任桂玲董曉強(qiáng)郭艷玲李沈明*

（1 承德醫(yī)學(xué)院，河北 承德 067000；2 頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北 承德 067000）

八味益腎丸中雄蠶蛾油質(zhì)4量控制的研究

任桂玲1董曉強(qiáng)2郭艷玲2李沈明2*

（1 承德醫(yī)學(xué)院，河北 承德 067000；2 頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北 承德 067000）

目的提高八味益腎丸半成品質(zhì)量控制。方法采用氣相色譜法測(cè)八味益腎丸半成品雄蠶蛾油中多種脂肪酸成分含量。結(jié)果棕櫚酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亞油酸甲酯、α-亞麻酸甲酯的線性范圍分別為0.272～6.800 mg/mL（r=0.9999）、0.063～1.575 mg/mL（r=0.9998）、0.395～9.887 mg/mL（r=0.9999）、0.084～2.098 mg/mL（r=0.9998）、0.405～10.124 mg/mL（r=0.9999）；各成分的平均回收率分別為97.41%、103.09%、102.05%、101.67%和100.22%；RSD分別為0.78%、1.26%、1.10%、0.95%和1.62%（n=6）。結(jié)論該方法準(zhǔn)確、靈敏、簡(jiǎn)便、穩(wěn)定性和重現(xiàn)性良好，適用于蠶蛾油中多種脂肪酸成分的同時(shí)檢測(cè)，可為八味益腎丸半成品及成品的質(zhì)量控制提供參考。

八味益腎丸；雄蠶蛾；脂肪酸；氣相色譜法

八味益腎丸是由雄蠶蛾、淫羊藿、熟地黃、當(dāng)歸、菟絲子、杜仲、山藥、鹿角膠八味藥材組成的濃縮水丸，有溫陽補(bǔ)腎，養(yǎng)血填精之功效，主要用于腎陽不足所致的功能性陽痿，氣怯神疲，畏寒肢冷，腰膝酸軟等。雄蠶蛾是八味益腎丸的君藥，明代李時(shí)珍著的《本草綱目》稱雄蠶蛾為“神蟲國(guó)寶”并記載：雄原蠶蛾，壯陽事，止泄精、尿血，暖水臟，治暴風(fēng)、金瘡、湯火瘡，滅瘢痕[1]。此外，在《中藥大辭典》中也有雄蠶蛾補(bǔ)腎壯陽的記載[2]。現(xiàn)代研究表明，雄蠶蛾含有豐富的蛋白質(zhì)、脂肪酸、維生素、激素類物質(zhì)等。雄蠶蛾油中脂肪酸含量高，不飽和脂肪酸和必需脂肪酸的含量分別高達(dá)78.6%和43%，其必需脂肪酸含量在動(dòng)物性食品中占首位，且其含量最豐富的多不飽和脂肪酸亞麻酸在人體內(nèi)能參與前列腺素的合成并提高前列腺素的活性，這正好為其醫(yī)療保健上的作用找到佐證[3，4]。

1 材 料

1.1 儀器

島津2010氣相色譜儀；AE240十萬分之一電子分析天平（瑞士梅特勒）；RE-5286A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海雅榮生化設(shè)備儀器有限公司）；調(diào)速多用振蕩器（江蘇榮華儀器制造有限公司）。

1.2 材料及試藥

蠶蛾為蠶蛾科昆蟲家蠶Bombyx mori Linneeus的雄性蟲體（由頸復(fù)康萊蕪恒億養(yǎng)殖有限公司提供，批號(hào)：130201）；油酸甲酯對(duì)照（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：190034-201001）；硬脂酸甲酯對(duì)照（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：190033-201001）；α-亞麻酸甲酯對(duì)照（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：111624-201203）；亞油酸甲酯對(duì)照（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：111625-200502）；棕櫚酸甲酯對(duì)照（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：190030-201303）；甲醇、乙醇、正己烷（分析純）。

2 方法與結(jié)果

2.1 雄蠶蛾油的制備

按照八味益腎丸制備工藝，稱取適量雄蠶蛾，加95%乙醇8倍量，浸泡8 h，加熱回流1 h，第2次加95%乙醇6倍量，加熱回流1 h，合并提取液，過濾，濾液回收乙醇至無醇味，即得雄蠶蛾油。

2.2 雄蠶蛾油的甲酯化

精密稱取按2.1節(jié)方法制得的雄蠶蛾油0.1 g置50 mL三角瓶中，加入5 mL正己烷使其溶解，再加入5 mL，0.5 mol/L氫氧化鉀甲醇溶液[5]，振搖20 min后，轉(zhuǎn)移置分液漏斗中靜置分層，取有機(jī)相置10 mL容量瓶中，加正己烷定容至刻度，搖勻，即得。

2.3 氣相測(cè)定方法

2.3.1 色譜條件

色譜柱：HP-INNOWAX（30 m×0.32 mm，1.8 μm）；柱溫230 ℃保持11 min，柱中載氣流量1.5 mL/min，進(jìn)樣口溫度：220 ℃；采用20∶1分流進(jìn)樣；檢測(cè)器FID溫度：270 ℃；進(jìn)樣量1 μL。對(duì)照品及供試品色譜圖見圖1。

2.3.2 混合對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取棕櫚酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亞油酸甲酯和α-亞麻酸甲酯對(duì)照品適量，置于同一25 mL容量瓶中，加正己烷適量使溶解，加正己烷稀釋至刻度，搖勻，配制成棕櫚酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亞油酸甲酯和α-亞麻酸甲酯濃度分別為6.800、1.575、9.887、2.098、10.124 mg/mL的混合對(duì)照溶液。

2.3.3 供試品溶液的制備

取雄蠶蛾油的甲酯化溶液用0.45 μm微孔濾膜過濾，濾液作為供試品溶液。

2.3.4 線性關(guān)系的考察

混合對(duì)照品儲(chǔ)備液作為1號(hào)溶液，采用倍比稀釋法制成系列濃度溶液，得2～5號(hào)混合對(duì)照品溶液。棕櫚酸甲酯濃度分別為0.272、0.680、1.360、2.720 mg/mL、硬脂酸甲酯濃度分別為0.063、0.158、0.315、0.630 mg/mL，油酸甲酯濃度分別為0.395、0.989、1.977、3.950 mg/mL，亞油酸甲酯濃度分別為0.084、0.210、0.420、0.839 mg/mL，α-亞麻酸甲酯濃度分別為0.405、1.012、2.025、4.050 mg/mL。在2.2.1節(jié)色譜條件下，取1 μL注入氣相色譜儀，記錄色譜峰面積，以色譜峰（A）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度（C）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程為棕櫚酸甲酯：A=660.92C-1.8573（r=0.9999）；硬脂酸甲酯：A=389.64C-0.3758（r=0.9998）；油酸甲酯：A=955.50C-0.2948（r=0.9999）；亞油酸甲酯：A=307.52C-0.1098（r=0.9998）；α-亞麻酸甲酯：A=343.65C-3.1752（r=0.9999）。棕櫚酸甲酯在0.272～6.800 mg/mL呈良好線性關(guān)系，硬脂酸甲酯在0.063～1.575 mg/mL呈良好線性關(guān)系；油酸甲酯在0.395～9.887 mg/mL呈良好線性關(guān)系；亞油酸甲酯在0.084～2.098 mg/mL呈良好線性關(guān)系；α-亞麻酸甲酯在0.405～10.124 mg/mL呈良好線性關(guān)系。

2.3.5 精密度試驗(yàn)

將“2.2.4”項(xiàng)線性3號(hào)混合對(duì)照品溶液和按照“2.2.3”制備的供試品溶液一份，各重復(fù)進(jìn)樣6次，每次1 μL，記錄色譜峰面積，混合對(duì)照品溶液色譜峰面積的RSD值分別為：棕櫚酸甲酯0.23%、硬脂酸甲酯1.86%、油酸甲酯1.46%、亞油酸甲酯0.64%、α-亞麻酸甲酯1.31%；供試品溶液色譜峰面積的RSD值分別為：棕櫚酸甲酯1.94%、硬脂酸甲酯1.96%、油酸甲酯1.81%、亞油酸甲酯1.82%、α-亞麻酸甲酯1.70%，表明精密度良好。

表1 平均回收率結(jié)果

圖1 雄蠶蛾油氣相色譜圖 （A）對(duì)照品 （B）供試品

2.3.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

平行取樣品6份，按“2.2.3”制備供試品溶液，按“2.1.1”色譜條件測(cè)定，棕櫚酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亞油酸甲酯和α-亞麻酸甲酯的RSD值分別為1.42%、1.93%、1.69%、1.25%、1.66%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液和供試品溶液，分別在制備后0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣10 μL，記錄色譜峰面積，對(duì)照品溶液色譜峰面積的RSD值分別為：棕櫚酸甲酯1.66%，硬脂酸甲酯1.74%，油酸甲酯1.23%，亞油酸甲酯1.07%，α-亞麻酸甲酯0.63%；供試品溶液色譜峰面積的RSD值分別為：棕櫚酸甲酯1.55，硬脂酸甲酯1.46%，油酸甲酯1.75%，亞油酸甲酯1.94%，α-亞麻酸甲酯1.27%，表明對(duì)照品溶液和供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知棕櫚酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亞油酸甲酯和α-亞麻酸甲酯含量的樣品6份，分別加入對(duì)照品適量，按“2.2.3”項(xiàng)制備樣品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以樣品溶液中絕對(duì)含量計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

3 討 論

3.1 蠶蛾油中所含脂肪酸成分為十二碳以上的長(zhǎng)碳鏈脂肪酸，其沸點(diǎn)高，因此將脂肪酸與甲醇反應(yīng)制備成沸點(diǎn)低的脂肪酸甲酯，再進(jìn)行氣相色譜分析。用于甲酯化的試劑有KOH-CH3OH、BF3-CH3OH[6]，通過實(shí)驗(yàn)比較表明，采用0.5 moL/L的KOH-CH3OH能夠?qū)ξ宸N脂肪酸進(jìn)行有效甲酯化，且操作簡(jiǎn)單快捷有效。

3.2 采用不同色譜柱HP-INNOWAX（30 m×0.32 mm，1.8 μm）和FFAP（改性聚乙二醇20 mol/L，30 m×0.25 mm，0.25 μm）和不同氣相色譜儀Agilent 7890A、Agilent 6890N、島津2010對(duì)雄蠶蛾油進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果不同的色譜柱分離性能不同，2種色譜柱和3臺(tái)氣相色譜儀均可用于樣品測(cè)定，色譜柱HP-INNOWAX（30 m×0.32 mm，1.8 μm）分離效果較好，且保留時(shí)間適中。

[1] 李時(shí)珍.本草綱目[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1982:2254-2255.

[2] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].上海:上海人民出版社,1977:1831.

[3] 余東華,楊伙,孫立.柞蠶蛾的營(yíng)養(yǎng)成分分析及評(píng)價(jià)[J].食品科技, 1998,3(1):19-21.

[4] 范作卿,鄭淑湘,鄒德慶,等.柞蠶雄蛾油成分的分析與應(yīng)用[J].中國(guó)蠶業(yè),2006,27(4):90-91.

[5] 付松,徐先順,向奮飛.保健油脂中多不飽和脂肪酸的GC/MS分析[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2005,15(9):1042-1044.

[6] 馮春艷,榮瑞芬,歷重先.不同核桃品種脂肪酸的氣相色譜分析比較[J].食品科學(xué),2009,30(24):262-265.

R282.72

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1671-8194（2014）27-0069-03

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