姚慶春等

【摘要】 目的 對吉林松原郭爾羅斯自治縣蒙古族和漢族人群中2型糖尿?。═2MD）患者CD36內(nèi)含子3（intron 3）[TG]重復(fù)序列基因多態(tài)性分布情況進(jìn)行研究， 探討該基因多態(tài)性與2型糖尿病的相關(guān)性。方法 應(yīng)用 PCR和直接測序法對40例正常組和193例2型糖尿病患者CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)序列基因多態(tài)性進(jìn)行分析。結(jié)果 ①CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)序列有5種單體型， 即[TG]重復(fù)次數(shù)為11、12、13、15、16次。②正常組與2型糖尿病患者之間CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)序列各種單體型及基因型分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。③蒙古族與漢族之間CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)序列各種單體型及基因型分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。④CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)序列13次的單體型及基因型在蒙古族人群中正常組與2型糖尿病患者之間分布差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)次數(shù)13次的單體型是松原蒙古族發(fā)生2型糖尿病的危險基因。

【關(guān)鍵詞】 2型糖尿??；CD36；基因單體型

【Abtract】 Objective To investigate the distribution of CD36 intron 3 [TG] repeat polymorphism in type 2 diabetes mellitus （T2DM） patients and to expore the correlation between the genetic polymorphism and type 2 diabetes mellitus （T2DM）. Methods Genotypes of CD36 were typed in 193 T2DM patients and 40 normal person by polymerase chain reaction（PCR） and PCR-direct sequencing. Results ①Research Results found CD36 intron 3 （TG） there were five kinds of haplotype repeat sequences， namely [TG] repetitions for 11， 12， 13， 15， 16.②The distribution of CD36 intron 3 [TG] repeat genotype or haplotype has no significant difference between normal control group and T2DM group （P>0.05）.③The distribution of CD36 intron 3 [TG] repeat genotype or haplotype has no significant difference between the Moggol nationality and the Han nationality （P>0.05）. ④The distribution of CD36 intron 3 [TG] repeat for 13 times exist statistically significant difference in the Moggol nationality between normal control group and T2DM group （P<0.05）. Conclusion The distribution of CD36 intron 3 [TG] repeat for 13 times haplotype is a risk genes of type 2 diabetes in the Moggol nationality of songyuan region.

【Key words】 T2DM； CD36； Genetic haplotype

糖尿病是以高血糖為主要特征的內(nèi)分泌代謝性疾病， 隨著社會進(jìn)步和生活方式的改變， 糖尿病的發(fā)病率越來越高， 2000年全球糖尿病患者 2.85億， 估計(jì)到2030年全球?qū)⒔?億糖尿病患者， 其中中國約占全球的1/3。遺傳因素在糖尿病的發(fā)生發(fā)展中占有重要的地位， CD36是一種多功能的清道夫受體， 與脂質(zhì)代謝及動脈硬化的發(fā)生有關(guān)， 可激活細(xì)胞釋放前炎癥反應(yīng)性細(xì)胞因子、白介素等[1]。作者對吉林松原前郭爾羅斯自治縣蒙古族與漢族的健康人群和2型糖尿病患者之間CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)序列多態(tài)性在分布頻率進(jìn)行研究， 旨在探討該基因多態(tài)性與2型糖尿病的相關(guān)性。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 隨機(jī)選取在本院健康體檢者40名：蒙古族23名、漢族17名， 年齡歲作為正常對照組， 臨床和實(shí)驗(yàn)室檢查均正常， 排除肝、腎、內(nèi)分泌和心腦血管疾病。選取2004年12月～2012年12月在本院內(nèi)分泌科住院的T2DM患者193例（蒙古族86例、漢族107例）， 年齡歲作為T2DM組。T2DM診斷依據(jù)1999年WHO制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)。所有受檢對象均為吉林松原前郭爾羅斯自治縣地區(qū)無血緣關(guān)系個體。均簽署知情同意書。

1. 2 研究方法

1. 2. 1 基因組DNA提取 采用Promega公司生產(chǎn)的Wizard@ Genomic DNA Purification Kit提取DNA。取被受檢者肘靜脈血2 ml到加有EDTA抗凝劑的真空采血管中， 并立刻顛倒混勻， 置于離心機(jī)中3000轉(zhuǎn)離心10 min， 取300 μl白細(xì)胞加入到1.5 ml離心管中， 按照細(xì)胞裂解、核裂解、RNA去除、沉淀蛋白質(zhì)、析出DNA、清洗DNA、水化DNA的過程分別加入試劑， 進(jìn)行DNA的提取。所得DNA經(jīng)紫外分光光度計(jì)定量， 并置于-70℃保存?zhèn)溆谩?

1. 2. 3 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物直接測序 PCR產(chǎn)物用凝膠電泳DNA回收試劑盒純化回收DNA片段后， 送北京奧萊博生物技術(shù)有限責(zé)任公司， 完成PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測序。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析。3 討論

CD36是B類清道夫受體， 具有多種生物學(xué)功能， 參與包括炎癥、止血、免疫清除、脂質(zhì)代謝和動脈硬化在內(nèi)的許多生理和病理過程[2， 3]。國內(nèi)外研究已證明CD36與動脈硬化的形成有關(guān)。Susztak等[4]在研究糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制中發(fā)現(xiàn)CD36的表達(dá)伴隨近端小管上皮細(xì)胞凋亡以及小管上皮細(xì)胞變性， 高糖環(huán)境刺激近端小管上皮細(xì)胞可表達(dá)CD36。Sampson等[5]研究發(fā)現(xiàn)2型糖尿病患者發(fā)現(xiàn)2型糖尿病單核細(xì)胞上CD36表達(dá)上調(diào)， 認(rèn)為2型糖尿病的發(fā)生與CD36表達(dá)增強(qiáng)有一定關(guān)系。鄭壽煥等[6， 7]研究認(rèn)為， 糖尿病患者血清中sCD36水平明顯升高， 且sCD36水平與血糖波動有關(guān)， CD36內(nèi)含子3[TG]重復(fù)序列基因多態(tài)性與T2DM患者的發(fā)生有關(guān)。Griffin等[8]證實(shí)了葡萄糖可以通過增強(qiáng)CD36 mRNA的翻譯過程上調(diào)其蛋白質(zhì)的表達(dá)， 從而進(jìn)一步上調(diào)CD36的表達(dá)。體外實(shí)驗(yàn)也已經(jīng)證明[9]， 高血糖環(huán)境可上調(diào)CD36表達(dá)。Aase Handberg[10]等也用ELISA的方法檢測2型糖尿病患者血漿中sCD36的含量， 發(fā)現(xiàn)2型糖尿病患者血漿中sCD36是正常組的4.5倍， 并與胰島素抵抗有關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn)總體人群正常組與2型糖尿病患者之間CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)序列各種單體型及基因型分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義蒙古族與漢族之間CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)序列各種單體型及基因型分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)序列13次的單體型在蒙古族人群中正常組與2型糖尿病患者之間分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義并且CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)序列13/n的基因型在蒙古族人群中正常組與2型糖尿病患者之間分布比較。根據(jù)研究結(jié)果考慮CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)序列13次的單體型是蒙古族發(fā)生2型糖尿病的危險基因。

綜上所述， 本研究認(rèn)為CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)序列13次的單體型是蒙古族發(fā)生2型糖尿病的危險基因， 而CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)次數(shù)對CD36的表達(dá)及對2型糖尿病的發(fā)生和發(fā)展中的影響機(jī)制尚不明確， 需進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1] Mora C， Navarro JF. The role of inflammation as a pathogenic factor in the development of renal disease in diabetes. Curr Diab Rep， 2005，5（6）：399-401.

[2] 高磊， 鮑羿， 洪斌， 等.B類清道夫受體CD36的研究進(jìn)展.醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志， 2006，3（1）：61-64.

[3] 李旭升， 陳國榮， 胡野， 等.糖尿病大鼠巨噬細(xì)胞CD36基因表達(dá)水平.中國病理生理雜志， 2007，23（11）：2272-2273.

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[5] Sampson MJ，Davies IR， Braschi S，et al.Increased ex-pression of a scavenger receptor （CD36） in monocytes from subjects with type 2 diabetes. Athcrosclcrosis， 2003，167（1）：129-134.

[6] 鄭壽煥， 李金姬， 張春子，等.CD36基因多態(tài)性對2型糖尿病患者血脂和CRP的影響.山東醫(yī)藥， 2011，51（7）：4-6.

[7] 鄭壽煥， 張春子， 楊秀麗，等. 葡萄糖濃度及CD36基因多態(tài)性對單核細(xì)胞表面CD36表達(dá)水平的影響.中國實(shí)用內(nèi)科雜志， 2012（6）：23-24.

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[9] 杜鵑， 張素華.清道夫受體與糖尿病.國外醫(yī)學(xué)內(nèi)分泌學(xué)分冊， 2004， 24（6）：397-399.

[10] LinksHandberg A， Levin K， Hjlund K，et al. Identincation of the oxidized low-density lipoprotein scavenger receptor CD36 in plasma： a novel marker of insulin resistance. Circulation， 2006， 114（11）： 1169-1176.

1. 2. 3 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物直接測序 PCR產(chǎn)物用凝膠電泳DNA回收試劑盒純化回收DNA片段后， 送北京奧萊博生物技術(shù)有限責(zé)任公司， 完成PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測序。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析。3 討論

CD36是B類清道夫受體， 具有多種生物學(xué)功能， 參與包括炎癥、止血、免疫清除、脂質(zhì)代謝和動脈硬化在內(nèi)的許多生理和病理過程[2， 3]。國內(nèi)外研究已證明CD36與動脈硬化的形成有關(guān)。Susztak等[4]在研究糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制中發(fā)現(xiàn)CD36的表達(dá)伴隨近端小管上皮細(xì)胞凋亡以及小管上皮細(xì)胞變性， 高糖環(huán)境刺激近端小管上皮細(xì)胞可表達(dá)CD36。Sampson等[5]研究發(fā)現(xiàn)2型糖尿病患者發(fā)現(xiàn)2型糖尿病單核細(xì)胞上CD36表達(dá)上調(diào)， 認(rèn)為2型糖尿病的發(fā)生與CD36表達(dá)增強(qiáng)有一定關(guān)系。鄭壽煥等[6， 7]研究認(rèn)為， 糖尿病患者血清中sCD36水平明顯升高， 且sCD36水平與血糖波動有關(guān)， CD36內(nèi)含子3[TG]重復(fù)序列基因多態(tài)性與T2DM患者的發(fā)生有關(guān)。Griffin等[8]證實(shí)了葡萄糖可以通過增強(qiáng)CD36 mRNA的翻譯過程上調(diào)其蛋白質(zhì)的表達(dá)， 從而進(jìn)一步上調(diào)CD36的表達(dá)。體外實(shí)驗(yàn)也已經(jīng)證明[9]， 高血糖環(huán)境可上調(diào)CD36表達(dá)。Aase Handberg[10]等也用ELISA的方法檢測2型糖尿病患者血漿中sCD36的含量， 發(fā)現(xiàn)2型糖尿病患者血漿中sCD36是正常組的4.5倍， 并與胰島素抵抗有關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn)總體人群正常組與2型糖尿病患者之間CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)序列各種單體型及基因型分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義蒙古族與漢族之間CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)序列各種單體型及基因型分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)序列13次的單體型在蒙古族人群中正常組與2型糖尿病患者之間分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義并且CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)序列13/n的基因型在蒙古族人群中正常組與2型糖尿病患者之間分布比較。根據(jù)研究結(jié)果考慮CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)序列13次的單體型是蒙古族發(fā)生2型糖尿病的危險基因。

綜上所述， 本研究認(rèn)為CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)序列13次的單體型是蒙古族發(fā)生2型糖尿病的危險基因， 而CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)次數(shù)對CD36的表達(dá)及對2型糖尿病的發(fā)生和發(fā)展中的影響機(jī)制尚不明確， 需進(jìn)一步研究。

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1. 2. 3 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物直接測序 PCR產(chǎn)物用凝膠電泳DNA回收試劑盒純化回收DNA片段后， 送北京奧萊博生物技術(shù)有限責(zé)任公司， 完成PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測序。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析。3 討論

CD36是B類清道夫受體， 具有多種生物學(xué)功能， 參與包括炎癥、止血、免疫清除、脂質(zhì)代謝和動脈硬化在內(nèi)的許多生理和病理過程[2， 3]。國內(nèi)外研究已證明CD36與動脈硬化的形成有關(guān)。Susztak等[4]在研究糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制中發(fā)現(xiàn)CD36的表達(dá)伴隨近端小管上皮細(xì)胞凋亡以及小管上皮細(xì)胞變性， 高糖環(huán)境刺激近端小管上皮細(xì)胞可表達(dá)CD36。Sampson等[5]研究發(fā)現(xiàn)2型糖尿病患者發(fā)現(xiàn)2型糖尿病單核細(xì)胞上CD36表達(dá)上調(diào)， 認(rèn)為2型糖尿病的發(fā)生與CD36表達(dá)增強(qiáng)有一定關(guān)系。鄭壽煥等[6， 7]研究認(rèn)為， 糖尿病患者血清中sCD36水平明顯升高， 且sCD36水平與血糖波動有關(guān)， CD36內(nèi)含子3[TG]重復(fù)序列基因多態(tài)性與T2DM患者的發(fā)生有關(guān)。Griffin等[8]證實(shí)了葡萄糖可以通過增強(qiáng)CD36 mRNA的翻譯過程上調(diào)其蛋白質(zhì)的表達(dá)， 從而進(jìn)一步上調(diào)CD36的表達(dá)。體外實(shí)驗(yàn)也已經(jīng)證明[9]， 高血糖環(huán)境可上調(diào)CD36表達(dá)。Aase Handberg[10]等也用ELISA的方法檢測2型糖尿病患者血漿中sCD36的含量， 發(fā)現(xiàn)2型糖尿病患者血漿中sCD36是正常組的4.5倍， 并與胰島素抵抗有關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn)總體人群正常組與2型糖尿病患者之間CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)序列各種單體型及基因型分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義蒙古族與漢族之間CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)序列各種單體型及基因型分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)序列13次的單體型在蒙古族人群中正常組與2型糖尿病患者之間分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義并且CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)序列13/n的基因型在蒙古族人群中正常組與2型糖尿病患者之間分布比較。根據(jù)研究結(jié)果考慮CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)序列13次的單體型是蒙古族發(fā)生2型糖尿病的危險基因。

綜上所述， 本研究認(rèn)為CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)序列13次的單體型是蒙古族發(fā)生2型糖尿病的危險基因， 而CD36內(nèi)含子3 [TG]重復(fù)次數(shù)對CD36的表達(dá)及對2型糖尿病的發(fā)生和發(fā)展中的影響機(jī)制尚不明確， 需進(jìn)一步研究。

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[7] 鄭壽煥， 張春子， 楊秀麗，等. 葡萄糖濃度及CD36基因多態(tài)性對單核細(xì)胞表面CD36表達(dá)水平的影響.中國實(shí)用內(nèi)科雜志， 2012（6）：23-24.

[8] Griffin E， Re A，Hamel N， et al.Alink between diabetes and at herosclersis： Glucose regu-lates expression of CD36 at the level of translstion . Net med， 2001（7）：840-846.

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