李寶林

【摘 要】 目的對益陽市2010年-2012年的流感樣病例進(jìn)行監(jiān)測并及時對流感病毒行核酸檢測和分型鑒定，為流感的預(yù)防控制及臨床治療提供依據(jù)和指導(dǎo)。方法采集2010年到2012年三年間益陽市疾病預(yù)防控制中心流感樣病例標(biāo)本共計1074份，回顧性分析流感樣病例的基本資料及病原學(xué)檢測結(jié)果，對檢測結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果2010-2012年，1074份流感樣病例標(biāo)本中，核酸陽性樣本153份，陽性檢測率為14.24%，經(jīng)RTPCT檢測鑒定24例，經(jīng)REAL-TIME RTPCR檢測鑒定131例，其中2例經(jīng)RTPCR和REAL-TIME RTPCR共同檢測，檢出B型、季H3型、新甲H1型流感病毒各86例、43例、24例。結(jié)論2010年到2012年的三年間，益陽市有B型、季H3型、新甲H1型流感病毒流行，且B型流感病毒是流行優(yōu)勢株，季H3型流感病毒和新甲H1型流感病毒交替流行，流感病毒的流行具有比較明顯的季節(jié)特征，上半年2-5月是高發(fā)季節(jié)。

【關(guān)鍵詞】 流感樣病例；流感病原學(xué)；監(jiān)測

【中圖分類號】 R183【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】 B

本文就2010-2012年三年間益陽市疾病預(yù)防控制中心分離和鑒定的流感樣病例標(biāo)本和病原學(xué)檢測結(jié)果作為研究對象，分析流感病毒優(yōu)勢株、高發(fā)季節(jié)等特征，為流感病毒的防控提供指導(dǎo)。具體報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料以《全國流感人禽流感監(jiān)測實(shí)施方案》中對流感樣病例的定義（即：腋下溫度在38攝氏度及以上，伴有咳嗽或者咽痛的臨床癥狀，且無其他實(shí)驗(yàn)室確定診斷依據(jù)的病例）為標(biāo)準(zhǔn)[1]，按照《湖南省流感監(jiān)測防控實(shí)施方案》中對于流感樣病例監(jiān)測的要求，1周內(nèi)利用核酸檢測方法對哨點(diǎn)醫(yī)院送來的標(biāo)本進(jìn)行流感病毒亞型鑒定。醫(yī)院向疾病預(yù)防控制中心送檢的病理標(biāo)本要求保存溫度在4℃以下；48h內(nèi)未能送至實(shí)驗(yàn)室的，應(yīng)當(dāng)置-70℃或以下保存，并保證采集的標(biāo)本1周內(nèi)送到市疾病預(yù)防控制中心，避免標(biāo)本的反復(fù)凍融。

1.2檢測方法RT-PCR檢測：將哨點(diǎn)醫(yī)院送來的待檢樣本進(jìn)行總RNA的提取，然后對其進(jìn)行RTPCR反應(yīng)，嚴(yán)格按照核酸提取、反應(yīng)體系配置的試劑盒上規(guī)定的操作步驟進(jìn)行。擴(kuò)增程序參數(shù)設(shè)定為：60℃10min，42℃10min，50℃30min，95℃15min，94℃30s，52℃30s，72℃1min，35個循環(huán)；72℃7min[2]。

REAL-TIME RTPCR檢測方法：按照試劑盒說明書的操作步驟進(jìn)行病毒核酸的提取和反應(yīng)。擴(kuò)增程度的參數(shù)設(shè)定為：50℃ 30min，95℃3min，95℃15s，50℃30s，72℃1min，5個循環(huán)；95℃10s，55℃40s，40個循環(huán)。55℃收集熒光。

RTPCT檢測方法適用于甲型和乙型流感病毒、季節(jié)性H1和H3亞型流感病毒的檢測；而REAL-TIME RTPCR檢測方法則適用于甲型流感病毒檢測呈陽性但季節(jié)性H1和H3亞型流感病毒檢測呈陰性的標(biāo)本。在陰陽對照和內(nèi)對照均成立的前提下，REAL-TIME RTPCR檢測的樣本反應(yīng)液陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)是CT值在37.0及以下。

1.3判斷標(biāo)準(zhǔn)RTPCT檢測方法適用于甲型和乙型流感病毒、季節(jié)性H1和H3亞型流感病毒的檢測；而REAL-TIME RTPCR檢測方法則適用于甲型流感病毒檢測呈陽性但季節(jié)性H1和H3亞型流感病毒檢測呈陰性的標(biāo)本。在陰陽對照和內(nèi)對照均成立的前提下，REAL-TIME RTPCR檢測的樣本反應(yīng)液陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)是CT值在37.0及以下[3-4]。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法本次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，其中計量資料對比采用t檢驗(yàn)，計數(shù)資料對比采用卡方檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2010年到2012年的三年間，益陽市疾病預(yù)防控制中心共檢測流感樣病例鼻咽拭子標(biāo)本1074份，共檢出核酸陽性樣本153份，陽性檢測率為14.24%，經(jīng)RTPCT檢測鑒定24例，經(jīng)REAL-TIME RTPCR檢測鑒定131例，（其中2010年2例新甲H1流感病毒經(jīng)RTPCR和REAL-TIME RTPCR共同檢測），檢出B型、季H3型、新甲H1型流感病毒各86例、43例、24例。各年的具體統(tǒng)計結(jié)果如表1。

2010與2011年的B型病毒的檢測陽性率比較，X2=0.00，P＞0.05；而2012年與2011年的比較，X2=8.93，P＜0.01。說明2012年在B型流感病毒的防控方面，重視程度有所下降，導(dǎo)致B型流感病毒的感染擴(kuò)大化。比較2010年與2011年的新甲H1型病毒的檢測陽性率，X2=14.84，P＜0.01；比較2010年與2012年的季H3型病毒的檢測陽性率，X2=6.24，P＜0.05，比較均有顯著差異，2010年，新甲H1型病毒和季H3型病毒的感染率都比較低，而之后的兩年病毒感染率的升高提示對其的重視程度不夠，防范意識差。

3討論

流行性感冒是十分常見的一種傳染性疾病，其發(fā)病誘因是流感病毒，主要臨床表現(xiàn)為急性呼吸道疾病，具有傳染率高、流行性廣的特點(diǎn)，嚴(yán)重危害人們的身體健康[5]。但是由于流感病毒的變異性十分強(qiáng)，至今仍無法對其實(shí)現(xiàn)有效的控制，尤其是變異病毒，極容易造成人群的感染，甚至引發(fā)大規(guī)模的流行，威脅整個社會的穩(wěn)定。因而對流感的監(jiān)測對于流感的預(yù)防和控制、變異病毒的發(fā)現(xiàn)與疫情的預(yù)警有十分重要的意義[6，7]。

2010年到2012年的三年間，益陽市有B型、季H3型、新甲H1型流感病毒流行，且B型流感病毒是流行優(yōu)勢株，季H3型流感病毒和新甲H1型流感病毒交替流行，流感病毒的流行具有比較明顯的季節(jié)特征，上半年2-5月是高發(fā)季節(jié)。

對不同的流感病毒核酸分型流行季節(jié)進(jìn)行比較可見，新甲H1型流感病毒的感染時間集中在1-2月，季H3型流感病毒的感染時間集中在3月和8月，而B型流感病毒感染的時間跨度更大，流行范圍更廣，防控工作的重點(diǎn)應(yīng)放在B型流感病毒上。新甲H1型病毒和季H3型病毒在10年的感染例數(shù)還較少，但11年和12年流行范圍擴(kuò)大，感染人數(shù)增加，也要對其重點(diǎn)防范，并對新的變異病毒類型加以防范，避免出現(xiàn)新病毒的擴(kuò)散和傳播，造成嚴(yán)重疫情。

參考文獻(xiàn)

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[2] 薛娜，韓志國，樊旭成，等.烏魯木齊市2011-2012年度流感監(jiān)測結(jié)果分析[J].醫(yī)學(xué)動物防制,2013,29(7):736-737.

[3] 陳秀云，岑永莊，陳學(xué)琴，等.2009-2012年中山市流行性感冒監(jiān)測結(jié)果分析[J].熱帶醫(yī)學(xué)雜志,2013,13(5):649-650.

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[6] 曹東暉.中山市2010-2011年流感監(jiān)測分析[J].疾病監(jiān)測與控制雜志,2013,7(3):742-743.