尹璐等

摘要

[目的]研究地榆、蒼術(shù)、紫花地丁、半枝蓮、大黃、枸骨、千里光等7種中草藥的抑菌、殺菌活性。[方法]選用上述7種中草藥用95%的酒精提取其活性成分，對(duì)大腸桿菌、枯草桿菌、金黃色葡萄球菌和酵母菌等4種菌進(jìn)行抑菌、殺菌試驗(yàn)測(cè)定。[結(jié)果]7種中草藥具有廣譜的抗菌作用， 大黃對(duì)4種菌的抑菌率均在82.3%以上、殺菌率在82.0%以上，是7種中草藥中抗菌效果最好的。[結(jié)論]7種中草藥對(duì)4種菌均有明顯的抑制和殺菌作用。

關(guān)鍵詞中草藥提取物；植物活性物質(zhì)；抑菌作用；殺菌作用

中圖分類號(hào)S567文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）28-09722-03

Study on Action of Bacteriostasis and Disinfection of Alcohol Extracts from 7 Kinds of Chinese Medicinal Herbs

YIN Lu， HU Renhuo*， QIU Riguang et al

（School of Nuclear Technology and Chemistry & Life Science， Hubei University of Science and Technology， Xianning， Hubei 437100）

Abstract[Objective] To study the antibacterial and sterilization activity of seven kinds of Chinese herbal medicine which are Radix sanguisorbae， Atractylodes rhizome， Violae herba， Portulaca grandiflora hook， Rheum palmatum， Ilex cornuta and Senecio scandens etc. [Method] The active ingredients of the above 7 kinds of Chinese herbal medicine are extracted with 95% alcohol， and then to study the antibacterial and sterilization effect on the four kinds of bacteria： Escherichia coli， Bacillus subtilis， Staphylococcus aureus and Saccharomyces cerevisiae. [Result] 7 kinds of Chinese herbal medicine has a broad spectrum of antibacterial activity， Rheum palmatum which antibacterial rate against four bacteria is above 82.3% and sterilization rate more than 82.0% has the best antimicrobial effect among the 7 kinds of Chinese herbal medicines. [Conclusion] 7 kinds of Chinese herbal medicine has obvious bactericidal effect on 4 kinds of bacteria.

Key wordsHerbal extraction； Plant active ingredient； Antibacterial effect； Sterilization effect

我國(guó)的中草藥資源非常豐富，我國(guó)勞動(dòng)人民應(yīng)用中藥已有數(shù)千年的歷史，許多中草藥具有抗菌消炎的作用。該課題組在前期研究的基礎(chǔ)上，篩選出地榆、蒼術(shù)、紫花地丁、半枝蓮、大黃、枸骨、千里光等7種常見中草藥，用95%酒精提取其活性成分，選取大腸桿菌、枯草桿菌菌、金黃色葡萄球菌、酵母菌等常見污染菌作為靶標(biāo)菌，通過抑菌、殺菌試驗(yàn)，檢測(cè)中草藥對(duì)靶標(biāo)菌的作用效果，為開發(fā)綠色殺菌劑提供參考。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1

供試中草藥。 地榆（Radix sanguisorbae）、蒼術(shù)（Atractylodes rhizome）、紫花地丁（Violae herba）半枝蓮（Portulaca grandiflora hook）、大黃（Rheum palmatum）、枸骨（Ilex cornuta）、千里光（Senecio scandens），以上7種中草藥均購(gòu)買于咸寧市溫泉中藥店，烘干備用。

1.1.2

供試菌種?？莶輻U菌（Bacillus subtilis）、金黃色葡萄球菌 （Staphyloccocus aureus）、大腸桿菌（Escherichia coli）、酵母菌（Saccharomyces cerevisiae），上述菌種均由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)發(fā)酵工程室提供。

1.2試驗(yàn)儀器和試劑

1.2.1

試驗(yàn)儀器。DH5000AB型電熱恒溫培養(yǎng)箱、SW—CJ—1D型單人超凈工作臺(tái)、YX280A手提式不銹鋼消毒器、J—2菌落計(jì)數(shù)器、DH-101電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、84—Ⅱ型加熱磁力攪拌器、BCD—216榮事達(dá)冰箱。

1.2.2

試驗(yàn)試劑。1 mol/L NaOH溶液、1 mol/L HCl溶液、75%酒精、95%酒精、牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1

菌懸液的配制。將大腸桿菌、枯草桿菌、金黃色葡萄球菌接種在牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基上，37 ℃培養(yǎng)24 h；酵母菌接種在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，28 ℃培養(yǎng)48 h。

將培養(yǎng)好的菌種，分別用接種環(huán)挑取少許菌體于裝有無菌水的試管內(nèi)，震蕩均勻，制成菌懸液。用平板菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定其菌液濃度，并用稀釋法，使菌液含量數(shù)為104 cfu/ml，即為供試菌液。

1.3.2

中草藥提取液的配制。

將中草藥烘干、粉碎，分別用95%酒精[1]常溫下萃取4 d[2]，將提取液離心后，減壓蒸餾溫度約為50～52 ℃，將中草藥提取液中的酒精蒸發(fā)。然后用蒸餾水定容到質(zhì)量濃度為1 g/ml，置于0～4 ℃冰箱中備用。

1.3.3

體外抑菌試驗(yàn)測(cè)定[3]。將固體培養(yǎng)基加熱熔化，每20 ml固體培養(yǎng)基加入已裝有預(yù)定量中草藥提取液（0.5、2.0 ml）的無菌培養(yǎng)皿（直徑為15 mm）中，再加入0.2 ml菌液（稀釋后菌液濃度約為103個(gè)/ml），用涂布器涂布均勻，每一處理重復(fù)3次，用無菌水作對(duì)照。上述操作均在超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。將細(xì)菌培養(yǎng)皿倒置，置36～37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h，將酵母菌培養(yǎng)皿置恒溫箱中28 ℃恒溫培養(yǎng)48 h后統(tǒng)計(jì)菌落個(gè)數(shù)，計(jì)算抑菌率[4]。抑菌率=（對(duì)照菌落數(shù)-處理菌落數(shù)）/對(duì)照菌落數(shù)×100%。

1.3.4

體外殺菌試驗(yàn)測(cè)定。試驗(yàn)時(shí)，菌懸液的濃度約為104 cfu/ml。取0.5 ml菌懸液和4.5 ml提取液于無菌小試管中混合均勻（對(duì)照組為無菌水），作用至預(yù)定時(shí)間（5、15 min）后，取0.2 ml菌藥混合液接種到裝好培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，用涂布器涂布均勻，每次操作重復(fù)3次。將做好的細(xì)菌平板倒置放入36～37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，將酵母菌培養(yǎng)皿置恒溫箱中28 ℃恒溫培養(yǎng)48 h后統(tǒng)計(jì)菌落個(gè)數(shù)，統(tǒng)計(jì)菌落個(gè)數(shù)，計(jì)算殺菌率[5]。

殺菌率 =（對(duì)照菌落數(shù)-處理菌落數(shù)）/對(duì)照菌落數(shù)×100%。

2結(jié)果與分析

2.17種中草藥酒精提取液的抑菌試驗(yàn)

由表1可見，7種中草藥的酒精提取液對(duì)4種菌有明顯的抑制效果。隨著藥物劑量的增大，對(duì)4種菌的抑制效果顯著增強(qiáng)。在藥物為2.0 ml時(shí)，中草藥對(duì)枯草桿菌的抑菌作用大小依次為大黃>枸骨>千里光>蒼術(shù)>紫花地丁>半枝蓮>地榆，大黃抑菌率為99.4%，效果最好；中草藥對(duì)酵母菌的抑菌率均在72.9%以上，其中千里光抑菌能力最強(qiáng)，抑菌率為91.5%；中草藥對(duì)大腸桿菌的抑菌作用大小依次為地榆>蒼術(shù)>大黃>半枝蓮>紫花地丁>千里光>枸骨，地榆抑菌率最高，為97.2%；中草藥對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌作用大小依次為大黃>地榆>枸骨>千里光>蒼術(shù)>半枝蓮>紫花地丁，大黃抑菌率為88.3%，效果最好。綜合抑菌率看，7種中草藥提取液對(duì)酵母菌抑菌率均較高。

抑菌試驗(yàn)表明，同一中草藥對(duì)不同細(xì)菌的抑制作用亦存在著顯著差異，不同中草藥對(duì)同一種菌抑菌效果也不同。

2.27種中草藥酒精提取液的殺菌試驗(yàn)

從表2可看出，7種中草藥95%酒精提取液對(duì)4種菌均有明顯的殺菌效果。在中草藥質(zhì)量濃度為1 g/ml時(shí)，隨著殺菌時(shí)間的延長(zhǎng)，殺菌率有顯著的提高。靶標(biāo)菌與藥物作用15 min后，中草藥對(duì)枯草桿菌的殺菌作用大小依次為大黃>枸骨>千里光>紫花地丁>蒼術(shù)>半枝蓮>地榆，大黃殺菌率為92.2%，效果最好；中草藥對(duì)酵母菌的殺菌率均在57.9%以上，千里光殺菌率最高，為90.7%；中草藥對(duì)大腸桿菌的殺菌顯著，殺菌率均在60.1%以上，大黃殺菌率最高，為94.3%；中草藥對(duì)金黃色葡萄球菌的殺菌最為顯著，殺菌率均在70.0%以上，大黃、地榆殺菌率為100%，效果最好。殺菌試驗(yàn)表明，不同中草藥對(duì)

同一種細(xì)菌的殺菌作用有顯著差異，同一中草藥對(duì)不同菌的殺菌作用亦存在著較大差異。

3結(jié)論與討論

3.1討論

3.1.1

7種中草藥的抑菌試驗(yàn)。7種中草藥提取液抑菌率的高低與藥劑量有關(guān)，中草藥劑量越大抑菌率越高；藥物的抑菌效應(yīng)呈現(xiàn)劑量效應(yīng)；同一中草藥對(duì)不同菌的抑菌效果也存在著較大的差異，可能是藥物的成分對(duì)不同菌作用機(jī)理不同所致。不同中草藥種在相同的濃度下對(duì)同一細(xì)菌的殺菌效果有明顯差異，其原因主要是因?yàn)椴煌胁菟幩挠行С煞植煌?。目前?duì)于中藥抑菌機(jī)制的研究報(bào)導(dǎo)很少，已知的中藥抑菌途徑主要在三方面：①干擾微生物的酶系，破壞其正常的新陳代謝，抑制酶的活性；②使微生物的蛋白質(zhì)疑固和變性，干擾其生存和繁殖；③改變細(xì)胞膜的滲透性，使其體內(nèi)的酶類和代謝產(chǎn)物逸出導(dǎo)致其失活[6]。

3.1.2

7種中草藥的殺菌試驗(yàn)。同種中草藥在不同作用時(shí)間下對(duì)同種細(xì)菌的殺菌作用效果不同，這是因?yàn)樽饔脮r(shí)間越長(zhǎng)，藥物中的有效成分對(duì)細(xì)菌的作用越充分，對(duì)菌的殺滅效果越好。不同中草藥種在相同的濃度、相同時(shí)間下對(duì)同一細(xì)菌的殺菌效果有明顯差異，其原因主要是因?yàn)椴煌胁菟幩挠行С煞植煌隆?/p>

同一中草藥對(duì)不同菌的殺菌效果也存在著較大的差異?？赡苁撬幬锏某煞謱?duì)不同菌作用機(jī)理不同所致。抑菌能力強(qiáng)的中草藥，其殺菌能力也強(qiáng)。

中草藥提取液殺菌的作用機(jī)理方面的研究還處在探索階段[7]。中草藥所含的活性成分受生長(zhǎng)地域、不同季節(jié)、植物不同部位、不同提取方法的影響，需要進(jìn)一步研究不同產(chǎn)地的中草藥、采收季節(jié)、藥物部位、提取方法等因素對(duì)中草藥活性成分的影響；對(duì)殺菌效果好的中草藥活性成分進(jìn)行分離鑒定。

3.2結(jié)論

7種中草藥具有廣譜的抗菌作用， 大黃對(duì)4種菌的抑菌率均在87.3%以上、殺菌率在82.0%以上，是7種中草藥中抗菌效果最好的。

參考文獻(xiàn)

[1]

侯永清，張挺.不同提取工藝對(duì)中草藥抑菌效果的影響[J].飼料工業(yè)，2003，24（2）：9-10.

[2] 吳文君，瀏惠霞，朱靖博，等.天然產(chǎn)物殺蟲劑量一原理、方法、實(shí)踐[M].西安：陜西科學(xué)技術(shù)出版社，1997.

[3] SOMCHIT M N，REEZAL I，ELYSHA NUR I，et al.In vitro antimicrobial activity of ethanol and water extracts of Cassia alata[J].Journal of Ethnopharmacology，2003，84：1-4.

[4] 沈萍，陳向東.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)[M].4版.北京：高等教育出版社，2007：93-94.

[5] 沈萍，范秀容，李廣武.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)[M].3版.北京：高等教育出版社，1999：100-102.

[6] SHIOTA S，SHIMIZU M，SUGIYAMA J，et al.Mechanisms of action of corilagin and tellimagrandin I that remarkably potentiate the activityof beta-lactams against methicillinresistant Staphylococcus aureus[J].Microbiol Immunol，2004，48（1）：67-73.

[7] 楊玉萍，李艾蓮.植物源殺菌劑研究進(jìn)展[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào)，2006，8（1）：51-53.