徐運(yùn)杰

（三河湘大駱駝飼料有限公司，河北 三河 101601）

家禽日糧中添加亞治療劑量的抗生素具有促生長(zhǎng)、改善料肉比、改變腸道菌群和降低發(fā)病率等效果，這促使了抗生素在畜禽日糧中的應(yīng)用。抗生素促生長(zhǎng)的機(jī)制可能是抑制亞臨床感染的發(fā)生，減少抑制動(dòng)物生長(zhǎng)的微生物代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生，減少腸道微生物對(duì)養(yǎng)分的競(jìng)爭(zhēng)性吸收利用，使腸壁變薄。但隨后發(fā)現(xiàn)，抗生素給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)經(jīng)濟(jì)效益的同時(shí)，也給人類健康帶來(lái)了極大的危害，即細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生。為了人類健康和打造綠色食品，動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)家對(duì)抗生素的替代品進(jìn)行了廣泛而深入的研究。通常認(rèn)為，抗生素促生長(zhǎng)劑替代品的基本標(biāo)準(zhǔn)是促生長(zhǎng)、抗疾病和無(wú)殘留。替代品的種類有很多，包括酶制劑、中草藥、植物提取物、酵母培養(yǎng)物、益生元、有機(jī)酸、短鏈脂肪酸、抗菌肽和益生菌制劑等。益生菌制劑是指當(dāng)攝入量充足時(shí)，能夠提高人類、畜禽宿主或植物寄主健康水平的人工培養(yǎng)菌群及其代謝產(chǎn)物或促進(jìn)宿主或寄主體內(nèi)正常菌群生長(zhǎng)的微生物制劑的總稱，可調(diào)整宿主體內(nèi)的微生態(tài)失調(diào)，保持微生態(tài)平衡。

1 菌株和標(biāo)準(zhǔn)

益生菌制劑菌種的選擇標(biāo)準(zhǔn)是非病原菌、適宜工業(yè)化生產(chǎn)、抗酸和抗膽汁、能夠代謝產(chǎn)生抗菌物質(zhì)、調(diào)控機(jī)體免疫反應(yīng)、影響腸道的代謝活動(dòng)、不能被消化酶水解吸收[1]。但單個(gè)菌株不能夠完全滿足標(biāo)準(zhǔn)，因此目前飼用的商品益生菌制劑多為復(fù)合添加劑。最常用的菌株有乳酸菌和雙歧桿菌，還有芽孢桿菌、擬桿菌、丙酸桿菌、酵母和各種真菌。在歐洲國(guó)家，單菌株的益生菌制劑在市場(chǎng)上占主導(dǎo)地位，包括蠟樣芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、屎腸球菌、乳酸球菌、乳酸桿菌、鼠李糖乳桿菌、干酪乳桿菌、植物乳桿菌、嬰兒鏈球菌和釀酒酵母等。在其他地區(qū)，大部分益生菌制劑成分不明確，菌種主要來(lái)自于健康動(dòng)物的腸道[2]。部分菌株的生物安全還不完全清楚。腸球菌可以用作益生菌制劑和奶酪生產(chǎn)，但從臨床感染分離出的腸球菌可以引起畜禽敗血病。因此，在歐洲和美國(guó)，用于益生菌制劑的菌株需要進(jìn)行嚴(yán)格的安全性研究，包括動(dòng)物耐量試驗(yàn)、皮膚和眼的刺激試驗(yàn)、皮膚敏化試驗(yàn)、系統(tǒng)的毒性試驗(yàn)和安全性評(píng)估等。歐洲食品安全局對(duì)用于益生菌制劑菌株的評(píng)定技術(shù)通則是“安全合理推定”（OPS），美國(guó)是“通常認(rèn)為是安全的”（GRAS），我國(guó)是“NY/T 1444-2007微生物飼料添加劑技術(shù)通則”。

2 益生菌在家禽中的應(yīng)用

研究表明，在蛋雞和肉雞日糧中添加益生菌制劑，提高了生產(chǎn)性能和飼料效率。因?yàn)橥庠刺砑拥挠幸婢种屏四c內(nèi)有害菌并與有害菌競(jìng)爭(zhēng)性爭(zhēng)奪定植位點(diǎn)和養(yǎng)分，減少有毒代謝物的產(chǎn)生，提高了機(jī)體的免疫力，從而改善了腸道健康，內(nèi)源酶活性增加，最終使飼料養(yǎng)分消化吸收利用更徹底[3-4]。McReynolds等研究報(bào)道，外源添加益生菌減少了肉雞腸道中的大腸桿菌、沙門氏菌、空腸彎曲菌和堆型艾美爾球蟲(chóng)[5]。Dalloul等飼喂乳酸菌日糧給感染堆型艾美爾球蟲(chóng)的肉仔雞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組肉仔雞腸道的上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞的識(shí)別標(biāo)記增加，同時(shí)血液中更早產(chǎn)生白細(xì)胞介素2（IL-2）和γ-干擾素（IFN-γ）[6]。另外，添加有乳酸菌的維生素A缺乏型日糧飼喂給感染堆型艾美爾球蟲(chóng)的肉仔雞研究發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組肉仔雞的免疫調(diào)節(jié)能力更強(qiáng)，糞便中排出的球蟲(chóng)比對(duì)照組高400%[7]。高侃等總結(jié)了益生菌對(duì)腸道上皮屏障功能的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制，微生物通過(guò)Toll-受體介導(dǎo)、細(xì)胞凋亡蛋白酶依賴的信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)等信號(hào)通路和免疫反應(yīng)來(lái)增強(qiáng)腸道上皮細(xì)胞的屏障功能，包括促進(jìn)黏液層的形成、分泌抗菌因子、促進(jìn)腸道分泌型免疫蛋白A的分泌、競(jìng)爭(zhēng)黏附腸道上皮細(xì)胞和增進(jìn)緊密連接形成[8]。張春楊等研究報(bào)道，用產(chǎn)蛋白酶的益生菌制備成益生菌劑飼喂肉雞，能促進(jìn)免疫器官的生長(zhǎng)發(fā)育，提高免疫器官指數(shù)，分別提高脾臟、法氏囊、胸腺指數(shù)為18.47%、6.42%、41.63%；也能促進(jìn)消化道的生長(zhǎng)發(fā)育，提高消化道重量指數(shù)最高達(dá)27.55%；提高循環(huán)抗體的水平（提高約8.77%）和消化道內(nèi)容物中的蛋白酶活力（提高約21.76%）；因而能極顯著的促進(jìn)肉用仔雞的生長(zhǎng)發(fā)育，減少料肉比8.96%，大幅提高了生產(chǎn)效益[9]。吳紅翔等研究證明，添加木寡糖益生菌和益生菌可以促進(jìn)雞部分免疫器官發(fā)育，降低血清尿素氮含量[10]。Sohail等報(bào)道，益生菌可以維持肉雞熱應(yīng)激時(shí)腸道菌群的平衡，直接或間接影響下丘腦－垂體－腎上腺和下丘腦－垂體－甲狀腺軸的活動(dòng)，降低腎上腺皮質(zhì)醇水平，減輕炎癥反應(yīng)，增強(qiáng)機(jī)體體液免疫反應(yīng)[11]。Wu等研究報(bào)道，乳酸桿菌、雙歧桿菌、鼠李糖乳桿菌均能激活增強(qiáng)不同部位如淋巴集結(jié)、脾臟和腹膜中巨噬細(xì)胞的吞噬活性；調(diào)控途徑包括Toll樣受體介導(dǎo)、核轉(zhuǎn)錄因子-κB信號(hào)通路和絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路[12]。王少璞等報(bào)道，益生菌通過(guò)水解腸道內(nèi)膽鹽、吸收或吸附腸道內(nèi)膽固醇、轉(zhuǎn)化膽固醇為腎固醇、提高腸道內(nèi)揮發(fā)性脂肪酸含量，抑制肝臟膽固醇合成、下調(diào)小腸上皮細(xì)胞膜和肝臟細(xì)胞膜中NPC1L1基因的表達(dá)，抑制小腸對(duì)膽固醇的吸收等途徑調(diào)節(jié)膽固醇的代謝，降低血清膽固醇含量[13]。

3 益生菌替代抗生素的研究應(yīng)用

微生物飼料添加劑通過(guò)營(yíng)養(yǎng)調(diào)控維護(hù)腸道健康和改善腸道功能，是非常有潛力的抗生素替代品。Yang等研究了丁酸梭菌替代抗生素對(duì)嶺南黃雞生長(zhǎng)性能、免疫功能和盲腸微生物組成的影響，結(jié)果表明，日糧中添加丁酸梭菌降低了14～42日齡嶺南黃雞盲腸中大腸桿菌、沙門氏菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量，提高了乳酸桿菌和雙歧桿菌的數(shù)量，與對(duì)照組相比，整個(gè)試驗(yàn)期試驗(yàn)組腸道中丁酸梭菌的含量高于對(duì)照組，且生產(chǎn)性能和免疫性能更優(yōu)[14]。Wolfenden等研究報(bào)道，枯草芽孢桿菌使23日齡肉仔雞體重達(dá)到853 g，優(yōu)于硝苯胂酸的852 g，同時(shí)也使盲腸中定植的沙門氏菌減少了25%[15]。

4 安全性評(píng)價(jià)

益生菌的安全性評(píng)價(jià)是一個(gè)系統(tǒng)工程，包括益生菌的抗生素抗性、益生菌的致病基因潛在的可能性以及毒性代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生、益生菌對(duì)宿主組織的黏附性、血小板凝集反應(yīng)、溶血作用、對(duì)宿主防御機(jī)制的抵抗能力、降解結(jié)合膽鹽的能力、對(duì)胃腸黏膜蛋白的分解能力等體外、體內(nèi)研究[16]。目前由于各國(guó)對(duì)益生菌的規(guī)定不同，在國(guó)際水平上還缺乏統(tǒng)一的益生菌安全性評(píng)價(jià)方法和管理要求。隨著研究的不斷深入和全球化的不斷發(fā)展，對(duì)益生菌安全性的評(píng)價(jià)和管理將逐步趨于標(biāo)準(zhǔn)化，從而推動(dòng)益生菌產(chǎn)業(yè)健康、有序地發(fā)展下去。

5 小 結(jié)

益生菌制劑是安全綠色的飼料添加劑，實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)根據(jù)動(dòng)物的具體特點(diǎn)來(lái)選擇合適的益生菌制劑，進(jìn)而起到改善動(dòng)物生產(chǎn)性能和環(huán)境的作用。國(guó)內(nèi)外關(guān)于益生菌的研究雖然比較深入，但益生菌如腸球菌的最適生長(zhǎng)溫度為35℃，大多數(shù)在10～45℃能生長(zhǎng)，在6.5%NaCl、pH 9.6的介質(zhì)中也能生長(zhǎng)，大多數(shù)菌株在60℃可存活30 min，而畜禽顆粒料的制粒溫度是70～90℃。因此，溫度對(duì)益生菌活性的影響應(yīng)采用以下方法進(jìn)行研究：采集飼料混合后制粒前的粉料樣品進(jìn)行培養(yǎng)，觀察益生菌的活性；采集相同環(huán)模壓縮比、不同制粒溫度下制成的顆粒飼料進(jìn)行培養(yǎng)，觀察益生菌的活性；采集相同制粒溫度、不同環(huán)模壓縮比制成的顆粒飼料進(jìn)行培養(yǎng)，觀察益生菌的活性。另外，在北方寒冷天氣條件下，為了在飼料中更有效的利用益生菌添加劑，還應(yīng)深入研究環(huán)境溫差應(yīng)激對(duì)益生菌的活性影響。顆粒飼料貯存時(shí)間對(duì)所添加益生菌活性的影響也是一個(gè)值得研究的課題。

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