的差異無統(tǒng)計學(xué)意義外，其他地區(qū)和本地區(qū)的差異都有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。由于操作規(guī)程中的參考范圍來源的樣本量未知，無法進(jìn)行Z檢驗，故將本次調(diào)查的均值作為樣本均數(shù)，操作規(guī)程的均值作為總體均數(shù)，采用t檢驗進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。

表2 上海市成人淋巴細(xì)胞絕對值調(diào)查結(jié)果與其他文獻(xiàn)比較(×109/L)

2.4 參考范圍的驗證 按照NCCLS指南，驗證參考范圍需要20例以上正常人群標(biāo)本，假如受試者中不超過10%的觀測值落在起始報告的界限之外，試劑生產(chǎn)廠商或其他實驗室報告的95%參考限可以有效地應(yīng)用于接收實驗室。將本次調(diào)查新建立的淋巴細(xì)胞絕對值參考范圍為參考范圍Ⅰ，操作規(guī)程中的參考范圍為參考范圍Ⅱ，用本次調(diào)查的3 081例樣本分別對2個參考范圍進(jìn)行驗證，分別統(tǒng)計落在2個參考范圍之外的百分比，見表3。結(jié)果顯示兩者都可以有效地應(yīng)用于本實驗室。

2.5 參考范圍的應(yīng)用 分別用2個參考范圍對我院2012年5－9月住院患者的淋巴細(xì)胞絕對值結(jié)果進(jìn)行判讀統(tǒng)計，共13 675例，其中男9 107例，女4 568例，結(jié)果超出參考范圍的視為陽性，分別統(tǒng)計2個參考范圍各自判讀的陽性率，見表4。參考范圍Ⅰ判讀的男性陽性率約為參考范圍Ⅱ的1.52倍，參考范圍Ⅰ判讀的女性陽性率約為參考范圍Ⅱ的1.52倍。

表3 2個參考范圍的驗證后差異比較

表4 2個參考范圍判讀13 675例標(biāo)本的陽性率比較

3 討論

本次調(diào)查顯示，18～60歲之間的男性淋巴細(xì)胞絕對值高于女性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。同性別之間，青年組淋巴細(xì)胞絕對值略高于中年組，這種現(xiàn)象和國外文獻(xiàn)報道的淋巴細(xì)胞絕對值有隨年齡的增高而遞減的趨勢相吻合［7]。本次調(diào)查中同性別2個年齡組間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義，可能是由于在18～60歲這個年齡段中，淋巴細(xì)胞絕對值受年齡的影響比較小，因此可以把青年組和中年組合并作為1個年齡組來設(shè)立參考范圍。

由表2可以看出，上海地區(qū)淋巴細(xì)胞絕對值參考范圍與大部分地區(qū)存在差異。因此，不同地區(qū)、不同實驗室應(yīng)該建立各自檢測系統(tǒng)的參考區(qū)間［8]。國際臨床化學(xué)與檢驗醫(yī)學(xué)聯(lián)合會(IFCC)建議，每個有條件的臨床實驗室應(yīng)根據(jù)不同檢測系統(tǒng)建立各自人群特征的參考區(qū)間［9]。本次調(diào)查初步建立了本實驗室上海地區(qū)成人靜脈血淋巴細(xì)胞絕對值的參考范圍。

美國CLIA-88要求實驗室驗證廠家的參考區(qū)間是否適合實驗室患者的群體［6]。觀察2個參考范圍的驗證結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩者都符合落在參考范圍之外的觀測值不超過10%的條件，即2個參考范圍都可以有效地應(yīng)用于本實驗室，2個參考范圍都可以在一定程度上減少假陽性。由表4可以看出，用參考范圍Ⅰ判讀淋巴細(xì)胞絕對值結(jié)果得到的陽性率約為參考范圍Ⅱ的1.52倍，即參考范圍Ⅰ比參考范圍Ⅱ多檢出了52%存在淋巴細(xì)胞絕對值異常的患者。但2個參考范圍都符合NCCLS指南，都可以有效減少假陽性，但參考范圍Ⅰ比參考范圍Ⅱ提高了檢測淋巴細(xì)胞絕對值異常的靈敏度，所以與操作規(guī)程比較，本次調(diào)查得到的淋巴細(xì)胞絕對值參考范圍更適合本實驗室。

本次調(diào)查新建立的參考范圍提高了檢測淋巴細(xì)胞絕對值異常的靈敏度，可以減少一部分患者的漏診和誤診。某些淋巴系的血液病(比如漿細(xì)胞白血病、慢淋等)在早期出現(xiàn)外周血淋巴細(xì)胞絕對值的輕微升高時，用操作規(guī)程中的參考范圍判讀可能就是陰性，未能引起臨床重視，導(dǎo)致延遲診斷或漏診;而用新的淋巴細(xì)胞絕對值參考范圍判讀可能就是陽性，能夠及時提醒臨床進(jìn)行相關(guān)方面的排查。在某些病毒感染的病例中，淋巴細(xì)胞絕對值升高不明顯，用新參考范圍判讀是陽性，可以及時發(fā)現(xiàn)病毒感染，而用操作規(guī)程中的參考范圍判斷可能就是陰性，此時患者如果再伴隨疼痛、緊張等因素導(dǎo)致WBC生理性升高，那么臨床就很可能誤診為細(xì)菌感染。所以本次建立的新的淋巴細(xì)胞絕對值參考范圍或許可以減少一些細(xì)菌感染的誤診，降低抗生素的誤用。

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