陳尚良 李嘉琪 李結(jié)敏 余文潮 盧少芬 羅懷雪 肖素柳

1.廣東省肇慶市中心血站，廣東肇慶 526020；2.廣東省陽春監(jiān)獄醫(yī)院，廣東陽春 529600

HIV/HBV/HCV共感染者CD4+、CD8+T淋巴細胞計數(shù)的對比分析

陳尚良1李嘉琪2李結(jié)敏1余文潮1盧少芬1羅懷雪1肖素柳2

1.廣東省肇慶市中心血站，廣東肇慶 526020；2.廣東省陽春監(jiān)獄醫(yī)院，廣東陽春 529600

目的 研究HIV/HBV/HCV共感染者外周血CD4+、CD8+T淋巴細胞計數(shù)變化，探討共感染對HIV感染進程及患者機體免疫功能的影響。 方法 對75例HIV共感染樣本進行外周血CD4+、CD8+T淋巴細胞計數(shù)測定并進行分析。 結(jié)果4組的CD4+T淋巴細胞計數(shù)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；4組的CD8+T淋巴細胞計數(shù)及CD4+/CD8+比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。 結(jié)論 共感染會影響患者外周血CD8+T淋巴細胞計數(shù)及CD4+/CD8+比值，HIV/HBV/ HCV三重感染患者的CD8+T淋巴細胞計數(shù)較其他組高。

HIV；HBV；HCV；共感染；CD4；CD8

艾滋病是一種嚴重危害人類健康的傳染病，目前該病已波及全球200多個國家和地區(qū)，感染者總數(shù)已超6000萬，主要傳播途徑包括性接觸、輸血、不潔注射等。HIV病毒進入人體后，主要攻擊的靶標(biāo)為CD4+T淋巴細胞。CD4+T淋巴細胞的快速下降可迅速導(dǎo)致T淋巴細胞免疫功能缺陷，同時會對CD8等亞群T淋巴細胞造成不同程度損害，導(dǎo)致嚴重的機會感染及惡性腫瘤的發(fā)生，最終使HIV感染者死亡。有文獻研究表明，HIV感染者經(jīng)常合并其他病原體感染，尤其與肝炎病毒共感染，但共感染的后果并非一致[1]。HBV或HCV共感染可增加HIV感染者的死亡率，GBV-C病毒血癥對HIV感染有積極的作用[2]，可以延緩HIV感染的疾病進程，但可以確定，HIV共感染疾病進程與人體免疫狀態(tài)緊密相連，故測定HIV感染者外周血CD4+、 CD8+T淋巴細胞計數(shù)，在一定程度上可以判斷其進程與預(yù)后。本研究測定不同共感染模式HIV感染者的CD4+、CD8+T淋巴細胞計數(shù)，探討共感染對HIV感染進程以及患者機體免疫功能的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取廣東省某監(jiān)獄在押人員為研究對象，均為男性，年齡20～48歲，共獲取76份HIV感染者的樣本，其中1例樣本量不足，無法進行外周血T淋巴細胞計數(shù)，最終75份樣本納入研究，根據(jù)HIV共感染檢測結(jié)果，將其分為4組，A組為HIV感染，B組為HIV/ HBV感染，C組為HIV/HCV感染，D組為HIV/HBV/ HCV感染。A組12例，平均年齡（35.6±1.5）歲；B組7例，平均年齡（33.7±1.2）歲；C組49例，平均年齡（33.8± 0.8）歲；D組9例，平均年齡（31.8±0.6）歲。4組的年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.967），具有可比性。

1.2試劑與儀器

Tecan EVO全自動加樣儀 （瑞士Tecan集團公司），BEPⅢ全自動酶免分析儀（德國西門子公司），流式細胞計數(shù)儀（BD公司）；HIV抗原抗體檢測試劑盒（法國伯樂），HCV抗體檢測試劑盒（北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司），HBsAg檢測試劑盒（生物梅里埃），單克隆抗體：鼠抗人CD3-PC5/CD4-FITC/CD8-PE三色標(biāo)記及同型的IgG1-PC5/IgG1-FITC/IgG-PE（BD公司）。

1.3 實驗方法

1.3.1 血清學(xué)檢測 對所有在押人員采用ELISA進行HIV初篩，初篩陽性送HIV確證實驗室確證；HCV抗體、HBsAg檢測采用ELISA檢測。

1.3.2 外周血CD4+/CD8+T淋巴細胞檢測 靜脈采血5 ml，肝素抗凝，離心分離得外周淋巴細胞懸液，調(diào)整細胞濃度至105個/ml使用，取樣100 μl，加入三色標(biāo)記的鼠抗人CD3-PC5/CD4-FITC/CD8-PE，同時設(shè)立同型對照，室溫避光孵育30 min，上流式細胞儀檢測。計算CD4+、CD8+T淋巴細胞絕對數(shù)及CD4+/CD8+比值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析和處理，計量資料以±s表示，采用F檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

4組的CD4+T淋巴細胞計數(shù)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義 （P＞0.05）；4組的CD8+T淋巴細胞計數(shù)及CD4+/CD8+比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）（表1）。

表1 4組CD4+、CD8+T淋巴細胞計數(shù)及CD4+/CD8+的比較（±s）

表1 4組CD4+、CD8+T淋巴細胞計數(shù)及CD4+/CD8+的比較（±s）

組別 n C D4+（個/ m l） C D8+（個/ m l） C D4+/ C D8+A 組B 組C 組D 組1 2 7 4 7 9 P 值3 7 1 ± 6 7 3 1 8 ± 2 8 3 3 4 ± 7 9 2 6 4 ± 3 8 0 . 6 3 1 2 3 9 ± 1 8 2 7 5 3 ± 1 2 6 1 0 3 0 ± 5 9 1 4 0 4 ± 2 1 5 0 . 0 3 0 . 3 0 ± 2 . 8 0 . 4 2 ± 0 . 3 0 . 3 2 ± 0 . 5 0 . 1 9 ± 0 . 9 0 . 0 2

3 討論

HIV病毒感染后通常表現(xiàn)為獲得性免疫功能缺陷和機會性感染概率增大，外周血細胞計數(shù)表現(xiàn)為CD4+T淋巴細胞計數(shù)下降及CD4+/CD8+比例反轉(zhuǎn)，主要機制是HIV病毒在抗原提呈細胞的輔助下，通過抗原提呈細胞-T淋巴細胞的模式，在體內(nèi)蔓延感染CD4+T淋巴細胞，被感染的T淋巴細胞為自身免疫機制識別并被清除，導(dǎo)致CD4+T淋巴細胞數(shù)量下降，從而導(dǎo)致獲得性免疫缺陷[3]。在臨床實踐中，測定HIV患者外周血CD4+T淋巴細胞計數(shù)及CD4+/CD8+比值，有助于判定患者的病情進展及療效評價。HIV病毒感染者通常伴有其他病毒感染，如梅毒螺旋體、HCV病毒等肝炎病毒，使HIV患者的感染進程變得更加復(fù)雜，GBV-C與HIV的共感染是否能延緩HIV感染的進程，各家學(xué)者持有不同意見[4-6]。研究HIV共感染病毒之間的相互作用及其機制，是目前HIV感染研究的熱點之一[7]。

本實驗嘗試研究常見病毒HBV、HCV與HIV共感染的特征，檢測了75份共感染HIV患者的血清學(xué)指標(biāo)及外周血T淋巴細胞亞群計數(shù)，結(jié)果顯示，HIV、HIV/HBV、HIV/HCV、HIV/HBV/HCV感染組別間的CD4+T淋巴細胞計數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義，CD8+T淋巴細胞計數(shù)及CD4+/CD8+比值差異有統(tǒng)計學(xué)意義，與祝婷等[2]報道基本一致。本研究中的研究對象為監(jiān)獄在押人員，主要感染途徑是靜脈注射，且年齡大多集中在中青年，年齡比較均一，可排除年齡因素對機體免疫功能的影響，比較適合評估共感染HIV患者的免疫功能狀態(tài)。CD4+T淋巴細胞是免疫系統(tǒng)的重要輔助手段，主要表達于輔助T淋巴細胞，可參與輔助T淋巴細胞識別抗原的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，同時CD4+是HIV的重要受體，也是HIV病毒攻擊的主要對象，CD4+的數(shù)量與功能是判斷HIV患者免疫功能的重要依據(jù)。正常人體的CD4+T淋巴細胞數(shù)量為500～1600個/ml，HIV患者可能出現(xiàn)不規(guī)則的下降，當(dāng)降至200個/ml時，就可能導(dǎo)致機會性感染及惡性腫瘤，故臨床已將CD4+T淋巴細胞的計數(shù)水平作為HIV治療的重要指標(biāo)。HIV病毒特異攻擊CD4+T淋巴細胞，而HCV、HBV病毒等均沒有此特性，故可以很好地解釋各組CD4+T淋巴細胞計數(shù)無差異。

CD8+T淋巴細胞是細胞免疫的效應(yīng)細胞，分泌多種細胞因子，最終通過細胞毒性T淋巴細胞效應(yīng)殺死被感染的靶細胞，是機體抗HIV的最重要免疫細胞，其數(shù)量與功能同病毒量呈正相關(guān)。與HIV一樣，HBV、HCV均為胞內(nèi)感染寄生病毒，機體對其的清除主要依靠細胞免疫。HBV、HCV病毒等侵入人體內(nèi)，刺激T淋巴細胞增殖分化，使靜止T淋巴細胞轉(zhuǎn)化為效應(yīng)T淋巴細胞，釋放多種細胞因子，通過細胞毒效應(yīng)產(chǎn)生殺傷作用，清除被感染細胞。正常機體內(nèi)各淋巴細胞亞群數(shù)量與比例保持一定平衡，是維持人體正常免疫防疫功能的條件。HIV感染后，患者外周血CD3+、CD4+T淋巴細胞數(shù)量均顯著降低，CD4+/CD8+倒置明顯，且隨著HIV感染加重，CD4+數(shù)量顯著降低，CD4+/CD8+比值倒置更加顯著，CD8+及CD3+T淋巴細胞數(shù)量降低。本研究表明，在HIV感染患者不同的共感染模式中，CD8+T淋巴細胞計數(shù)存在差異，在HIV/HBV/HCV三重共感染者中尤為明顯，可推測是否由于HBV、HCV的存在，增強了機體的免疫應(yīng)答，從而導(dǎo)致三重感染者比單純感染者的CD8+T淋巴細胞計數(shù)更高。HIV/HBV/HCV共感染者體內(nèi)，HBV、HCV是否會對HIV自然史產(chǎn)生影響，是否加速了HIV向艾滋病及其相關(guān)疾病的發(fā)生，目前尚存在很大爭議[8]。K?rner等[9]研究認為HIV/HCV混合感染可能增加免疫激活，導(dǎo)致未經(jīng)治療的HIV感染者體內(nèi)CD4+T淋巴細胞凋亡，使其更快速地進展為嚴重的免疫缺陷。同時有文獻報道，病毒共感染對HIV感染者的免疫力影響，除了表現(xiàn)為CD4+、CD8+T淋巴細胞計數(shù)和功能異常外，還表現(xiàn)為對自然殺傷細胞數(shù)量和功能的影響，HCV/HIV病毒的共感染加劇了NK細胞的損害，從而影響HIV感染的進程和預(yù)后[10-13]。

由于研究對象來源局限，樣本量尚未足夠大，如HIV/ HBV/HCV三重感染組僅有9例符合納入研究，這些因素均會影響研究結(jié)果，為了使研究結(jié)果更可靠，后續(xù)研究應(yīng)加大樣本量的篩選，進一步研究HIV與HCV、HBV的相互作用機制，為將來更好地控制HIV/HBV/ HCV感染提供更加充分的理論依據(jù)。

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Comparative analysis of CD4+,CD8+T lymphocyte count in co-infected patient with HIV/HBV/HCV

CHEN Shang-liang1LI Jia-qi2LI Jie-ming1YU Wen-chao1LU Shao-fen1LUO Huai-xue1XIAO Su-liu2
1.Blood Center of Zhaoqing City in Guangdong Province,Zhaoqing 526020,China;2.Yangchun Prison Hospital in Guangdong Province,Yangchun 529600,China

ObjectiveTo study the change of of CD4+,CD8+T lymphocyte count in co-infected patient with HIV/HBV/ HCV and to investigate the influence of co-infection on HIV infection process and the immune function of patient.Methods75 peripheral blood samples with HIV co-infection were selected,CD4+,CD8+T lymphocyte count was tested and analysed.ResultsCD4+T lymphocyte count in four groups was compared,with no statistical difference(P＞0.05).CD8+T lymphocyte count and CD4+/CD8+ratio in four groups was compared respectively,with statistical difference(P＜0.05).ConclusionPeripheral blood CD8+T lymphocyte count and CD4+/CD8+ratio are changed in co-infected patient,CD8+T lymphocyte count of HIV/HBV/HCV co-infected group is highter than other three groups.

HIV;HBV;HCV;Co-infection;CD4;CD8

R512.91

A

1674-4721（2014）03（c）-0103-03

2014-02-20本文編輯：李亞聰）

廣東省肇慶市科技計劃項目（2013E2815）

陳尚良（1981-），男，碩士，主管技師，主要從事臨床輸血檢驗工作和輸血安全研究