張麗麗 王會奇 脫厚珍 馮子敬 王佳偉 李繼梅 張擁波 王得新

腦血管病急性期MMP-9、IL-6和IL-10水平變化的研究

張麗麗 王會奇 脫厚珍 馮子敬 王佳偉 李繼梅 張擁波 王得新

目的 探討基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）和白細(xì)胞介素-10（IL-10）與腦動(dòng)脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定性以及腦梗死的關(guān)系。方法 選擇急性腦血管病患者56例，其中反復(fù)短暫性腦缺血發(fā)作（TIA）16例，急性腦梗死40例。對照組為21例健康體檢者。所有缺血性腦血管病患者均經(jīng)頭CT血管造影（CTA）檢查或頸部血管超聲證實(shí)存在不穩(wěn)定斑塊，且發(fā)病機(jī)制考慮與不穩(wěn)定斑塊破裂有關(guān)。采用ELISA方法檢測各組血清MMP-9、IL-6和IL-10水平并進(jìn)行比較。結(jié)果 急性腦梗死組患者血清中MMP-9、IL-10水平分別為（137.10±69.38）ng/mL和（39.16±32.82）pg/mL，TIA組患者血清中MMP-9、IL-10水平分別為（119.79 ±65.54）ng/m L和（33.00±21.36）pg/m L，均明顯高于對照組﹝分別為（65.42±36.81）ng/m L和（19.83± 12.16）pg/m L﹞；腦梗死組患者血清MMP-9及IL-10水平均高于TIA組（均＜0.05）。各組間IL-6水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均＞0.05）。結(jié)論 MMP-9和IL-10水平升高可能與動(dòng)脈粥樣硬化不穩(wěn)定斑塊破裂以及腦梗死灶形成有關(guān)。

不穩(wěn)定斑塊；基質(zhì)金屬蛋白酶-9；白細(xì)胞介素-6；白細(xì)胞介素-10

近年來心腦血管疾病已成為導(dǎo)致我國人群死亡的主要疾病，大量研究表明，易損斑塊脫落和破裂導(dǎo)致動(dòng)脈管腔血栓形成是造成缺血事件的主要機(jī)制。一些抗炎與促炎因子在發(fā)病早期即可在外周血中被檢測到。檢測其水平有助于探討不穩(wěn)定斑塊與缺血性腦血管病的關(guān)系。本研究對不穩(wěn)定斑塊破裂所致急性腦梗死和短暫性腦缺血發(fā)作（transient ischemic attack，TIA）患者及健康對照者血清中的基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、白細(xì)胞介素-10（IL-10）水平進(jìn)行檢測，探討其與不穩(wěn)定斑塊破裂的關(guān)系。

1 對象和方法

1.1 觀察對象 腦梗死組：急性腦梗死患者共44例，男34例、女10例，年齡39～86歲，平均（64.02±12.12）歲。全部病例均為2012-03—2012-09在北京友誼醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科的住院患者，且為發(fā)病3 d以內(nèi)的首次發(fā)生缺血性腦血管病患者。診斷依據(jù)1996年第四屆全國腦血管病學(xué)術(shù)會議修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)［1］，并經(jīng)DWI證實(shí)存在新發(fā)梗死，經(jīng)頭CT血管造影術(shù)（CTA）檢查或頸部血管超聲證實(shí)存在大血管的不穩(wěn)定斑塊，符合TOAST分型中大動(dòng)脈粥樣硬化型腦梗死中的動(dòng)脈到動(dòng)脈栓塞或載體動(dòng)脈阻塞穿支機(jī)制；并除外心源性栓塞和單純低灌注或穿支病變引起的急性腦梗死。眾所周知，由不穩(wěn)定斑塊破裂所致栓子脫落可引起動(dòng)脈-動(dòng)脈栓塞性腦梗死或引起微栓塞型TIA［2］。因目前檢測手段有限 ，并未對所有入組患者進(jìn)行微栓子監(jiān)測。但所有缺血性腦血管病患者均經(jīng)頭CTA檢查或頸部血管超聲證實(shí)存在不穩(wěn)定斑塊，且結(jié)合臨床，其發(fā)病機(jī)制考慮與不穩(wěn)定斑塊破裂有關(guān)。

TIA組：共16例，男11例、女5例。年齡47～87歲，平均年齡（64.86±13.23）歲。所有病例均在3 d內(nèi)反復(fù)發(fā)作至少2次以上，DWI未發(fā)現(xiàn)新發(fā)梗死灶。經(jīng)頭CTA檢查或頸部血管超聲證實(shí)責(zé)任血管存在不穩(wěn)定斑塊。所有患者均于首次發(fā)病3 d內(nèi)入組。

對照組：為友誼醫(yī)院干部保健科健康體檢者，共21名，男15名、女6名，年齡45～79歲，平均年齡（67.43±9.88）歲。既往無腦血管病及其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病史，頸部血管超聲及頭顱CTA檢查均正常，并排除近期有感染史者。

所有入組病例排除標(biāo)準(zhǔn)：患有明顯肝、腎疾病或心功能衰竭，各系統(tǒng)惡性腫瘤、嚴(yán)重全身感染及急性冠脈綜合征、周圍血管病及關(guān)節(jié)炎者，腦梗死組中除外心源性栓塞及單純低灌注引起的分水嶺腦梗死患者。且各組間年齡、性別、高血壓、糖尿病病史等差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 腦動(dòng)脈粥樣斑塊性質(zhì)檢測：頸部血管超聲檢測采用美國飛利浦公司的ATL-HDI5000彩色多普勒超聲儀（超聲探頭頻率為5～12 MHz），常規(guī)檢查雙側(cè)頸總動(dòng)脈、頸動(dòng)脈分叉處、頸內(nèi)動(dòng)脈、椎動(dòng)脈。根據(jù)超聲特點(diǎn)將斑塊分型，即（1）不穩(wěn)定斑塊：局部呈低回聲、中等回聲或混合回聲的軟斑；（2）穩(wěn)定斑塊：局部呈高回聲或強(qiáng)回聲的硬斑［3］。選擇其中符合不穩(wěn)定斑塊診斷標(biāo)準(zhǔn)的入組。

頭頸部血管CTA檢查：所有入組者均于入院1周內(nèi)行64排螺旋CT血管成像檢查﹝頭頸CTA +CTP（血管成像+灌注成像）﹞，采用減影方法進(jìn)行后處理，分別記錄容積再現(xiàn)（VR）、最大密度投影（MIP）、薄層最大密度投影（TSMIP）圖像，利用這3種方法重建圖像綜合評價(jià)腦血管病變。選擇結(jié)果顯示責(zé)任血管存在低密度或混合低密度斑塊或潰瘍斑塊，且斑塊CT值＜50 HU者入組研究。

1.2.2 血清標(biāo)志物檢測：所有入組患者均于發(fā)病3 d內(nèi)抽取空腹靜脈血3 m L，以3000 r/min離心10 min后取血清，立即分裝儲存于—40℃冰箱待測。血清MMP-9、IL-6、IL-10水平檢測采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定，試劑盒購于Bioscience試劑公司（由上海森雄生物技術(shù)公司分裝）。操作按說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。所有計(jì)量資料數(shù)據(jù)經(jīng)正態(tài)分布性檢驗(yàn)，符合近似正態(tài)分布。三組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用檢驗(yàn)。以＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

表1 各組血清MMP-9、IL-6和IL-10水平比較 （±）

表1 各組血清MMP-9、IL-6和IL-10水平比較 （±）

注：與對照組比較，*＜0.05；與TIA組比較，△＜0.05

組別MMP-9（ng/mL） IL-6（pg/m L） IL-10（pg/m L）急性腦梗死組 44 137.10±69.38*△ 21.39±10.92 39.16±32.82*△TIA組 16 119.79±65.54* 24.35±20.45 33.00±21.36*對照組 21 65.42±36.81 18.51±2.76 19.83±12.16

3 討論

腦動(dòng)脈粥樣硬化作為缺血性腦血管病的基礎(chǔ)病變，是缺血性腦卒中的重要危險(xiǎn)因素。腦動(dòng)脈重度狹窄曾被認(rèn)為是引起急性腦血管病的主要原因。但近年來發(fā)現(xiàn)一些輕中度腦動(dòng)脈狹窄患者也會發(fā)生嚴(yán)重腦血管病，推測其原因可能為粥樣斑塊破裂所致栓塞或繼發(fā)急性血栓形成，而這兩者可能是構(gòu)成缺血性腦卒中發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)［4-5］。既往研究還發(fā)現(xiàn)，外周血中存在一些血清學(xué)因子，如基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）、白細(xì)胞介素等與斑塊不穩(wěn)定性有一定關(guān)系，可能是缺血性腦血管病的高危因素。

MMPs是一類能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)的蛋白酶的總稱，研究發(fā)現(xiàn)，MMP-9能促進(jìn)各種蛋白質(zhì)成分降解，使纖維帽變薄、強(qiáng)度降低，易于破裂、脫落，進(jìn)而使斑塊穩(wěn)定性降低、破裂，誘發(fā)急性腦梗死的發(fā)生。國內(nèi)外多項(xiàng)研究結(jié)果表明MMP-9與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的不穩(wěn)定性有關(guān)。Robertson等［6］對經(jīng)冠脈造影證實(shí)存在不穩(wěn)定斑塊的不穩(wěn)定型心絞痛或非ST段抬高型心肌梗死的患者血清進(jìn)行炎性標(biāo)志物檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)MMP-9水平升高，提示了MMP-9檢測對早期識別不穩(wěn)定斑塊具有重要意義。本研究結(jié)果顯示，腦梗死急性期MMP-9水平較對照組明顯升高，與文獻(xiàn)報(bào)道一致，提示MMP-9升高可能與梗死灶形成有關(guān)；僅有不穩(wěn)定斑塊破裂卻無梗死灶形成的TIA患者M(jìn)MP-9水平也明顯升高，提示MMP-9不但與腦梗死形成有關(guān)，與不穩(wěn)定斑塊破裂可能也有關(guān)，推測MMP-9升高可能導(dǎo)致不穩(wěn)定斑塊破裂，繼而導(dǎo)致腦梗死的發(fā)生。

除MMP-9外，導(dǎo)致不穩(wěn)定斑塊破裂的其他因素也一直是研究者關(guān)注的熱點(diǎn)。有許多細(xì)胞因子，如hsCRP等受到關(guān)注。近年來越來越多的研究者關(guān)注免疫因素在不穩(wěn)定斑塊破裂和缺血性腦血管病發(fā)病中的作用。IL-10被認(rèn)為是一種與腦缺血損傷和修復(fù)過程相關(guān)，具有神經(jīng)保護(hù)作用的抗炎細(xì)胞因子。IL-10在正常血管中不表達(dá)，而在成熟粥樣斑塊中可檢測到IL-10 m RNA及其蛋白。但斑塊穩(wěn)定性與血清IL-10水平關(guān)系的臨床研究結(jié)果尚不確定。Smith等［7］的研究發(fā)現(xiàn)不穩(wěn)定型心絞痛患者血清IL-10的水平明顯低于穩(wěn)定型心絞痛患者（＜0.0001）。而Waehre等［8］的研究顯示二者差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。趙玉玲等［9］通過檢測急性腦梗死患者發(fā)病1、3、7 d血清IL-10含量變化，發(fā)現(xiàn)急性腦梗死患者發(fā)病第1天IL-10水平顯著升高，第3天達(dá)到高峰，隨后逐漸下降，但持續(xù)到第7天仍高于對照組。本研究結(jié)果顯示腦梗死組血清IL-10水平明顯高于對照組（＜0.01），與趙玉玲等的研究結(jié)果一致，推測可能由于腦梗死發(fā)生后，病變區(qū)的血流被阻斷，局部腦組織缺血缺氧，周圍炎性因子的釋放增加，反饋性引起抗炎細(xì)胞因子IL-10表達(dá)增加；而TIA組IL-10水平也明顯高于對照組，表明IL-10升高不僅與急性腦梗死有關(guān)，可能也與斑塊不穩(wěn)定有關(guān)。由于IL-10可減少斑塊內(nèi)活動(dòng)性炎性反應(yīng)，使斑塊趨于穩(wěn)定，減少斑塊破裂的機(jī)會，推測在TIA組，可能由于斑塊不穩(wěn)定反饋性的導(dǎo)致IL-10升高。這還需要進(jìn)一步研究驗(yàn)證。

國內(nèi)江秀龍［10］通過對60例腦梗死患者進(jìn)行頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊性質(zhì)評價(jià)，發(fā)現(xiàn)腦梗死組中血漿IL-6水平明顯高于健康對照組，而腦梗死組中有頸動(dòng)脈粥樣斑塊組明顯高于無斑塊組，易損斑塊組高于非易損斑塊組，提示IL-6與易損斑塊形成高度相關(guān)。本研究結(jié)果顯示腦梗死組、TIA組與對照組間比較其血清IL-6水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與前人研究結(jié)果不一致。國外有文獻(xiàn)報(bào)道血清IL-6水平在梗死發(fā)生6 h內(nèi)顯著升高，24～36 h達(dá)高峰，第7天基本降至正常［11］。推測發(fā)病3 d時(shí)其IL-6水平可能已經(jīng)下降，另外，IL-6作為對缺血性腦損害的快速反應(yīng)的炎性因子，可能與其血清含量較低不易檢測到也有關(guān)系。今后可以改進(jìn)檢測方法和取樣時(shí)間，進(jìn)一步探討研究。

本研究主要探討了伴有斑塊破裂的急性腦血管病患者急性期血清中MMP-9、IL-6及IL-10水平，發(fā)現(xiàn)急性腦梗死及TIA患者IL-10與MMP-9均高于健康對照組，提示IL-10與MMP-9可能參與斑塊破裂及腦梗死灶形成，而IL-6水平各組間差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

［1］全國第四屆腦血管病學(xué)術(shù)會議.各類腦血管疾病診斷要點(diǎn)［J］.中華神經(jīng)科雜志，1996，29（6）：379-380.

［2］吳江.神經(jīng)病學(xué)（八年制教材）［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社. 2010.155-166.

［3］王荔，葉抗，李光來.血清MMP-9與腦梗死患者及其頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系研究［J］.卒中與神經(jīng)疾病，2009，16（2）：87-89.

［4］鄭凱，史庭慧，張?zhí)K明.頸動(dòng)脈粥樣硬化與缺血性進(jìn)展性腦卒中的相關(guān)性研究［J］.卒中與神經(jīng)疾病，2005，12（2）：71-73.

［5］張莉峰，劉運(yùn)海，楊期東，等.急性腦梗死患者頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的研究［J］.卒中與神經(jīng)疾病，2005，12（3）：135-137.

［6］Robertson L，Grip L，Mattsson Hultén L，et al.Release of protein as well as activity of MMP-9 from unstable atherosclerotic plaques during percutaneous coronary intervention［J］.J Intern Med，2007，262（6）：659-667.

［7］Smith DA，Irving SD，Sheldon J，et al.Serum levels of the antiinflammatory cytokine interleukin-10 are decreased in patients with unstable angina［J］.Circulation，2001，104（7）：746-749.

［8］Waehre T，Halvorsen B，Damas JK，et al.Inflammatory imbalance between IL-10 and TNFalpha in unstable angina potential plaque stabilizing effects of IL-10［J］.Eur J Clinical Invest，2002，32（11）：803-810.

［9］趙玉玲.IL-10對急性腦梗塞患者治療及預(yù)后的影響［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2007，34（11）：2189-2190.

［10］江秀龍.腦梗死患者頸動(dòng)脈斑塊與血漿白介素-6、脂蛋白（a）、纖維蛋白原的關(guān)系［J］.神經(jīng)病學(xué)與神經(jīng)康復(fù)學(xué)雜志，2009，6（3）：178-180.

［11］Beamer NB，Coull BM，Clark WM，et al.Interleukin-6 and interleukin-1 receptor antagonist in acute stroke［J］.Ann Neurol，1995，37（6）：800-805.

TUO Hou-zhen，Email：tuohzh@yahoo.com.cn

Objective To investigate the relationship between matrix metalloproteinase-9（MMP-9），interleukin-6（IL-6），interleukin-10（IL-10）and the stability of cerebral atherosclerotic plaque and cerebral infarction.Methods Serum of 56 patients with acute cerebral vascular diseases（including 16 repeated transient ischemic attack（TIA）and 40 acute cerebral infarction（ACI）），were collected within 3 days of onset，all the patients were given examinations such as computed tomography angiography（CTA）or Doppler ultrasonography or magnetic resonance angiography（MRA）to investigate if there was unstable plaque.The control group includes 21 healthy volunteers.The levels of serum MMP-9，IL-6 and IL-10 were detected using enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）in all the subjects.Results Patients with ACI and TIA had higher serum levels of MMP-9［（137.10±69.38）ng/m L and（119.79±65.54）ng/m L.（65.42±36.81）ng/m L，＜0.05］and IL-10［（39.16±32.82）pg/m L and（33.00±21.36）pg/m L.（19.83±12.16）pg/m L，＜0.05］than controls，there were also significant difference between the group ACI and TIA（＜0.05）.But there was no significant difference between groups in IL-6 level（＞0.05）.Conclusions MMP-9 and IL-10 levels rise in the acute period of ACI and TIA，suggesting that it may be related with the rupture of unstable plaque.

unstable plaque；MMP-9；IL-6；IL-10

R743.3

：A

：1006-2963（2014）06-0407-04

2013-09-02）

（本文編輯：鄒晨雙）

10.3969/j.issn.1006-2963.2014.06.007

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81241039）；科技新星計(jì)劃項(xiàng)目（2005B42）

首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科

脫厚珍，Email：tuohzh@yahoo.com.cn