郭英惠，穆葉賽·尼加提，買買提祖農(nóng)·買蘇爾，李國(guó)慶，阿布拉江·阿木提

（1新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室，烏魯木齊 830011；新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院2心內(nèi)科，3心外科，烏魯木齊 830000）

急性冠脈綜合征（Acute coronary syndrome，ACS）是一種由于冠狀動(dòng)脈粥樣硬化引起的一種基本生理特點(diǎn)的疾?。?－2］，ACS是以急性心肌缺血為主要特征的疾病［3］。目前隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)水平的快速增長(zhǎng)，人們的飲食水平發(fā)生著明顯轉(zhuǎn)變，高脂、高鹽等飲食導(dǎo)致了ACS的發(fā)病率逐年增加，但目前ACS的發(fā)生的分子機(jī)制并不清楚［4－5］。隨著研究的發(fā)展，研究者們發(fā)現(xiàn)粥樣斑塊中除了組織因子外，還存在著細(xì)胞微粒（microparticles，MPs），其中內(nèi)皮細(xì)胞微粒（endothelial microparticles，EMPs）是血管內(nèi)皮受損后釋放出來(lái)的內(nèi)皮特異的標(biāo)志物。有研究顯示，內(nèi)皮細(xì)胞微粒對(duì)炎癥、凝血及血管功能等方面具有一定的影響［6］，是血管內(nèi)皮細(xì)胞功能異常的良好標(biāo)記物，其水平的高低與心血管疾病的發(fā)生有密切聯(lián)系。研究證實(shí)，EMPs水平在內(nèi)毒素血癥、血小板減少性紫癜、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、高血壓、糖尿病等多種疾病中明顯升高。新疆維吾爾自治區(qū)地處西北，是以維吾爾族（維族）為主的多民族居住區(qū)，飲食上主要以肉類為主，基本上都以高脂、高蛋白、高鹽飲食為主。不同民族由于宗教、文化、飲食、遺傳等不同，從而許多疾病的發(fā)生的機(jī)率及機(jī)制可能存在一定的差異。本研究采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)維、漢族ACS患者內(nèi)皮細(xì)胞微粒含量，旨在探討維吾爾族（維族）、漢族ACS患者內(nèi)皮細(xì)胞微粒的表達(dá)水平及常規(guī)確認(rèn)的ACS高危因素血脂、體質(zhì)指數(shù)之間的關(guān)系，為臨床輔助診斷ACS及經(jīng)皮冠脈介入治療（PCI）預(yù)后進(jìn)行指導(dǎo)提供參考資料，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年1月－2013年8月在新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院心內(nèi)科住院的ACS患者100例（維、漢族各50例）作為病例組，其中男性56例，女性44例；合并高血壓41例，合并糖尿病6例；年齡45～66歲，平均（55.9±10.2）歲。同時(shí)選取健康體檢者100例（維、漢族各50例）作為對(duì)照組，其中男性50例，女性50例；34例患有高血壓，5例患有糖尿??；年齡45～65歲，平均（55.1±10.2）歲。兩組基線資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。急性冠脈綜合征患者包括急性心肌梗死（AMI）和不穩(wěn)定性心絞痛（UAP）患者。診斷標(biāo)準(zhǔn)：（1）UAP為近1個(gè)月內(nèi)新發(fā)的心絞痛或1個(gè)月內(nèi)心絞痛惡化加重（心絞痛分級(jí)至少增加1級(jí)，或至少達(dá)到Ⅲ級(jí)，CCS分級(jí)），以及休息時(shí)發(fā)作的心絞痛，心電圖有至少2個(gè)相鄰導(dǎo)聯(lián)出現(xiàn)新的或動(dòng)態(tài)的ST段或T波改變，心臟肌鈣蛋白T（cTnT）檢查正常。（2）AMI為胸痛持續(xù)時(shí)間＞20min，起病在24h內(nèi)，心電圖有至少2個(gè)相鄰導(dǎo)聯(lián)出現(xiàn)ST段抬高或壓低，cTnT＞0.1μg／L。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）嚴(yán)重肝腎功能不全；（2）腫瘤以及其他消耗性疾病；（3）造血系統(tǒng)疾病；（4）感染未控制；（5）其他部位梗塞（如腦梗塞、肺栓塞等）。

1.2 血液樣本的收集 所有受試對(duì)象均在清晨空腹靜息狀態(tài)下進(jìn)行外周血采集，每位受試者都分別用2個(gè)采血管采集肘靜脈血5mL，用于檢測(cè)細(xì)胞微粒表達(dá)水平以及血清學(xué)指標(biāo)（血脂）含量。內(nèi)皮細(xì)胞微粒水平的采血管用枸櫞酸鈉抗凝管收集血液，為防治因針刺損傷脫落的內(nèi)皮細(xì)胞摻入血漿中，最初的2mL血液要丟棄。通過(guò)低溫離心機(jī)1000r／min離心5min取上清注入到EP管內(nèi)，再6000r／min離心10 min，取貧血小板血漿（PPP）并將其懸浮到一定量的PBS溶液中，等分到小試管－80℃保存以備測(cè)定。

1.3 血液EMPs含量的檢測(cè) 室溫下溶解PPP取25μL，加入5μL特異性單克隆抗體PE－CD31充分混勻，暗處孵育20min（對(duì)照管中不加熒光抗體，只加PBS溶液）加1mLPBS待測(cè)，在1h內(nèi)上流式細(xì)胞儀檢測(cè)［7］。上機(jī)前流式細(xì)胞儀（EPICS－ALTRA，美國(guó)Beckman Coulter公司）用直徑為0.8μm的標(biāo)準(zhǔn)微球定位設(shè)門，即可測(cè)定CD31的表達(dá)百分率即EMPs的相對(duì)含量。

1.4 血脂的檢測(cè) 空腹采集的5mL靜脈血，分離血清，應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀（DXC－800，美國(guó)Beckman Coulter Unicel）測(cè)定總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL－C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL－C）水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料的統(tǒng)計(jì)描述使用相對(duì)數(shù)，計(jì)數(shù)資料兩組比較使用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料兩組比較使用t檢驗(yàn)，多組比較使用方差分析，變量之間的相關(guān)性檢驗(yàn)使用Pearson相關(guān)；路徑分析使用AMOS graphic進(jìn)行分析，并進(jìn)行模型檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。其中適配度指標(biāo)有：卡方自由度比χ2／df；擬合優(yōu)度／適配度指數(shù) GFI（Goodness－of－fit Index）；調(diào)整后適配度指數(shù) AGFI（Adjusted Goodness－of－fit Index）；漸進(jìn)殘差均方和平方根RMSEA（Root Mean Square Error of Approximation）；標(biāo)準(zhǔn)適配指數(shù)NFI（Normed Fit Index）；比較適配指數(shù)CFI（Comparative Fit Index）；臨界樣本數(shù)CN（Critical N）；赤池信息準(zhǔn)則 AIC（Akaike’s Information Criterion）。

2 結(jié)果

2.1 病例組與對(duì)照組內(nèi)皮細(xì)胞微粒的表達(dá)水平比較 維、漢族病例組內(nèi)皮細(xì)胞微粒的表達(dá)水平均明顯高于對(duì)照組 （P＜0.05）。但2個(gè)民族病例組之間以及2個(gè)民族對(duì)照組之間的內(nèi)皮細(xì)胞微粒的表達(dá)水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

2.2 外周血內(nèi)皮細(xì)胞微粒與血脂相關(guān)指標(biāo)的逐步線性回歸 以外周血內(nèi)皮細(xì)胞微粒（EMPs）表達(dá)水平為因變量Y，總膽固醇（X1）、高（X2）／低（X3）密度脂蛋白膽固醇、甘油三酯（X4）作為自變量，進(jìn)行逐步線性回歸，得到回歸方程為Y ＝95.61－4.103 X1－43.262 X2＋4.293 X3＋1.075 X4，得到的方程經(jīng)卡方檢驗(yàn)，內(nèi)皮細(xì)胞微粒的水平與血脂相關(guān)指標(biāo)存在明顯相關(guān)性（P＜0.05），高密度脂蛋白膽固醇含量與EMPs水平間呈明顯負(fù)相關(guān)，血脂相關(guān)指標(biāo)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞微粒的解釋度為86.7%，見(jiàn)表2。

表1 病例組與對(duì)照組內(nèi)皮細(xì)胞微粒的表達(dá)水平比較（%，）

表1 病例組與對(duì)照組內(nèi)皮細(xì)胞微粒的表達(dá)水平比較（%，）

組別 病例組（n＝100） 對(duì)照組（n＝100） t值 P值維族 （n＝50）89.16±23.65 73.48±17.90 2.5460.012漢族 （n＝50） 88.96±15.38 79.47±17.68 4.3720.000 t值 0.456 1.684 P值0.416 0.095

表2 內(nèi)皮細(xì)胞微粒與血脂相關(guān)指標(biāo)的逐步線性回歸

2.3 內(nèi)皮細(xì)胞微粒水平與血脂關(guān)系的路徑分析以外周血內(nèi)皮細(xì)胞微粒（EMPs）表達(dá)水平為因變量Y，總膽固醇（X1）、高（X2）／低（X3）密度脂蛋白膽固醇、甘油三酯（X4）作為自變量，進(jìn)行模型擬合，得到如下路徑圖，路徑分析顯示，內(nèi)皮細(xì)胞微粒的表達(dá)水平主要受高密低脂蛋白的影響，影響度約為84%，見(jiàn)表3。

表3 內(nèi)皮細(xì)胞微粒與血脂相關(guān)指標(biāo)的模型適配度表達(dá)

3 討論

3.1 ACS患者外周血內(nèi)皮細(xì)胞微粒表達(dá)水平增高

3.1.1 細(xì)胞微粒是細(xì)胞受到活化或凋亡時(shí)細(xì)胞膜的完整性受到破壞，胞內(nèi)磷脂酰絲氨酸暴露并從細(xì)胞表膜上脫落下來(lái)，帶有來(lái)源細(xì)胞的表面標(biāo)記和胞漿內(nèi)容物的顆粒，表面主要是由組織因子以及磷脂酰絲氨酸組成，參與凝血過(guò)程。最近研究表明，細(xì)胞微?？梢栽诙喾N生理和病理過(guò)程中起作用，如止血和血栓的形成、炎癥和血管反應(yīng)性，這與其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)和構(gòu)成有關(guān)［8］。研究顯示，細(xì)胞微粒不只是簡(jiǎn)單的細(xì)胞脫落物，而是帶有來(lái)源細(xì)胞多種生物學(xué)特性、具有多種重要的生物學(xué)活化分子的“載體”［9］。內(nèi)皮細(xì)胞受到刺激活化后引起胞質(zhì)中鈣離子增加和細(xì)胞骨架降解是EMPs釋放的主要機(jī)制。EMPs是新近提出的評(píng)價(jià)內(nèi)皮功能障礙的指標(biāo)，是內(nèi)皮細(xì)胞激活與損傷的產(chǎn)物，能直接反映其來(lái)源細(xì)胞的功能狀態(tài)［10］。細(xì)菌脂多糖、炎性反應(yīng)細(xì)胞因子如TNF－a、IL－1、補(bǔ)體復(fù)合物C5b－9、C反應(yīng)蛋白、聚集的低密度脂蛋白及血流剪切力等刺激內(nèi)皮細(xì)胞［11］，使內(nèi)皮細(xì)胞激活產(chǎn)生EMPs。本研究結(jié)果顯示，急性冠脈綜合征患者外周血中內(nèi)皮細(xì)胞微粒的表達(dá)水平要高于對(duì)照組，可以再次證實(shí)EMPs作為一種內(nèi)皮損傷和功能障礙的產(chǎn)物，進(jìn)一步加重內(nèi)皮細(xì)胞功能失調(diào)，在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)生、發(fā)展以及血栓形成的病理生理過(guò)程中起著重要作用。

3.1.2 新疆地區(qū)長(zhǎng)期以來(lái)是冠心病的高發(fā)地區(qū)，流行病學(xué)調(diào)查研究表明這與高鹽、高脂的不良生活方式有關(guān)。不同民族由于宗教、文化、飲食、遺傳等不同，而許多疾病的發(fā)生的機(jī)率及機(jī)制可能存在一定的差異。姚娟等［12］研究表明新疆地區(qū)的高血脂、高血壓患病率明顯升高，急性冠脈綜合癥的發(fā)生率明顯高于其他地區(qū)。在諸多危險(xiǎn)因素中，性別、年齡、民族及遺傳等因素成為了冠心病不可控的危險(xiǎn)因素。目前已明確的各種心血管危險(xiǎn)因素如高血壓、吸煙、糖尿病等都可導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能失調(diào)。許多心血管危險(xiǎn)因素，包括高脂血癥、高血壓、糖尿病和吸煙均與活性氧化物的過(guò)量產(chǎn)生或氧化應(yīng)激的增強(qiáng)有關(guān)，均可減少血管一氧化氮的生物學(xué)活性，引起內(nèi)皮細(xì)胞的損害。本研究通過(guò)對(duì)該地區(qū)維吾爾族與漢族ACS患者的外周血內(nèi)皮細(xì)胞微粒進(jìn)行檢測(cè)，來(lái)了解EMPs的表達(dá)水平與急性冠脈綜合癥發(fā)生的關(guān)系是否存在民族差異，本研究結(jié)果顯示，維、漢族ACS患者的外周血內(nèi)皮細(xì)胞微粒的表達(dá)水平高于各自的對(duì)照組；但2個(gè)民族的病例組間和對(duì)照組間沒(méi)有明顯差異性，表明ACS患者體內(nèi)存在不同程度的血管內(nèi)皮損傷，血管損傷而釋放的內(nèi)皮細(xì)胞微粒沒(méi)有顯示出有民族差異性，這可能與以下因素有關(guān)：（1）由于在同一地區(qū)長(zhǎng)時(shí)間的生活，使維、漢族人群飲食以及生活習(xí)慣已相接近，另外與同一地區(qū)的氣候、環(huán)境因素等有關(guān)。（2）維、漢族ACS的嚴(yán)重程度可能存在一定的差異，本研究尚未將ACS的嚴(yán)重程度評(píng)分加入，有待后續(xù)研究進(jìn)一步證實(shí)。

3.2 外周血內(nèi)皮細(xì)胞微粒的表達(dá)水平與血清血脂指標(biāo)高度相關(guān) 與多重線性回歸分析相比，路徑分析是一種統(tǒng)計(jì)分析能力更強(qiáng)大的工具。路徑分析的著眼點(diǎn)主要在變量之間作用系數(shù)的分解上，其系數(shù)不僅可反映出變量間的直接效應(yīng)，還可反映出變量間的間接效應(yīng)。本研究將不同模型的擬合優(yōu)度進(jìn)行比較，可見(jiàn)外周血內(nèi)皮細(xì)胞微粒表達(dá)與血清血脂指標(biāo)相關(guān)的各項(xiàng)適配度指標(biāo)（Goodness－of－fit Indices）呈現(xiàn)高度相關(guān)。本研究逐步線性回歸與路徑分析結(jié)果均顯示，高密度脂蛋白膽固醇含量與內(nèi)皮細(xì)胞微粒之間存在著較明顯的負(fù)相關(guān)，且還顯示，高密度脂蛋白膽固醇的含量對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞微粒水平的解釋度能達(dá)到86.7%左右，即兩者的相關(guān)程度達(dá)到86.7%。由此提示，高密度脂蛋白膽固醇及內(nèi)皮細(xì)胞微?？赡芘c急性冠脈綜合征發(fā)病存在密切關(guān)聯(lián)，這可能是由于脂代謝紊亂加重了內(nèi)皮細(xì)胞的活化與凋亡，促使EMPs的形成。高密度脂蛋白膽固醇（HDL－C）是指高密度脂蛋白分子所攜的膽固醇，是逆向轉(zhuǎn)運(yùn)的內(nèi)源性膽固醇酯，將其運(yùn)入肝臟，再清除出血液；其最主要的臨床價(jià)值是能夠?qū)?dòng)脈粥樣硬化斑塊的泡沫細(xì)胞轉(zhuǎn)移至肝臟排出體外。Garfagnini等［13］報(bào)道，HDL－C水平越低，冠心病的發(fā)生率越高。HDL－C過(guò)度降低是冠心病發(fā)病的原因之一。內(nèi)皮細(xì)胞的功能可因缺血、脂類物質(zhì)沉著、機(jī)械性的血流動(dòng)力學(xué)損傷而受損，從而導(dǎo)致內(nèi)皮功能不全，繼而損傷的內(nèi)皮可以釋放出EMPs。同時(shí)，管壁內(nèi)膜受損后易為膽固醇、脂質(zhì)沉積，加重了動(dòng)脈粥樣斑塊的形成。當(dāng)血管壁受到損傷后，微纖維和血管性血友病因子引起血小板黏附、聚集和活化，在止血及血栓形成中起重要作用。而體內(nèi)增加的EMPs可能參加了炎癥反應(yīng)以及血栓的形成，在斑塊形成的基礎(chǔ)上形成血栓加速了ACS病情的發(fā)展。

綜上所述，血脂水平與內(nèi)皮細(xì)胞微粒表達(dá)之間有一定的關(guān)聯(lián)，提示，可以通過(guò)改善生活方式和控制危險(xiǎn)因素來(lái)減少EMPs的釋放。內(nèi)皮細(xì)胞微粒可以反映血管內(nèi)皮損傷后的功能狀態(tài)，參加了體內(nèi)的炎癥反應(yīng)、血栓的形成等多種途徑。除了血脂的影響因素外，ACS與EMPs的確切關(guān)系目前尚未澄清，還有待進(jìn)一步研究探討。研究MPs的產(chǎn)生機(jī)制和細(xì)胞來(lái)源的分類，以及在ACS發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的作用機(jī)制，將有望為ACS的預(yù)防、診斷和治療提供更好的理論依據(jù)和合理的醫(yī)療途徑。

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