湯艷

[摘要] 目的 探討Survivin、HPV16-E7蛋白、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）在宮頸鱗癌及宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變組織中的表達(dá)及在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法 采用免疫組化SP法檢測50例宮頸鱗癌、90例宮頸上皮內(nèi)瘤變（其中CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ各為30例）中Survivin、HPV16-E7蛋白及VEGF的表達(dá)，另取正常宮頸者20例為對照組。結(jié)果Survivin、HPV16-E7蛋白及VEGF在宮頸鱗癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變（CINⅡ、CINⅢ）中的表達(dá)均隨宮頸病變而呈遞增趨勢（P<0.05）；Survivin的高表達(dá)與分化程度、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05）；VEGF的高表達(dá)與分化程度、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05）；HPV16-E7蛋白的高表達(dá)與分化程度、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)（P>0.05）。Survivin與HPV16-E7蛋白和VEGF的表達(dá)間存在正相關(guān)（r=0.417， P<0.01；r=0.378， P<0.01）。結(jié)論Survivin、HPV16-E7蛋白及VEGF與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 宮頸鱗癌；宮頸上皮內(nèi)瘤變；Survivin；HPV16-E7；VEGF

[中圖分類號] R737.33 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2014）08-0101-03

宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)生率和病死率在女性惡性腫瘤中居第二位[1]。腫瘤的發(fā)生、演變、惡化是多基因、多因素、多階段的過程，其浸潤和轉(zhuǎn)移是患者死亡的主要原因。研究表明，宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展是由于致癌因子通過不同機(jī)制致使原癌基因激活、抑癌基因失活、細(xì)胞增殖及凋亡失調(diào)所致[2]。而高危型人乳頭瘤病毒（HPV）的感染在宮頸癌的發(fā)生中發(fā)揮著重要作用[3]。Survivin是一種凋亡抑制基因，該基因表達(dá)的Survivin蛋白是迄今為止發(fā)現(xiàn)的分子量最小也是抗凋亡作用最強(qiáng)的凋亡抑制蛋白（inhibition apoptosis protein，IAP）。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是目前發(fā)現(xiàn)的最重要的促血管生長因子，具有促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分化、增生、遷移和浸潤的作用。本研究應(yīng)用免疫組化SP法檢測Survivin、HPV16-E7蛋白、VEGF 在宮頸鱗癌（squamors cell carcinoma of cervical，SCC）及癌前病變組織中的表達(dá)，探討三者在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及相互關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

收集本院2002～2012年手術(shù)切除的140例患者石蠟包埋標(biāo)本，常規(guī)取材，所有標(biāo)本均經(jīng)病理證實(shí)，且確診前未接受任何治療?；颊吣挲g22～56歲，中位年齡41歲。CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ各30例。宮頸鱗癌50例：按 FIGO分期（2009年）：Ⅰb期20例、Ⅱa期30例）；按組織分化程度： 高分化22例， 中分化 12例， 低分化 16例；按有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性者19例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性者31例。另取同期因子宮肌瘤、子宮腺肌瘤行全子宮切除術(shù)并且術(shù)后病理證實(shí)為正常宮頸者20例作為對照組。

1.2 方法

采用SP法進(jìn)行免疫組化染色。濃縮型兔抗人Survivin多克隆抗體為Neomarker公司產(chǎn)品，鼠抗人HPV16 -E7單克隆抗體為美國 Santa Cruz公司產(chǎn)品，鼠抗人VEGF單克隆抗體、SP試劑盒等均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。所有標(biāo)本經(jīng)10 %多聚甲醛固定，梯度酒精脫水，常規(guī)石蠟包埋，制成4 μm厚的連續(xù)切片，根據(jù)試劑要求進(jìn)行抗原熱修復(fù)處理后，采用SP法進(jìn)行免疫組化染色，免疫標(biāo)記操作及程序見試劑說明書。取已知有該蛋白表達(dá)的切片為陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 結(jié)果判定

以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色著色為Survivin 和VEGF 陽性標(biāo)記。高倍鏡下選取 10 個/ HPE， 每個視野計數(shù) 100 個細(xì)胞， 以每例陽性細(xì)胞數(shù)26%～50%為+， 51%～75%為+ +，≥76%為+ + +。以細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核呈棕黃色著色為HPV16- E7陽性標(biāo)記，連續(xù)觀察 10個高倍視野，以陽性細(xì)胞數(shù) > 10%為陽性[4]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，Survivin、HPV16- E7蛋白和VEGF的表達(dá)與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系采用χ2檢驗(yàn)，Spearman相關(guān)分析Survivin與HPV16- E7蛋白及Survivin與VEGF的相關(guān)性。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Survivin、HPV16- E7蛋白和VEGF在宮頸組織中的表達(dá)

Survivin、HPV16-E7蛋白及VEGF在對照組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組、宮頸鱗癌中的表達(dá)均隨宮頸病變加重而呈遞增趨勢。Survivin在CINⅡ組與CINⅠ組、CINⅢ組與CINⅡ組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.320，P<0.05； χ2=4.444，P<0.05）、HPV16-E7蛋白CINⅡ組與CINⅠ組、CINⅢ組與CINⅡ組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=5.079，P<0.05； χ2=4.344，P<0.05）；VEGF在CINⅡ組與CINⅠ組、CINⅢ組與CINⅡ組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.812，P<0.05； χ2=4.286， P<0.05）；Survivin、HPV16-E7蛋白及VEGF在SCC組與CINⅢ組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.391，P<0.05； χ2=3.988，P<0.05； χ2=4.688，P<0.05），見表1。

2.2宮頸鱗癌中Survivin、HPV16- E7蛋白和VEGF的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系endprint

HPV16- E7蛋白表達(dá)與臨床分期、病理分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無關(guān)（P>0.05）。Survivin的表達(dá)在中低分化者中陽性率高于高分化者（χ2=6.158，P<0.05）；Ⅱa期的陽性表達(dá)率高于Ⅰb期（χ2=4.678，P<0.05）；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性的表達(dá)率高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性者（χ2=5.898，P<0.05）。VEGF的表達(dá)在中低分化者中陽性率高于高分化者（χ2=5.082，P<0.05）；Ⅱa期的陽性表達(dá)率高于Ⅰb期（χ2=6.527，P<0.05）；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性的表達(dá)率高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性者（χ2=6.727，P<0.01），見表2。

2.3 各組中Survivin的表達(dá)與HPV16-E7蛋白、VEGF表達(dá)的關(guān)系

本組資料中，在CINⅡ、CINⅢ及宮頸鱗癌組中Survivin與HPV16- E7蛋白的陽性表達(dá)間存在正相關(guān)（r=0.417，χ2=19.125，P<0.01）；Survivin與VEGF的陽性表達(dá)間存在正相關(guān)（r=0.378， χ2=15.707，P<0.01），見表3。

3 討論

在宮頸非典型增生向?qū)m頸癌演變過程中，病毒整合是一重要機(jī)制。病毒的整合導(dǎo)致了病毒基因表達(dá)失調(diào)、宿主基因不穩(wěn)定，甚至導(dǎo)致了細(xì)胞癌基因的激活，決定了細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為[5]。大量流行病學(xué)和生物學(xué)資料顯示，高危型HPV感染是誘發(fā)宮頸癌的重要原因。HPV的致病機(jī)制相當(dāng)復(fù)雜，目前認(rèn)為主要是由于HPV的E6和E7癌蛋白分別與其宿主細(xì)胞的p53和pRB蛋白結(jié)合，從而導(dǎo)致了p53和pRB蛋白降解和滅活，進(jìn)而使上皮細(xì)胞退出分化程序，持續(xù)增生而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生[6]。而HPV16與宮頸鱗癌關(guān)系最為密切[7]。本研究表明，在宮頸鱗癌中HPV陽性率明顯高于CIN和正常宮頸組，CINⅡ組及CINⅢ組亦高于對照組，其與宮頸癌臨床分期、病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)。表明HPV感染是宮頸癌發(fā)生發(fā)展的重要原因之一。因此，預(yù)防HPV感染對防止宮頸癌的發(fā)生具有重要意義。

Survivin 基因是近年來分離的凋亡抑制蛋白IPA基因家族的新成員。Survivin 的作用靶點(diǎn)位于凋亡途徑的下游匯集點(diǎn)，通過死亡受體途徑和線粒體途徑，最終作用于Caspase-3和Caspase-7起到抗凋亡作用[8]。Survivin基因只在胚胎中表達(dá)，在成人已分化組織中不表達(dá)或低表達(dá)，但在人體內(nèi)的幾乎所有惡性腫瘤中都有明顯表達(dá)[9]。本實(shí)驗(yàn)表明，Survivin在正常宮頸中低表達(dá)，在宮頸癌及其癌前病變中的表達(dá)隨病情進(jìn)展有逐漸增高趨勢。CINⅡ組、CINⅢ組、SCC組與對照組相比均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。而CINⅡ組與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），提示在宮頸癌病變過程中的早期已有凋亡調(diào)節(jié)的參與。此結(jié)果與張璇等[10]的研究結(jié)果一致。

腫瘤血管生成在腫瘤組織的生長、轉(zhuǎn)移中起著重要作用。VEGF是腫瘤血管生成過程中特異性最強(qiáng)的促血管生長因子，其在很多人類的腫瘤細(xì)胞中存在高水平的表達(dá)，且在一定程度上促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長[11]。其與多種腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)。本研究顯示，從正常宮頸到CIN，再到宮頸癌，VEGF表達(dá)水平呈進(jìn)行性升高，該結(jié)果與Dai[12]等結(jié)果相符。

本研究還發(fā)現(xiàn)，Survivin的表達(dá)和HPV16-E7蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0417，P<0.05）。這與王江莉等[13]的研究一致。由此推測，HPV16可能直接或間接調(diào)節(jié)了Survivin蛋白的表達(dá)及細(xì)胞分布，兩者對宮頸癌的發(fā)生可能起著協(xié)同作用。近年來研究證實(shí)內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)的VEGF能誘導(dǎo)和促進(jìn) Survivin 的高表達(dá)，而 Survivin 的表達(dá)上調(diào)又是內(nèi)皮細(xì)胞在血管生成過程中維持生存活力的必要條件[14，15]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果亦表明，宮頸癌及癌前組織中，Survivin的表達(dá)與VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.378，P<0.05）。Survivin表達(dá)上調(diào)進(jìn)而促進(jìn)了腫瘤血管生成和浸潤轉(zhuǎn)移，二者在促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著協(xié)同作用。

綜上所述，宮頸癌中Survivin、HPV16-E7蛋白、VEGF基因表達(dá)上調(diào)，其表達(dá)與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。對三者進(jìn)行檢測，或許成為對宮頸癌患者的預(yù)后判定的重要指標(biāo)[16]。

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