劉 萍 郭海榮 王俊飛 陳軼群 孫 楠

卵巢癌是婦科常見的惡性腫瘤之一，其中卵巢癌又以卵巢上皮癌(EOC)最為多見。在70%的EOC患者中，疾病的進展期意味著已發(fā)生了盆腔內的廣泛種植轉移，而進展期EOC患者5年生存率仍不到25%。目前EOC患者的預后判斷多基于臨床病理參數，然而報告顯示在相同病期、相同組織類型或分化級別的患者中，腫瘤的生物學方式和預后常常不同。因而，確定新的預后因素以便區(qū)分不同結果的患者可能對改善治療有幫助。

CD105 是內皮細胞增生的最可靠的標記物[1]，Ki-67是目前應用最為廣泛的細胞增殖標記之一[2]。目前同時研究CD105、Ki67在EOC中聯合表達對于預后價值的報告還很少。本研究采用免疫組化法對我院166例ECO組織中CD105和Ki67的表達進行檢測，旨在明確它們在ECO侵襲轉移中的作用及預后意義。

1 材料與方法

1.1 研究對象

2002年1月至2011年12月內蒙古醫(yī)科大學第三附屬醫(yī)院收治的并經組織病理學檢查確診為EOC患者共166例，年齡39～81歲，中位年齡為54歲。復習家族史確認患者為散發(fā)病例，且均為初發(fā)。根據2000年國際婦產科聯盟(FIGO)診斷標準中卵巢惡性腫瘤臨床分期標準進行分期:Ⅰ期16例，Ⅱ期42例，Ⅲ～Ⅳ期108例。組織學分化:高分化 24 例，中分化 52例，低分化 90 例。淋巴結轉移 98 例。

1.2 治療方法

患者均采用以手術為主的綜合治療，入院后行常規(guī)術前檢查后行全子宮加雙側附件切除術，其中150例行腫瘤細胞減滅術及盆腔和腹主動脈旁淋巴結清掃術，清掃盆腔淋巴結19～34枚。根據患者年齡、腫瘤臨床分期、病理及免疫組織化學檢測結果確定下一步治療方案。

1.3 組織病理學檢測

將術中切除組織用10%甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片(厚度為4 mm)后行蘇木精一伊紅染色。按照世界衛(wèi)生組織卵巢腫瘤組織學類型分類標準，在顯微鏡下觀察并確認:漿液性腺癌122例，黏液性囊腺癌26例，勃液性腺癌7例，內膜樣腺癌9例，透明細胞癌2例。

1.4 免疫組織化學技術

1.4.1 主要試劑 鼠抗人Ki67單克隆抗體(Changdao公司，美國)，鼠抗人P53單克隆抗體(Sunbio公司，中國)，免疫組織化學鏈霉菌抗生物素蛋白---過氧化物酶連結法(SP)染色試劑盒和二氨基聯苯胺(DAB)顯色劑。免疫組織化學檢測，根據Envision二步法的實驗步驟進行，置于光學顯微鏡下觀察。

1.4.2 結果判斷標準 CD105表達主要分布于細胞膜及細胞質，Ki67 表達主要于細胞核，均以出現棕黃色或棕褐色顆粒且染色強度明顯高于背景者為陽性表達。CD105和Ki67蛋白表達以高倍光學顯微鏡下陽性細胞所占比例的平均值表示，陽性細胞率 <5%為 0分，6%～25%為 1分，26%～50%為 2 分，51%～75%為 3分，>75%為 4 分；染色強度以多數細胞的呈色反應為準：無著色或著色很弱為0分；淡棕黃色為 1 分；棕黃色為 2 分；深棕黃色為 3 分。上述兩項積分相加為最后結果：0 分為陰性(-)，1～3 分為弱陽性(+)，4～5 分為中等陽性(++)，>6 分為強陽性(+++)。

1.5 隨訪

總生存期(OS)定義為從治療開始日至死亡或隨訪截止日期。隨訪截至于2011年12月31日，中位隨訪時間為26.3個月。所有病例均未失訪，至隨訪結束48例患者仍存活。

1.6 統計學處理

應用 SPSS 13.0 軟件對數據進行統計分析，定性資料間的比較采用卡方檢驗，采用Spearman等級相關檢驗進行分析，生存曲線采用Kaplan-Meier 法計算。

2 結果

2.1 CD105和Ki67表達與腫瘤淋巴結轉移、臨床分期的關系

組織學分化低EOC患者CD105和Ki67蛋白表達率顯著高于組織學分化高患者(P<0.05);Ⅲ～Ⅳ期患者CD105和Ki67蛋白表達率顯著高于Ⅰ～Ⅱ期者(P<0.05);有淋巴結轉移者CD105和Ki67表達率顯著高于無淋巴結轉移者(P<0.05)，見表1。

表1 166例卵巢上皮癌組織中CD105和Ki67表達與其臨床病理參數的關系(例，%)

注：△為與低分化比較；#為與Ⅲ～Ⅳ期比較。

2.2 CD105 與Ki67 表達相關性分析

166 例卵巢上皮癌中，CD105 和Ki67 同時呈陽性表達共86例(51.8%)，同時呈陰性表達共16例(9.6%)，CD105 陽性表達、Ki67 陰性表達共126例(75.9%)，CD105陰性表達、Ki67 陽性表達共110例(66.3%)。經Spearman 等級相關分析顯示，在卵巢上皮癌中CD105與Ki67陽性表達呈正相關(γ=0.66，P=0.01)。

2.3 CD105 和 Ki67表達與卵巢上皮癌預后的單因素分析(表2)

表2 ECO患者預后單因素分析結果

Kaplan-Meier生存分析發(fā)現，EOC患者OS與腫瘤臨床分期、組織學分化程度及淋巴結轉移相關(P<0.05)，CD105+/ Ki67+患者OS顯著縮短，CD105-/Ki67-患者OS延長，兩者差異有統計學意義(P<0.05)。

3 討論

CD105是受體TGF-β(腫瘤生長因子)家族成員，是內皮細胞增生的最可靠的標記物，在癌灶內及癌灶瘤周高表達，提示其在新血管生成的血管優(yōu)先表達[3]。目前國內外主要集中在研究腫瘤中CD105作為血管形成分子的角色和它作為腫瘤中微血管密度標記的作用。Ki67是細胞周期G1期的一個核蛋白，出現在細胞周期的全部活躍階段(G1、S、G2)，但不在休眠期細胞出現(G0)，其表達與細胞增生相關。是目前檢測腫瘤增殖活性和增殖速率最可靠的指標[4]。細胞增殖活性與腫瘤的增殖、浸潤轉移和預后密切相關，而Ki67蛋白的表達對評價細胞的增殖狀態(tài)、研究腫瘤的生物學行為及評估患者預后也具有重要意義[5]。研究顯示Ki67增生指數同一些癌癥不良的遠期無病存活和總體存活相關[6]。Ki67蛋白表達對腫瘤預后的影響及同腫瘤臨床病理特征的關系提示在多種不同種類的癌癥中起到重要作用。國外有研究表明在卵巢癌中Ki67的細胞核表達>30%預示在進展期卵巢癌中呈高表達[7]。然而，同時研究CD105、Ki67在卵巢上皮癌中聯合表達對于預后的價值的報告還很少。

國內已有研究發(fā)現，EOC中 Ⅲ～Ⅳ期卵巢癌的Ki67蛋白陽性表達率顯著高于Ⅰ～Ⅱ期，與本研究的結果一致。目前對于頭頸部、前列腺等多個部位腫瘤的研究發(fā)現，Ki67蛋白的表達與腫瘤的淋巴結轉移相關，并推測Ki67蛋白可作為一個獨立的腫瘤特異性的標志[8]。本研究結果顯示，有淋巴結轉移者的CD105、Ki67蛋白表達顯著高于無淋巴結轉移者，表明CD105、Ki67蛋白的高表達能較可靠地反映腫瘤增殖活性和速度，其表達水平越高，表明腫瘤細胞增殖越快，越易發(fā)生侵襲和淋巴結轉移。本研究結果提示，CD105、Ki67蛋白可作為EOC分級、分期及判斷淋巴結轉移的參考指標，有助于臨床醫(yī)師選擇腫瘤的治療方法及評估療效和預后。

免疫組化法分析166例卵巢上皮癌組織中CD105和Ki67的表達。結果可見CD105的陽性染色126例(75.9%)，Ki67陽性表達為110例(66.3%)，同一腫瘤樣本里CD105、Ki67兩個都表達的為86/166(51.8%)，且CD105和Ki67表達明顯相關(Spearman's相關指數γ=0.66,P=0.01，P<0.05)。CD105 在病理分級高的腫瘤中過表達，Ki67在進展期腫瘤中過表達，這些發(fā)現提示CD105 和Ki67可作為浸潤性腫瘤的生物標記物，并預示患者的不良預后。同時我們還發(fā)現CD105、Ki67在卵巢癌中過表達與總體不良預后成正相關。

我們的研究結果表明，FIGO分期和腫瘤分級與患者總體存活率顯著相關，CD105 和Ki67表達與較短的總體生存時間顯著相關，且兩者表達在ECO患者的總體生存中為獨立的預后因素。

同樣，我們分析了卵巢上皮癌中CD105/Ki67聯合表達與預后的關系。在CD105/Ki67聯合表達的四個不同狀態(tài)發(fā)現了顯著不同的預后，對CD105-/Ki67-相對有最好的預后，而CD105+/Ki67+患者顯示出最差的預后。在預測卵巢上皮癌的轉歸中，CD105/Ki67聯合表達對于獨立CD105或 Ki67具有更明顯的優(yōu)勢。結果提示CD105、Ki67 蛋白表達可能涉及卵巢上皮癌的發(fā)生發(fā)展。CD105和Ki67 聯合表達可能對于卵巢上皮癌預后的評估有所幫助。

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