郭紹文 劉 坤 胡俊艷 林 昀

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，臨床上主張采用以手術(shù)治療為主、術(shù)后化療為輔的綜合治療，且疾病的控制與復(fù)發(fā)及生存期得到有效改善，但早期診斷仍是提高患者無瘤生存率及生活質(zhì)量的關(guān)鍵[1]。研究已證實(shí)，參與信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)的蛋白多數(shù)屬于癌基因或抑癌基因的產(chǎn)物，而乳腺癌組織的PTEN-PI3K/AKT通路存在異?；罨痆2]，其中第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶和張力蛋白同源基因(PTEN)是迄今發(fā)現(xiàn)唯一1種具有磷酸酶活性抑癌基因，蛋白激酶(AKT)則是1種原癌基因，兩者的異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)[3-4]。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化法檢測(cè)乳腺癌組織及正常組織中PTEN、AKT蛋白的表達(dá)，旨在分析其與乳腺癌臨床病理及預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2009年1月-2011年9月在我院手術(shù)治療的84例乳腺癌患者，臨床病理資料完整，均為女性；年齡41～76歲，平均(54.7±7.3)歲。按美國癌癥聯(lián)合委員會(huì)(AJCC)分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期27例，Ⅱ期26例，Ⅲ期24例，Ⅳ期7例；病理類型：浸潤性導(dǎo)管癌38例，導(dǎo)管內(nèi)癌25例，浸潤小葉癌12例，黏液腺癌9例；腫瘤直徑<3 cm 49例，≥3 cm 35例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移52例。另取我院同期收治的30例乳腺腺瘤患者的乳腺組織作為正常對(duì)照組，年齡40～78歲，平均(51.2±4.3)歲。

1.2 試劑與方法

采用免疫組織化學(xué)三步法，組織標(biāo)本采用10%甲醛固定，石蠟包埋，制作成厚度為4 μm的組織切片，常規(guī)脫蠟、水化、0.01枸櫞酸鹽緩沖液(pH 6.0)抗原熱修復(fù)。PTEN抗體以1∶100稀釋，AKT抗體以1∶75稀釋。兩種抗體均采用試劑盒已知陽性組織作為陽性對(duì)照，以PBS代替一抗體作為陰性對(duì)照。至少有2名富有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師獨(dú)立觀察切片。

兔抗人PTEN免疫組化多克隆抗體、鼠抗人AKT免疫組化單克隆抗體、S-P免疫組化試劑盒均購自美國Santa Cruz生物技術(shù)公司。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

PTEN蛋白表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，AKT蛋白表達(dá)于胞核。隨機(jī)選擇10個(gè)高倍鏡視野(×400)計(jì)數(shù)1 000個(gè)乳腺癌細(xì)胞，采用徐良中[5]的計(jì)分方法，即無著色為0分，著色弱為1分，著色適中為2分，著色深為3分；著色陽性細(xì)胞數(shù)百分比≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，≥51%為3分，上述兩項(xiàng)積分乘積≥3分為陽性，否則為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，采用Pearson相關(guān)進(jìn)行相關(guān)性分析，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌組織及乳腺腺瘤組織中PTEN、AKT蛋白表達(dá)水平比較

乳腺癌組織中PTEN、AKT蛋白陽性表達(dá)率分別為41.7%和66.7%，乳腺腺瘤組織中分別為73.3%和20.0%，兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=17.32，19.41，P<0.05)，見表1。

表1 乳腺癌組織與乳腺腺瘤組織中PTEN、AKT蛋白表達(dá)水平比較/例

2.2 乳腺癌組織中PTEN、AKT表達(dá)及與其臨床病理參數(shù)的關(guān)系

PTEN陽性表達(dá)與乳腺癌腫瘤TNM臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P<0.05)，而與患者年齡、腫瘤直徑、病理類型無關(guān)(P>0.05)。AKT陽性表達(dá)與乳腺癌TNM臨床分期、腫瘤直徑及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P<0.05)，而與患者年齡、腫瘤病理類型無關(guān)(P>0.05)，見表2。

2.3 乳腺癌組織中PTEN與AKT蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析

經(jīng)Pearson相關(guān)性分析顯示，乳腺癌組織中PTEN與AKT蛋白表達(dá)呈線性負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)γ=-0.752(P<0.05)。

2.4 PTEN和AKT蛋白表達(dá)與乳腺癌預(yù)后的關(guān)系

PTEN、AKT蛋白陽性表達(dá)與陰性表達(dá)患者術(shù)后1年生存率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；PTEN蛋白陽性表達(dá)患者術(shù)后2年生存率明顯高于陰性表達(dá)患者，而AKT蛋白陽性表達(dá)患者術(shù)后2年生存率明顯低于陰性表達(dá)患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

3 討論

近年來，研究認(rèn)為乳腺癌是1種涉及多種基因的激活與抑癌基因的失活的基因疾病，且針對(duì)其病因及誘發(fā)因素等研究較多?；虻耐蛔?、缺失與信號(hào)蛋白的異常表達(dá)對(duì)乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后具有重要的作用。PI3K/AKT作為調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖的重要細(xì)胞信號(hào)通路，可激活生存信號(hào)，保持細(xì)胞活性，從而有效控制正常血管生長與腫瘤血管形成[6]。在正常組織中，PTEN蛋白可抑制PI3K/AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活性，而惡性腫瘤中PTEN 蛋白的表達(dá)水平下調(diào)或缺失，進(jìn)而造成AKT磷酸化水平升高，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、粘附和轉(zhuǎn)移[7]。目前關(guān)于PTEN、AKT的表達(dá)與乳腺癌的相關(guān)性鮮有報(bào)道，且在乳腺癌中 PTEN與AKT的關(guān)系國內(nèi)也尚未見報(bào)道。

表2 乳腺癌組織中PTEN、AKT表達(dá)與其臨床病理參數(shù)的關(guān)系/例

注：與Ⅰ、Ⅱ期比較，*為P<0.05；與有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比較，*為P<0.05；與腫瘤直徑<3 cm比較，*為P<0.05。

表3 PTEN與AKT蛋白表達(dá)與乳腺癌患者生存率的關(guān)系(例，%)

注：與陰性表達(dá)者比較，*為P<0.05。

本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化法對(duì)84例乳腺癌組織中PTEN、AKT蛋白的表達(dá)研究發(fā)現(xiàn)，與乳腺腺瘤組織比較，乳腺癌組織中PTEN蛋白的陽性表達(dá)率顯著降低、AKT蛋白的表達(dá)率顯著升高(P<0.05)，推測(cè)PTEN、AKT參與了乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展。有研究指出，PTEN蛋白表達(dá)降低并非完全由于PTEN基因突變或缺失所致，啟動(dòng)子甲基化等基因外機(jī)制也可使PTEN表達(dá)減少，而翻譯后的異常調(diào)控也會(huì)出現(xiàn)PTEN蛋白降解[8]。本研究中，乳腺癌組織中PTEN陽性率隨乳腺癌腫瘤TNM臨床分期增高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移而降低；AKT陽性率隨乳腺癌TNM臨床分期增高、腫瘤直徑增加、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移而增高(P<0.05)，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，PTEN、AKT在乳腺癌組織之間均呈明顯負(fù)相關(guān)(γ=-0.752，P<0.05)，再次驗(yàn)證了乳腺癌患者PTEN、AKT協(xié)同介導(dǎo)PI3K/AKT途徑通路異常致使乳腺癌形成的可能性，并促進(jìn)了其浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[9-10]。Capodanno等[11]研究發(fā)現(xiàn)，PTEN陽性表達(dá)率為27.3%，且與乳腺癌臨床TNM分期、組織學(xué)分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有顯著相關(guān)性，同時(shí)多因素分析也顯示，PTEN低表達(dá)與乳腺癌患者的不良預(yù)后有關(guān)。

通過對(duì)乳腺癌患者的隨訪發(fā)現(xiàn)，術(shù)后2年，PTEN蛋白陽性表達(dá)患者的生存率(77.1%)，明顯高于陰性表達(dá)患者61.2%，而AKT蛋白陽性表達(dá)患者的生存率85.7%，則明顯低于陰性表達(dá)患者64.3%(P<0.05)，表明兩者異常表達(dá)與乳腺癌癌的侵襲轉(zhuǎn)移及預(yù)后有關(guān)。有學(xué)者[12]對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤的研究也得出相似的結(jié)果，高表達(dá)AKT蛋白的膠質(zhì)瘤患者5年生存率明顯降低，AKT蛋白是膠質(zhì)瘤獨(dú)立的預(yù)后因子。

綜上所述，PI3K/AKT信號(hào)途徑可能參與了乳腺癌的發(fā)生與惡性進(jìn)展，PTEN的表達(dá)缺失導(dǎo)致AKT的過度表達(dá)，PTEN、AKT蛋白表達(dá)的檢測(cè)可能有助于預(yù)測(cè)乳腺癌的預(yù)后；同時(shí)，以PTEN/I3K/AKT信號(hào)通路為靶點(diǎn)的分子靶向有望為乳腺癌治療提供新的思路。

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