劉 波，盧曉麗，周曉英

（新疆醫(yī)科大學(xué)1中醫(yī)學(xué)院，2藥學(xué)院，烏魯木齊 830011）

松補(bǔ)力口服液由甘松單味藥組成。該方收載于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·維吾爾藥分冊(cè)》，其具有養(yǎng)心、安神、增強(qiáng)胃功能的功效，用于治療心悸、神經(jīng)衰弱、腹痛、胃病等疾病的口服液體制劑［1］。

植物多酚類(lèi)化合物在自然界分布廣泛，具有抗氧化、清除自由基、與金屬離子發(fā)生絡(luò)合、與蛋白質(zhì)形成多種生理學(xué)活性物質(zhì)［2］，是有效的腫瘤化學(xué)預(yù)防劑［3］，有些多酚類(lèi)化合物本身也具有抗腫瘤作用［4］。

在《中國(guó)藥典》［5］2010版中僅對(duì)甘松藥材進(jìn)行了甘松新酮的薄層鑒別，原標(biāo)準(zhǔn)中沒(méi)有對(duì)松補(bǔ)力口服液進(jìn)行總多酚及總多糖的含量測(cè)定。為了完善該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，更好地控制該產(chǎn)品質(zhì)量，本研究對(duì)松補(bǔ)力口服液中的總多酚及總多糖含量進(jìn)行測(cè)定，建立測(cè)定方法，以控制其質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 U－3310紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本株式會(huì)社日立高新技術(shù)），KQ2200DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），AL204電子天平（梅特勒－托利多儀器有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料 原料：10批不同批號(hào)甘松制備的松補(bǔ)力口服液。試劑：5%亞硝酸鈉溶液、10%硝酸鋁溶液、4%氫氧化鈉溶液、鎢酸鈉、鉬酸鈉、磷酸、濃鹽酸、硫酸鋰、雙氧水、甲醇均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為自制蒸餾水。沒(méi)食子酸對(duì)照品（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，含量99%），無(wú)水萄萄糖（上海實(shí)驗(yàn)試劑有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 試劑的制備 福林酚試劑的制備［6］：稱(chēng)取鎢酸鈉100.0g、鉬酸鈉25.0g，用700mL蒸餾水溶解于圓底燒瓶中，加入磷酸（≥85%）50mL和100mL濃鹽酸充分混勻，小火加熱回流12h，放冷，再加入150g硫酸鋰、50mL蒸餾水及0.2mL雙氧水，開(kāi)口繼續(xù)沸騰15min，使得雙氧水完全揮發(fā)，冷卻后用蒸餾水定容至1000mL，過(guò)濾，于棕色瓶中避光儲(chǔ)存。試液應(yīng)呈亮黃色，如放置后變?yōu)榫G色，可加雙氧水0.2mL，煮沸15min即可。

對(duì)照品儲(chǔ)備溶液制備：精密稱(chēng)取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品0.03004g置100mL容量瓶中，用蒸餾水定容，制成濃度為0.3mg／mL總多糖對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。精密稱(chēng)取0.0101g沒(méi)食子酸對(duì)照品于100mL容量瓶中，用蒸餾水定容，制成濃度為0.101mg／mL總多酚對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。

2.2 供試品制備

2.2.1 總多酚供試品溶液制備 取口服液3mL用水稀釋到100mL并定容。取2.0mL加4.0mL水，然后加0.5mL福林酚試劑，最后加1.5mL的20%Na2CO3混勻，加水定容，75℃加熱10min，備用。

2.2.2 總多糖供試品溶液制備 取口服液10mL加30mL無(wú)水乙醇過(guò)夜，離心。分別用無(wú)水乙醇、丙酮洗3次，每次10mL。濾渣加適量水溶解，并定容到100mL，取5.0mL定容到10mL，備用。

2.3 最大吸收波長(zhǎng)的確定 準(zhǔn)確吸取2mL總多酚對(duì)照品儲(chǔ)備溶液于25mL容量瓶中，分別加入18mL蒸餾水、福林酚試劑1.5mL，用20%Na2CO3定容，于75℃水浴加熱10min，以蒸餾水為空白，在600～800nm波長(zhǎng)處掃描其吸光度，結(jié)果表明沒(méi)食子酸在760nm處有強(qiáng)吸收峰，故選擇760nm作為總多酚的測(cè)定波長(zhǎng)。

準(zhǔn)確吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液5mL，置25mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為對(duì)照品稀釋液。精密移取對(duì)照品稀釋液1mL，置于具塞試管中，加入新鮮配制的0.2% 蒽酮－硫酸試液4mL，迅速浸于冰水浴中冷卻后放入熱水浴中，管口加蓋玻璃塞，以防蒸發(fā)，準(zhǔn)確煮沸10min取出，自來(lái)水冷卻。室溫放置10min，以試劑空白為參比，在400～800 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。精密移取1mL供試品溶液置于10mL具塞試管中，按上法操作，在400～800nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。對(duì)照品溶液與供試品溶液均在610nm處有最大吸收。

2.4 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

2.4.1 總多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制 精密量取對(duì)照品溶液0.5、1、2、3、4、5mL，分別置10mL容量瓶中，各加水稀釋至刻度。分別取上述溶液各2mL，置10mL容量瓶中，分別加4mL水、0.5mL福林酚試劑，搖勻，加1.5mL20%Na2CO3溶液，搖勻，加水稀釋至刻度，75℃水浴加熱10min，取出放冷。照紫外－可見(jiàn)光分光光度法（中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅤA），在760nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以濃度為橫坐標(biāo)，吸收度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。計(jì)算回歸方程Y＝0.1181 X＋0.0208（r＝0.9991），在線(xiàn)性范圍0.913～9.130μg／mL范圍內(nèi)吸收度呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.4.2 總多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制 取葡萄糖對(duì)照品儲(chǔ)備溶液0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5mL分別置于10mL量瓶中，加水至刻度。分別取上述溶液1mL置10mL具塞試管中，各加0.2%蒽酮－硫酸試液4mL，搖勻后迅速浸于冰水浴中冷卻，各管冷卻后一起置沸水浴中加熱10min取出，自來(lái)水冷卻。室溫放置10min，以試劑空白為參比。照紫外－可見(jiàn)光分光光度法（中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅤA），在610nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以濃度為橫坐標(biāo)，吸收度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。計(jì)算回歸方程Y ＝7.2167 X＋0.0719（r＝0.999），在0.015～0.105mg／mL范圍內(nèi)吸收度呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密取同一份供試品溶液，分別在0、10、20、40、80、160min按照“2.4.1”方法顯色后測(cè)定吸光度值。計(jì)算得到松補(bǔ)力口服液總多酚的RSD為0.68%，表明供試品溶液在160min內(nèi)顯色穩(wěn)定。精密取同一份供試品溶液，分別在0、10、20、40、80、160min按照“2.4.2”方法顯色后測(cè)定吸光度值。計(jì)算得到松補(bǔ)力口服液總多糖的RSD為0.14%，表明供試品溶液在160min內(nèi)顯色穩(wěn)定。

2.5.2 精密度試驗(yàn) 取6份總多酚對(duì)照品溶液，每份2mL，按照“2.4.1”方法顯色后測(cè)定吸光度值，計(jì)算得到松補(bǔ)力口服液總多酚的RSD為0.76%，說(shuō)明該方法測(cè)定松補(bǔ)力口服液總多酚精密度良好。取6份總多糖對(duì)照品溶液，每份1mL，按照“2.4.2”方法顯色后測(cè)定吸光度值，計(jì)算得到松補(bǔ)力口服液總多糖的RSD為0.72%，說(shuō)明該方法測(cè)定松補(bǔ)力口服液總多糖精密度良好。

2.5.3 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批松補(bǔ)力口服液樣品6份，分別按照“2.2.1”方法制成總多酚供試品溶液，每份精密吸取2mL，按照“2.4.1”方法顯色后測(cè)定吸光度值，計(jì)算得到RSD為1.05%，表明該方法測(cè)定松補(bǔ)力口服液中總多酚的含量重現(xiàn)性良好。取同一批松補(bǔ)力口服液樣品6份，分別按照“2.2.2”方法制成總多糖供試品溶液，每份精密吸取1mL，按照“2.4.2”方法顯色后測(cè)定吸光度值，計(jì)算得到RSD為1.28%，表明該方法測(cè)定松補(bǔ)力口服液中總多糖的含量重現(xiàn)性良好。

2.5.4 加樣回收率試驗(yàn) 測(cè)定已知總多酚含量的松補(bǔ)力口服液6份，加沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品適量，各取2mL，按照“2.4.1”方法顯色后測(cè)定吸光度值，并計(jì)算平均回收率。平均加樣回收率為98.2%，RSD為1.64%，結(jié)果見(jiàn)表1。測(cè)定已知總多糖含量的松補(bǔ)力口服液6份，加葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品適量，各取1mL，按照“2.4.2”方法顯色后測(cè)定吸光度值，并計(jì)算平均回收率。平均回收率為96.62%，RSD為1.0%，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 松補(bǔ)力口服液中總多酚的回收率

表2 松補(bǔ)力口服液中總多糖的回收率

2.6 樣品測(cè)定

2.6.1 松補(bǔ)力口服液10批總多酚的含量測(cè)定 取松補(bǔ)力口服液各3份，每份取3mL用水稀釋到

100mL并定容。按照“2.4.1”方法顯色后在760 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，計(jì)算松補(bǔ)力口服液中總多酚含量。10批松補(bǔ)力口服液總多酚的平均含量為0.617mg／mL。結(jié)果見(jiàn)表3。

2.6.2 松補(bǔ)力口服液10批總多糖的含量測(cè)定 取松補(bǔ)力口服液各3份，每份取10mL加30mL無(wú)水乙醇過(guò)夜，離心。分別用無(wú)水乙醇、丙酮洗3次，每次10mL。濾渣加適量水溶解，并定容到100mL，取5.0mL定容到10mL。按照“2.4.2”方法顯色后在610nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，計(jì)算松補(bǔ)力口服液中總多酚含量。10批松補(bǔ)力口服液總多糖的平均含量為1.216mg／mL結(jié)果見(jiàn)表4。

表3 10批不同批次藥材制成口服液總多酚含量（n＝3）

表4 10批不同批次藥材制成口服液總多糖含量

3 結(jié)論

本研究結(jié)果表明松補(bǔ)力口服液中總多酚、總多糖的含量較高。經(jīng)查閱文獻(xiàn)［6－12］確定采用本實(shí)驗(yàn)方法，簡(jiǎn)單易行，重現(xiàn)性好，結(jié)果可靠穩(wěn)定，可作為松補(bǔ)力口服液總多酚和總多糖的檢測(cè)方法。

本研究收集10批松補(bǔ)力口服液進(jìn)行測(cè)定，總多糖含量相對(duì)于總多酚含量較高，但是總多糖含量測(cè)定方法沒(méi)有總多酚的測(cè)定方法穩(wěn)定，對(duì)于松補(bǔ)力口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)的提高還需進(jìn)行相關(guān)的實(shí)驗(yàn)測(cè)定，以便建立科學(xué)的松補(bǔ)力口服液質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。

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