黃振超等

[摘 要] 椎間盤退變是多種因素長(zhǎng)期慢性刺激椎間盤，從而引起的椎間盤結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性下降，逐步緩慢發(fā)生相關(guān)變化的反應(yīng)過程。通過對(duì)動(dòng)物退變椎間盤模型的研究，可以為人椎間盤退變疾病的研究提供重要手段。隨著動(dòng)物模型制作手段不斷豐富及控制指標(biāo)精確程度不斷提高，動(dòng)物所模擬人椎間盤退變模型相似度有了顯著提高，因此動(dòng)物造模在椎間盤退變性疾病的研究中將具有更為廣闊的發(fā)展前景。本文就近年來各種常用椎間盤退變模型的研究進(jìn)展作一綜述。

[關(guān)鍵詞] 椎間盤退變；動(dòng)物模型：生物力學(xué)；損傷

中圖分類號(hào)：R681.57 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：2095-5200（2014）03-032-04

[Abstract] Intervertebral disc degeneration is a variety of factors， long-term and chronic stimulation of intervertebral disc， intervertebral disc structure stability decreased due to the reaction process， gradually change. Through the study of the animal model of degenerative intervertebral disc， study for the human intervertebral disc degeneration diseases provide an important means of. As the animal model making means continuously enriched and control index of accurate degree raise constantly， the simulated animal intervertebral disc degeneration model similarity has been significantly improved， thus making animal model has a broad prospect in the research the degenerative disc disease. This article reviews the progress in recent years a variety of commonly used animal model of intervertebral disc degeneration.

[Key words] degeneration of intervertebral disc；animal model；biomechanics；injury

前言

椎間盤退行性疾病是中老年人的常見病和多發(fā)病，流行病學(xué)顯示其發(fā)病正在逐年上升，并有年輕化趨勢(shì)[1] 。國(guó)內(nèi)外關(guān)于椎間盤退變的病因和發(fā)病機(jī)制并未完全明確，因此也沒有滿意的治療方法。流行病學(xué)研究顯示雖然很多成年人不存在椎間盤退變臨床表現(xiàn)，但通過影像及病理學(xué)能發(fā)現(xiàn)實(shí)際退變改變。借助動(dòng)物模型可研究椎間盤細(xì)微結(jié)構(gòu)，自身力學(xué)性能以及外力負(fù)荷等相關(guān)因素的改變是如何導(dǎo)致椎間盤退變出現(xiàn)。同時(shí)對(duì)動(dòng)物椎間盤退變模型的深入研究對(duì)臨床預(yù)防治療人椎間盤退變具有積極意義。

1 自發(fā)性椎間盤模型

自發(fā)性椎間盤退變是指存在特殊遺傳病理基礎(chǔ)的動(dòng)物，通過改變飲食習(xí)慣、影響動(dòng)物行為等系統(tǒng)方法導(dǎo)致椎間盤發(fā)生退行性病變。目前用于實(shí)驗(yàn)研究較為多見的是地中海沙鼠（Mediterranean sand rat） 。Silberberg等[2]認(rèn)為生活在地中海地區(qū)的沙鼠，由于長(zhǎng)年進(jìn)食含鹽量高的食物，相對(duì)非地中海地域的老鼠來說，特別容易發(fā)生椎間盤退變。退變主要包括髓核細(xì)胞凋亡、軟骨終板骨化、纖維環(huán)分解破裂以及骨贅增生等方面變化。這主要由于高鹽飲食導(dǎo)致沙鼠椎間盤營(yíng)養(yǎng)缺失，繼而引發(fā)椎間盤退變。最接近人的靈長(zhǎng)類動(dòng)物由于其生理構(gòu)造與人類相似，因此，在動(dòng)物模型中也經(jīng)常會(huì)使用靈長(zhǎng)類動(dòng)物復(fù)制椎間盤退變模型。在借助現(xiàn)代影像學(xué)檢查方法的幫助下，Platenberg發(fā)現(xiàn)靈長(zhǎng)類動(dòng)物中的狒狒在生長(zhǎng)年齡超過14歲后，椎間盤可逐漸表現(xiàn)出自發(fā)性退變改變，而這種改變與人的椎間盤退變情況是相似的。

2 繼發(fā)性椎間盤模型

2.1 基因技術(shù)介導(dǎo)的椎間盤模型

由于現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，椎間盤動(dòng)物模型制作及研究在更細(xì)微的層面上取得很大進(jìn)步。以新興的基因技術(shù)為例，通過在微觀層面上進(jìn)行基因修改或去除，形成特定椎間盤模型，為椎間盤模型研究提供了新手段及思路。唐淼等[3]發(fā)現(xiàn)TNF-a能夠引起腰椎間盤退變，并且和退變有時(shí)效和量效關(guān)系。Studer等[4]用IL-6及其可溶性受體（sR）作用于離體的人退變髓核組織，使得退變髓核蛋白聚糖合成減少，降解增多，IL-1、PGE-2的合成增多。Sahlman等[5]發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)椎體終板增厚骨化，纖維環(huán)破裂、髓核細(xì)胞凋亡等退變表現(xiàn)的小鼠，大部分都存在表達(dá)膠原的相關(guān)基因缺失。Kimura等[6]發(fā)現(xiàn)椎間盤退變的加速與小鼠Ⅸ型膠原基因改變存在密切的聯(lián)系。注射各種生長(zhǎng)因子、生長(zhǎng)因子基因轉(zhuǎn)染、細(xì)胞移植和抑制細(xì)胞內(nèi)相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)通路等，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已經(jīng)取得逆轉(zhuǎn)椎間盤退變的效果[7]。

2.2 尾部椎間盤模型

Lindblom[8]在1957年構(gòu)建世界最早的機(jī)械性椎間盤退變模型。通過彎曲并固定大鼠尾巴，發(fā)現(xiàn)凹側(cè)纖維環(huán)逐漸破裂，髓核突出，并發(fā)生退變，指出椎間盤退變是在慢性壓力負(fù)荷下出現(xiàn)的病理性反應(yīng)過程?？紤]到動(dòng)物尾部椎間盤加壓的操作較為簡(jiǎn)便，同時(shí)對(duì)周圍組織正常結(jié)構(gòu)損害和功能的限制較小，目前尾部椎間盤的研究已覆蓋了大、小鼠和牛等大部分動(dòng)物。研究結(jié)果顯示在連續(xù)給予椎間盤軸向應(yīng)力作用下，會(huì)出現(xiàn)椎間隙狹窄、椎體間結(jié)構(gòu)失穩(wěn)、骨贅增生；同時(shí)可觀察到編碼蛋白多糖和Ⅱ型膠原的基因表達(dá)明顯降低。

2.3 雙足直立椎間盤模型

雙足直立椎間盤退變模型是指通過特殊手段使動(dòng)物保持直立狀態(tài)，改變脊柱的生物力學(xué)狀態(tài)， 椎間盤因承受持續(xù)的壓應(yīng)力而逐漸發(fā)生退行性改變。這與人類椎間盤退變的機(jī)理是大致相同的。Cassidy 等[9]提供了較為經(jīng)典的的動(dòng)物模型制備方法： 將出生2-3天的大鼠進(jìn)行前肢結(jié)扎，并注意預(yù)防感染，待經(jīng)過1個(gè)月左右的哺乳期后，開始正常飲食飼養(yǎng)，通過飲食的調(diào)節(jié)使大鼠后肢站立進(jìn)食，并形成條件反射。14個(gè)月后行放射學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)截肢大鼠腰椎發(fā)生楔形改變， 存在明顯的椎間盤退變表現(xiàn)。免疫組化提示大鼠肌肉纖維出現(xiàn)轉(zhuǎn)化， 直立狀態(tài)的形成導(dǎo)致了肌肉纖維在體內(nèi)重新分布，最明顯的就是維持直立的肌肉纖維數(shù)量顯著增加，而其他非必要肌肉中直立作用肌肉明顯減少。

2.4 壓力負(fù)荷椎間盤模型

目前已用于建立椎間盤退變模型的動(dòng)物包括鼠、兔、犬、羊、豬、猴以及狒狒等十余種，多采用爬行動(dòng)物作為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停渥畲笕秉c(diǎn)是誘導(dǎo)的IVDD未體現(xiàn)出重力這一最主要的致退變因素的作用[10]。要保持椎間盤功能、特性及成分在正常范圍內(nèi)，則需要給予椎間盤穩(wěn)定而且適量的機(jī)械力學(xué)負(fù)荷。力學(xué)負(fù)荷的過度或缺乏最終都會(huì)引起椎間盤退變，前者可引起髓核細(xì)胞凋亡、分解酶活性增加，后者容易出現(xiàn)蛋白含量減少。Iatridis等[11]使用外固定器械從大鼠椎間盤兩側(cè)的椎體向中間給予椎間盤持續(xù)的壓力，通過長(zhǎng)時(shí)間觀察發(fā)現(xiàn)椎間盤水分丟失、膠原纖維減少，影像學(xué)發(fā)現(xiàn)椎間盤高度降低、軟骨終板鈣化。Kroeber等[12]將外固定器材應(yīng)用于兔的椎間盤，成功造出兔椎間盤退變的模型，影像學(xué)見椎間隙狹窄，纖維環(huán)破碎，骨贅增生。

2.5 脊柱失穩(wěn)椎間盤模型

通過相關(guān)手段破壞脊柱及周圍原本穩(wěn)定的組織結(jié)構(gòu)，使脊柱穩(wěn)定性喪失，生物力學(xué)狀態(tài)改變， 從而誘發(fā)椎間盤的退變，達(dá)到動(dòng)物造模目的。以下組織受損容易造成脊柱的失穩(wěn)：關(guān)節(jié)突關(guān)節(jié)、棘突、橫突、椎旁肌等。Miyamoto 等[13]建立了小鼠的脊柱失穩(wěn)椎間盤模型，主要是咬除棘突組織并同時(shí)松解椎旁肌肉組織，對(duì)模型行免疫組化及影像學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)骨贅增生，纖維結(jié)締組織形成，纖維環(huán)破碎。Wada 等[14]通過電流刺激兔頸背部肌肉，促使兔頸部反復(fù)屈伸，久之就形成頸椎不穩(wěn)，出現(xiàn)纖維環(huán)分層、骨贅形成椎間盤退變表現(xiàn)。

2.6 手術(shù)損傷椎間盤模型

Key等[15]最早應(yīng)用手術(shù)刀損傷纖維環(huán)來誘發(fā)動(dòng)物椎間盤退變模型.此后該法被廣泛采用和改進(jìn)。Osti 等[16]提出一種有效制造椎間盤退變模型的方法，通過外科手段，破壞椎間盤的前側(cè)及外側(cè)部分，不涉及內(nèi)層纖維環(huán)及髓核。通過18個(gè)月觀察，幾乎所有椎間盤均出現(xiàn)不同程度的退變。由此作者得出結(jié)論：纖維環(huán)外層的損傷是導(dǎo)致椎間盤退變的重要因素。Lipson等[17]通過使用相同的方法構(gòu)建了兔椎間盤退變模型。通過免疫組化研究發(fā)現(xiàn)：椎間盤損傷后水分、蛋白多糖等含量會(huì)存在一個(gè)快速丟失過程，雖然椎間盤成份能很快恢復(fù)， 但會(huì)逐漸出現(xiàn)椎間盤成份再度丟失。目前使用針穿刺椎間盤來構(gòu)建退變模型也是常用方法，主要是通過手術(shù)分離頸部前面軟組織，清楚暴露椎間盤表面前方，并用針穿刺纖維環(huán)，達(dá)到破壞椎間盤目的。這種方法可行性在于使椎間盤退變過程相對(duì)緩慢，更符合人椎間盤緩慢退變的規(guī)律，使椎間盤退變的研究更加合理化。

2.7 化學(xué)損傷椎間盤模型

木瓜蛋白酶是一種水解酶，由于其具有溶解椎間盤髓核，卻不影響周圍組織的特性，因此出現(xiàn)將木瓜蛋白酶作為制造退變椎間盤模型有效手段的趨勢(shì)。Roberts S 等[18]在蛋白水解N-胰島素-木瓜蛋白酶混合物的培養(yǎng)基中培養(yǎng)牛尾椎間盤組織，經(jīng)過3周后發(fā)現(xiàn)椎間盤中央異染性丟失、糖胺聚糖含量下降。該種模型的優(yōu)點(diǎn)是創(chuàng)傷小、操作簡(jiǎn)單、副作用少，但存在不能很好地模擬蛋白聚糖丟失的典型改變，藥物的劑量不能得到精確控制等缺點(diǎn)。Hoogendoorn等[19-20]將軟骨素酶ABC注入山羊椎間盤，成功建立退變模型，并于2008再次實(shí)驗(yàn)證實(shí)了其建立椎間盤退變模型的重復(fù)性好。Oegema等[21]研究發(fā)現(xiàn)，退變的椎間盤組織中纖維蛋白增多，且多以片段形式存在。Greg Anderson等[22]研究發(fā)現(xiàn)，注射纖維結(jié)合蛋白片段建立椎間盤退變模型可較好地模擬椎間盤退變的過程。

2.8 營(yíng)養(yǎng)缺乏椎間盤模型

通過阻礙終板營(yíng)養(yǎng)路徑的方法達(dá)到制作椎間盤退變模型目的。由于椎間盤組織本身沒有血供，其主要是通過終板鄰近組織浸潤(rùn)和終板外周血管的支持獲取營(yíng)養(yǎng)，因此通過破壞終板即能達(dá)到椎間盤退變目的。Hutton 等[23]將骨水泥注入椎體一側(cè)或雙側(cè)軟骨終板下，經(jīng)過70 周后發(fā)現(xiàn)椎間盤腫脹、纖維環(huán)破裂、髓核細(xì)胞凋亡以及椎間隙變窄等椎間盤退變。Iwahashi 等[24]發(fā)現(xiàn)將大鼠每日定時(shí)置于煙霧環(huán)境中，椎體終板附近血管芽的密度下降、管腔狹窄，最終導(dǎo)致蛋白多糖和膠原含量降低。

3 總結(jié)

椎間盤退變動(dòng)物模型研究根本目的在于模擬人椎間盤的退變以助于研究人員揭示人椎間盤退變的發(fā)生機(jī)制[25]。目前椎間盤退變研究存在周期長(zhǎng)、難度大、成功率低、可重復(fù)性差、造模繁瑣、死亡率高、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物價(jià)格昂貴等限制。近年來基因技術(shù)和分子生物學(xué)的應(yīng)用，極大促進(jìn)了椎間盤動(dòng)物模型制作的精確性。通過動(dòng)物模型復(fù)制人類疾病來促進(jìn)醫(yī)學(xué)科學(xué)發(fā)展是現(xiàn)在，也是未來始終進(jìn)行的一項(xiàng)重要課題，對(duì)椎間盤退變的研究中，動(dòng)物椎間盤模型必將展現(xiàn)出更為顯著的優(yōu)勢(shì)。

參 考 文 獻(xiàn)

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