江 凡, 鄒建話, 張修發(fā)

(廣東省深圳市寶安區(qū)婦幼保健院 檢驗(yàn)科, 廣東 深圳, 518133)

血糖是臨床上診斷和治療糖代謝異常和糖尿病重要的監(jiān)測(cè)指標(biāo)之一，準(zhǔn)確測(cè)定血糖水平對(duì)臨床判斷病情和治療非常重要。目前檢測(cè)血糖的方法有很多種，常見的有葡萄糖己糖激酶(HK)法、葡萄糖氧化酶(GOD)法、葡萄糖脫氫酶電極(GDH-NAD+-PQ)法和葡萄糖氧化酶電極(GOD-electrode)法，以及微芯片電泳法[1]等，不同的檢測(cè)方法各有優(yōu)缺點(diǎn)[2]，靈敏度、穩(wěn)定性和抗干擾能力也各不相同，一些因素可干擾血糖檢測(cè)結(jié)果，這些因素包括血清標(biāo)本、檢測(cè)試劑、設(shè)備和一些藥物使用等，所以研究血糖測(cè)定的干擾因素對(duì)于減少誤診率有重要意義[3]。還原型谷胱甘肽(GSH)是人類細(xì)胞質(zhì)中自然合成的一種肽，由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸組成，參與體內(nèi)三羧酸循環(huán)及糖代謝，是臨床上常用的肝損害和放化療的輔助藥物，由于GSH能激活多種酶，比如巰基酶等，會(huì)干擾血糖檢測(cè)結(jié)果，影響病情和療效的判斷，甚至造成誤診。本研究通過(guò)體外添加GSH實(shí)驗(yàn)體系對(duì)4種血糖檢測(cè)方法結(jié)果進(jìn)行分析，研究GSH對(duì)血糖檢測(cè)方法的干擾作用，尋找最佳檢測(cè)方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集本院體檢中心40例健康體檢者血清，其中男24名，女16名，年齡28～37歲，平均(30.6±4.5)歲。排除糖代謝異常、糖尿病、肝臟疾病及內(nèi)分泌等相關(guān)疾病，在上午8～9點(diǎn)空腹抽靜脈血，血清標(biāo)本無(wú)溶血，無(wú)脂血等。所有對(duì)象均在知情同意原則下參與本項(xiàng)目研究。

1.2 方法

1.2.1 血糖檢測(cè)方法：方法A采用HK法，儀器為羅氏公司P800全自動(dòng)生化分析儀，配套羅氏公司葡萄糖試劑和室內(nèi)質(zhì)控品；方法B采用GOD法，儀器為羅氏公司P800全自動(dòng)生化分析儀，配套羅氏公司葡萄糖試劑和室內(nèi)質(zhì)控品；方法C采用采用葡萄糖脫氫酶電極法，血糖儀為美國(guó)Q公司生產(chǎn)，配套美國(guó)Q公司試劑及室內(nèi)質(zhì)控品；方法D采用葡萄糖氧化酶電極法，檢測(cè)血糖儀為德國(guó)S公司，配套德國(guó)S公司試劑及室內(nèi)質(zhì)控品。四種方法的試驗(yàn)步驟均嚴(yán)格按照試劑的要求進(jìn)行操作和質(zhì)控。

1.2.2 GSH干擾試驗(yàn)：根據(jù)臨床上GSH注射液的常用使用濃度，將試驗(yàn)濃度定為6 mg/mL。還原型谷胱甘肽注射劑(1.2 g/瓶),由上海復(fù)旦復(fù)華藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。試驗(yàn)步驟：將1.2 g GSH用24 mL生理鹽水溶解配成50 mg/mL的貯存液，取檢測(cè)血清1.0 mL，平分為2管各0.5 mL, 試驗(yàn)管加60 μL 50 mg/mL GSH貯存液，對(duì)照管加60 μL生理鹽水，分別采用A、B、C、D四種方法同時(shí)檢測(cè)試驗(yàn)管和對(duì)照管的血糖濃度，2次檢測(cè)結(jié)果取均值為該標(biāo)本的最終血糖濃度。

1.2.3 GSH劑量響應(yīng)試驗(yàn)：試驗(yàn)步驟：取1份血糖濃度為6.1 mmol/L(醫(yī)學(xué)決定水平濃度)的血清，平均分為2管，試驗(yàn)管加60 μL 50 mg/mL還原型谷胱甘肽貯存液(標(biāo)本5)，對(duì)照管加60 μL生理鹽水(標(biāo)本1)，分別取標(biāo)本1和標(biāo)本5各200 μL混合(標(biāo)本3)，分別取標(biāo)本1和標(biāo)本3各100 μL混合(標(biāo)本2)，分別取標(biāo)本3和標(biāo)本5各100 μL混合(標(biāo)本4)，參考美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)EP7-A2文件[4]操作。標(biāo)本1～5中還原型谷胱甘肽濃度見表2，分別采用A、B、C、D四種方法同時(shí)檢測(cè)標(biāo)本1～5，每管測(cè)3次(測(cè)試順序：先升序→降序→升序)，結(jié)果取均值。

2 結(jié) 果

2.1 GSH對(duì)4種血糖檢測(cè)方法結(jié)果的影響

采用4種方法檢測(cè)試驗(yàn)管和對(duì)照管的血糖濃度分別為: A法: (5.3±1.1)、(5.3±1.1); B法：(3.3±1.6)、(5.2±1.2); C法：(5.9±1.8)、(5.8±1.7); D法：(8.2±2.1)、(6.4±1.8)，采用方法A和C檢測(cè)的試驗(yàn)管和對(duì)照管的血糖濃度經(jīng)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。B法檢測(cè)的試驗(yàn)管血糖結(jié)果顯著低于對(duì)照管(P<0.01), D法檢測(cè)是試驗(yàn)管血糖結(jié)果顯著高于對(duì)照管(P<0.01)。見表1。

表1 GSH對(duì)4種血糖檢測(cè)方法結(jié)果的影響

2.2 4種血糖檢測(cè)方法的劑量響應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果

隨著GSH濃度升高4種方法檢測(cè)血糖值差異較大, A法和C法檢測(cè)血糖結(jié)果相對(duì)穩(wěn)定, B方法測(cè)量血糖濃度呈現(xiàn)逐漸降低趨勢(shì), D方法呈現(xiàn)逐漸升高趨勢(shì)。見表2。

表2 4種血糖檢測(cè)方法的劑量響應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果

3 討 論

有研究[5]指出取血前詢問(wèn)用藥史，要高度重視某些藥物對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。還原型谷胱甘肽(GSH)是含有巰基的三肽，具有抗氧化和整合解毒作用，廣泛應(yīng)用于臨床，除了利用其巰基以螯合重金屬、氟化物、芥子氣等毒素中毒外，還常用于肝炎、溶血性疾病以及角膜炎、白內(nèi)障和視網(wǎng)膜等疾病治療，以及作為放化療的輔助藥物。GSH是甘油醛磷酸脫氫酶、乙二醛酶和丙糖脫氫酶的輔酶，參與體內(nèi)三羧酸循環(huán)及糖代謝，并能激活多種酶，促進(jìn)糖、脂肪和蛋白質(zhì)代謝，由于其半胱氨酸上的巰基為活性基團(tuán)，決定了其對(duì)酶學(xué)試驗(yàn)可能存在的干擾作用。本研究結(jié)果顯示,采用A和C法檢測(cè)的試驗(yàn)管和對(duì)照管的血糖濃度經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05), B法試驗(yàn)管血糖濃度顯著低于對(duì)照管(P<0.01), D法試驗(yàn)管血糖濃度顯著高于對(duì)照管(P<0.01), 證實(shí)血清中GSH存在可干擾血糖檢測(cè)濃度，這種干擾作用導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果差異較大，己糖激酶法和GDH-NAD+-PQ法對(duì)GSH抗干擾力強(qiáng)，適合GSH使用患者的血糖檢測(cè)，GOD法易受GSH干擾出現(xiàn)假性高血糖和低血糖。在檢測(cè)血糖前檢驗(yàn)人員一定要關(guān)注患者使用的藥物對(duì)于血糖結(jié)果的干擾，對(duì)于使用了GSH的患者時(shí)宜選擇己糖激酶法檢測(cè)血糖，盡量避免選擇葡萄糖氧化酶法，檢測(cè)報(bào)告注明血糖檢測(cè)方法學(xué)對(duì)于醫(yī)生判斷結(jié)果也十分重要。對(duì)特別低和特別高的結(jié)果要了解患者用藥情況后，才可做出判斷，必要時(shí)重復(fù)測(cè)定。導(dǎo)致上述結(jié)果的確切機(jī)制尚不十分清楚，可能與下列因素密切相關(guān)。由于己糖激酶法的特點(diǎn)為對(duì)外界抗干擾能力強(qiáng)，輕度溶血、脂血、維生素C、EDTA等因素有較強(qiáng)的抗干擾能力，不會(huì)影響血糖測(cè)定結(jié)果[6], 本試驗(yàn)也顯示己糖激酶法對(duì)GSH同樣具有良好的抗干擾能力。葡萄糖氧化酶法導(dǎo)致血糖結(jié)果偏低的原因與Trinder反應(yīng)的底物H2O2易被GSH還原物質(zhì)競(jìng)爭(zhēng)性消耗所致。由于電極法主要是通過(guò)反應(yīng)過(guò)程中電子轉(zhuǎn)移產(chǎn)生的電流大小來(lái)測(cè)定血糖，而葡萄糖脫氫酶電極法只需用較低的電壓(200 mv)就可啟動(dòng)反應(yīng)，此電壓尚未使GSH激發(fā)釋放出電子，所以葡萄糖脫氫酶電極法檢測(cè)結(jié)果相對(duì)穩(wěn)定。葡萄糖氧化酶電極法，則需用較高的電壓(400 mv)啟動(dòng)反應(yīng)，可能較高的工作電壓使GSH自身激發(fā)釋放出電子，產(chǎn)生更多的電流，使檢測(cè)值偏高出現(xiàn)假性高血糖[7]。通過(guò)劑量響應(yīng)試驗(yàn)可以看出隨著GSH濃度升高采用A法和C法檢測(cè)血糖值相對(duì)穩(wěn)定，B方法測(cè)量血糖濃度呈現(xiàn)逐漸降低趨勢(shì)，D方法呈現(xiàn)逐漸升高趨勢(shì)，提示GSH對(duì)GOD法測(cè)定的血糖結(jié)果有顯著的負(fù)干擾作用，對(duì)氧化酶電極法測(cè)定的血糖結(jié)果有顯著的正干擾作用，同時(shí)存在劑量干擾效應(yīng)，即濃度越高，干擾效力越大。

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