胡 靜 王海倫 張 輝 李增智 岳 旺 張繼國

(1.滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院， 河北 滄州 061001； 2.泰山醫(yī)學院，山東 泰安 271016)

癌癥目前已成為人類面臨的一大殺手，藥物治療雖有一定的療效，但化療后可引起嚴重惡心、嘔吐等胃腸道反應。頻繁的嘔吐可導致消化液大量丟失，水、電解質(zhì)、酸堿平衡紊亂，嚴重影響病人的生存質(zhì)量，不僅會影響到療效，甚至使病人難以忍受而中斷治療?，F(xiàn)臨床常用的止吐藥包括NKl和5-HT3受體拮抗劑、激素等，價格昂貴，使用范圍窄且毒副反應大[1-2]，臨床多需聯(lián)合用藥，且未見抗癌增效作用，因此期待天然減毒增效藥物的研制。

姜辣素是從姜(zingiber)中提取的活性成份[3]，前文[4]已觀察到姜辣素可對抗抗癌藥順鉑所致嘔吐，并抑制腸道嗜鉻細胞釋放致吐因子5-HT和P物質(zhì)，姜辣素作用于化療嘔吐最相關(guān)的NK1和5-HT3等受體，為多靶點、天然低毒止吐藥。蘆根(Rhizoma phragmites)為單子葉植物禾本科蘆葦(phragmites communistrin)的地下根莖的新鮮或干燥根莖。歸肺經(jīng)、胃經(jīng)，能生津、止吐、利尿、退黃疸和解毒，對維持體液平衡，清除體內(nèi)毒物起一定作用[5-6]。本實驗證明了姜與蘆根組合物對癌癥放、化療引起的嘔吐等副作用有較好的療效并能同時起到輔助抑制腫瘤的效果。

1 材料與方法

1.1實驗動物 (1)昆明種小鼠，體重(20±2) g，由青島市藥檢所實驗動物中心提供。實驗前自由進食飲水，24 h自然光照射。(2)健康成年水貂，體重1.3～1.8 kg，雄性，由青島特種養(yǎng)殖動物飼養(yǎng)中心提供，每只動物單獨置于75 cm×50 cm×50 cm的鐵籠中，24 h自然光照射，實驗前自由進食飲水。

1.2主要試劑 (1)蘆根，由青島眾生大藥房購買。生姜，購于山東平度，由泰山醫(yī)學院技術(shù)室鑒定為姜科植物姜的塊莖。(2)順鉑(cisplatin)，山東齊魯制藥廠生產(chǎn)，批號：903005CE，20 mg/支。(3)鹽酸昂丹司瓊注射液，奧賽康制藥，批號：090102，2 ml:4 mg。(4)環(huán)磷酰胺，江蘇恒瑞醫(yī)藥制藥股份有限公司產(chǎn)品。

1.3實驗方法

1.3.1姜蘆組合物治療嘔吐作用的藥效學研究 將水貂隨機分為4組，每組6只，A組為順鉑模型對照組，B組為昂丹司瓊陽性藥物組，C組為姜辣素，D組為本發(fā)明的姜蘆組合物(蘆根提取物、姜辣素按24∶1比例混合)。A組給予生理鹽水預處理；B組給予昂丹司瓊7.5 mg·kg-1預處理；C組給予以姜辣素10 g·kg-1(相當于含生藥量)ig預處理；D組給予本發(fā)明的姜蘆組合物10 g·kg-1(相當于含生藥量)ig預處理，各組均在給藥30 min給予順鉑7.5 mg·kg-1ip。觀察水貂在給藥后6 h內(nèi)的嘔吐反應，記錄其嘔吐潛伏期，干嘔及嘔吐次數(shù)。

1.3.2姜蘆組合物抗腫瘤作用的藥效學研究 對小鼠S180肉瘤生長的抑制實驗：采用傳代5～7天，生長良好的乳白色腹水，以適量無菌生理鹽水稀釋成瘤細胞懸液，細胞數(shù)為107/ml，每組12只，每鼠右腋窩皮下接種0.2 ml(含瘤細胞2×106個)。接種次日隨機分組，實驗組將本發(fā)明的姜蘆組合物分為(200，100 mg/ml)2個劑量組，每鼠灌胃0.5 ml；陰性對照組給予0.5 ml蒸餾水；陽性藥物組給予環(huán)磷酰胺20 mg·kg-1·d-1，連續(xù)給藥10天。常規(guī)飼養(yǎng)，飲水，食物不限。停藥次日，小鼠全部脫頸處死，取皮下實體瘤瘤塊，稱重，按下列公式計算腫瘤抑制率(%)：腫瘤抑制率=[對照組平均瘤重(C)-實驗組平均瘤重(T)]/對照組平均瘤重(C)。對小鼠肝癌H22生長的抑制實驗：分組、劑量、給藥方式、實驗時間與S180肉瘤株相同。(3)對小鼠艾氏腹水瘤(實體瘤)的抑制實驗：分組、劑量、給藥方式、實驗時間與S180肉瘤株相同。

2 結(jié) 果

2.1姜蘆組合物治療嘔吐作用的藥效學研究 與對照組比較，各治療組均能明顯減輕干嘔及嘔吐次數(shù)并延長嘔吐潛伏期(P<0.01)。姜辣素組、姜辣素與蘆根提取物配伍組，生姜蘆根水煎濃縮提取物組，及姜蘆組合物能夠顯著降低致嘔率。其中生姜蘆根水煎濃縮提取物組與昂丹司瓊組相同；而姜蘆組合物組致嘔率低于昂丹司瓊組。結(jié)果見表1。

表1 姜蘆組合物對順鉑(7.5 mg/kg-1,ip)致吐的影響

注：a相當于含生當量，與對照組比較cP<0.01。

2.2姜蘆組合物抗腫瘤作用的藥效學研究 本姜蘆組合物2個劑量組對S180、H22、EAC與陰性對照組比較，均有不同程度抑制作用，尤其以高劑量組對腫瘤的抑制率最高，如表2～4。

表2 姜蘆組合物膠囊劑對S180小鼠的腫瘤抑制作用

注：與對照組比較，cP<0.01。

表3 姜蘆組合膠囊劑對H22小鼠的腫瘤抑制作用

注：與對照組相比，bP<0.01。

表4 姜蘆組合物膠囊劑對EAC小鼠的腫瘤抑制作用

注：與對照組相比，cP<0.01。

3 討 論

目前北美產(chǎn)的雪貂(ferret)[7]被公認為是較理想的嘔吐動物模型，因為雪貂的嘔吐行為與人類極為相似[8]，也有惡心、干嘔和嘔吐的特征行為，目前雪貂在國外已被廣泛應用于嘔吐的研究，本研究采用岳旺等[9]成功首創(chuàng)的新型水貂嘔吐模型，其嘔吐行為與人類相似，而且其免疫組化結(jié)果與雪貂的測定結(jié)果一致，對順鉑等致吐劑的反應良好[10]，最重要的一點是水貂價格便宜，降低了研究成本。雌性水貂周期性分泌雌性激素，雌性激素對嘔吐反應有影響。因此，本研究選用雄性水貂來驗證組合物的抗嘔吐作用。

腫瘤化療性惡心與嘔吐(chemotherapy-induced nausea and vomiting，CINV)是腫瘤患者在化療過程中最常見的嚴重不良反應。CINV的發(fā)生機制非常復雜，主要是細胞毒性藥物或化療藥物和其在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的刺激，通過5-HT3受體、多巴胺受體、組胺受體、毒蕈堿受體等一系列受體起作用，并將信號傳遞到嘔吐中樞引發(fā)嘔吐。目前使用的化療藥物中順鉑所致的惡心嘔吐反應最為嚴重，達90%～100%[11]，所以本實驗采用順鉑作為致嘔藥物。根據(jù)嘔吐反射發(fā)生機制，臨床常用止吐劑為5-HT3受體阻滯劑(昂丹司瓊等)，對急性化療嘔吐雖有效率可達85%，但僅作用于單一受體，具有眩暈、頭痛、便秘及消化不良等不良反應，且其價格昂貴。

姜辣素(gingerols)[12]是生姜中具有抗嘔吐活性的主要特有的辛辣活性成分，姜辣素可對抗無機及有機毒物硫酸銅和順鉑所致嘔吐，并抑制腸道嗜鉻細胞釋放致吐因子5-HT3和P物質(zhì)，姜辣素作用于化療嘔吐相關(guān)的NK1和5-HT3受體，為多靶點、天然低毒止嘔藥物。

蘆根多糖是蘆根(Rhizoma phragmites)中天然活性成分，在鮮蘆根中含量2.6%～3%,由于其結(jié)構(gòu)和性質(zhì)的特殊(分子中阿拉伯糖是左旋糖，較少見)，抗氧化性很強，具有清除生物體內(nèi)自由基的作用和增強肝細胞抗損傷能力，降低損傷組肝臟內(nèi)毒物的含量[5]。本文經(jīng)實驗已確定了二者發(fā)揮抗嘔吐作用的最佳比例，并申報國家新藥發(fā)明專利(CN201210121145.8)。

S180,H22，EAC是研究藥物抗腫瘤作用的常用動物模型。本實驗觀察了蘆根與生姜組合物對三種常見癌模型的作用。姜抗癌止吐作用已有報道，但蘆根研究較少，已有文獻報道了其抗癌作用[5]。本實驗研究結(jié)果表明姜蘆組合物具有抗癌止吐作用，這為創(chuàng)制天然、低毒、多靶點的抗癌止吐藥提供了實驗基礎(chǔ)。

[1] 王梅子，許建衡.化療止吐藥的研究進展[J] .汕頭大學醫(yī)學院學報，2008，21(2)：123-125.

[2] 何舒.化療止吐藥的研究進展[J].國外醫(yī)學:藥學分冊, 2003, 30(6):333-337.

[3] 王耀霞，楊志宏.姜辣素在2種嘔吐動物模型中止嘔作用機制的探討[J].沈陽藥科大學學報，2009，26(2)：134-137.

[4] 牟群芳，羅宜人.小半夏湯對水貂嘔吐模型作用機制的研究[J].神經(jīng)藥理學報，2012，1(3)：23-26.

[5] 張國升,凡明月,彭代銀，等.蘆根多糖對四氯化碳小鼠肝損傷的保護作用[J].中國藥理學通報,2002,18(3):354-355.

[6] 晁若瑜,楊靖亞,蔡曉曄,等.蘆根多糖的分離純化和體外抗腫瘤研究[J].食品工業(yè)科技，2011，12：284-286.

[7] Ueno S, Matsuke N, Saito H. Suncus merinos: a new experimental model in emesis research[J]. Life Sci, 1987, 41: 513-518.

[8] Fozard JR. Neuronal 5-HT receptors in the periphery[J]. Neuropharmacol, 1984, 23: 1473-1486.

[9] 岳旺,張芳,王蕾,等.一種新型嘔吐動物模型-水貂 [J].藥學學報, 2003, 8(2): 89-91.

[10] Endo T, Minami M, Nakayasu M, et al. Effects of granisetron and vagotomy on c-fos mRNA expression in the rat medulla obiongata as assessed by in situ hybridization[J]. Biomed Res, 2004, 25: 229-235.

[11] 石麗娟，王德山.中醫(yī)藥治療腫瘤化療所致嘔吐的研究進展[J].遼寧中醫(yī)雜志,1998，25(3)：143-144.

[12] 聶克.嘔吐動物模型的研究進展及評價[J].中國藥理學通報，2007,23(4)：555-557.