任富亮 宋少偉

近年來胰腺癌的發(fā)病率明顯上升，早期確診率不高，而中晚期常有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致手術(shù)切除率低，病死率高。磷脂酶Cε1(phospholipase C epsilon 1,PLCε1)是近年來發(fā)現(xiàn)的PLC家族的新成員，在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程起調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化等作用。近年來發(fā)現(xiàn)PLCεl與腫瘤(結(jié)直腸癌、胃癌、食管癌)、炎癥、心肌肥大、腎病綜合征等多種疾病有關(guān)[1-8]。目前尚未見PLCε1與胰腺癌關(guān)系的研究報(bào)道。本研究檢測(cè)胰腺癌的PLCε1基因表達(dá)，分析PLCε1的表達(dá)與胰腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系，為胰腺癌的診治及預(yù)后提供新思路。

一、材料與方法

1．臨床資料：收集2005年1月至2013年12月中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科保存的86例手術(shù)切除的胰腺導(dǎo)管腺癌(PDAC)石蠟塊。所有患者的臨床資料完整，且均包括癌組織及配對(duì)的癌旁正常組織。86例患者中男性64例，女性22例；年齡34～81歲，中位年齡58歲；腫瘤分化程度：高分化30例，中分化39例，低分化17例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者26例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者60例；隨訪至2014年底，8例失訪，16例存活，62例死亡。

2．PLCε1蛋白檢測(cè)：采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)胰腺組織PLCε1蛋白表達(dá)。兔抗人PLCε1多抗購自美國(guó)ABCAM公司。由病理科醫(yī)師盲法讀片，參考Sung等[9]標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分。

每張切片在400倍顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)算陽性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)及染色強(qiáng)度。陽性細(xì)胞數(shù)1%～24%計(jì)1分，25%～49%計(jì)2分，50%～74%計(jì)3分，≥75%計(jì)4分；無著色0分，淺黃色1分，黃色或深黃色2分，褐色或棕褐色3分。兩項(xiàng)得分相乘，≥4分為高表達(dá)，<4分為低表達(dá)。

3．統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS19.0(statistical package for social science)軟件行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。配對(duì)的癌與癌旁組織蛋白表達(dá)比較及PLCε1蛋白表達(dá)水平與腫瘤臨床病理參數(shù)的關(guān)系采用χ2檢驗(yàn)。累積生存率采用Kaplan-Meier法單因素分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

1．胰腺癌組織和癌旁組織PLCε1蛋白表達(dá)：PLCε1蛋白主要表達(dá)于胰腺導(dǎo)管細(xì)胞的胞質(zhì)(圖1)。86例PDAC患者中49例(57.0%)PLCε1蛋白高表達(dá)，配對(duì)的86例癌旁組織中僅18例(20.9%)高表達(dá)，胰腺癌組織的表達(dá)顯著高于癌旁組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=23.496，P=0.000)。

圖1 胰腺癌癌組織(a)及癌旁組織(b)中PLCε1蛋白的表達(dá)(免疫組化 ×200)

2．PLCε1蛋白表達(dá)與胰腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系：PLCε1蛋白表達(dá)水平與腫瘤大小、術(shù)前血CA19-9水平、術(shù)后肝轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(P值均<0.01)。而與患者年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤分化程度、浸潤(rùn)深度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管浸潤(rùn)、神經(jīng)浸潤(rùn)均無明顯相關(guān)性(表1)。

表1 胰腺癌PLCε1蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3．PLCε1蛋白表達(dá)與胰腺癌患者術(shù)后生存期的關(guān)系：PLCε1蛋白高表達(dá)的胰腺癌患者術(shù)后中位生存時(shí)間為290 d，低表達(dá)者為655 d，高表達(dá)者的預(yù)后較低表達(dá)者差，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=15.089，P<0.01，圖2)。

圖2 胰腺癌患者的生存曲線

討論P(yáng)LCε1可以被激素、神經(jīng)遞質(zhì)、生長(zhǎng)因子等激活，水解磷脂酰肌醇4,5-二磷酸(phosphatidylinosital biphosphate, PIP2)產(chǎn)生三磷酸肌醇(inositol triphosphate, IP3)和二脂酰甘油(diacylglycerol, DAG)等第二信使。IP3可引起細(xì)胞內(nèi)儲(chǔ)存的大量Ca2+釋放，DAG則激活蛋白激酶C，使信號(hào)傳遞下去，參與細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、分化和凋亡等過程[1,10]。研究報(bào)道，PLCε1在結(jié)直腸癌是抑癌基因[3-4]，在胃癌、食管癌、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌是癌基因[5-9]，在非小細(xì)胞肺癌中PLCε1高表達(dá)能夠抑制癌細(xì)胞的p53的表達(dá)[11]。Wu等[12]采用全基因組關(guān)聯(lián)分析技術(shù)證實(shí)PLCε1基因?yàn)橹袊?guó)漢族食管鱗癌的易感基因。Hinkes等[13]發(fā)現(xiàn)，PLCε1的突變可導(dǎo)致嚴(yán)重的腎病綜合征，病理特點(diǎn)是彌漫性腎小球硬化和局灶性節(jié)段性腎小球硬化，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)PLCε1與家族性腎病綜合征有密切關(guān)系[14]。

本研究結(jié)果表明，PLCε1蛋白在胰腺癌組織中高表達(dá)，與文獻(xiàn)報(bào)道的胃癌，食管癌中高表達(dá)的結(jié)果一致。本研究結(jié)果還顯示，胰腺癌PLCεl蛋白高表達(dá)與腫瘤大小、術(shù)前CA19-9水平、術(shù)后肝轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，而與患者的發(fā)病年齡、性別、腫瘤部位、分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管浸潤(rùn)、神經(jīng)浸潤(rùn)均無明顯相關(guān)性；PLCε1高表達(dá)患者的預(yù)后差于低表達(dá)患者。因本組病例數(shù)有限，尚需通過增大樣本量以獲得進(jìn)一步的驗(yàn)證。

參 考 文 獻(xiàn)

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