李 飛

(鶴壁市衛(wèi)生監(jiān)督局，河南 鶴壁458030)

培養(yǎng)基是生物實(shí)驗(yàn)中一種為微生物、植物及動(dòng)物組織提供生存及生長(zhǎng)的人工配制養(yǎng)料。養(yǎng)料中含有多種生物所需的水、維生素、碳水化合物、含氮物質(zhì)以及微量元素等。同時(shí)也有專用的培養(yǎng)基，其中含有特定抗生素及色素，是專門用于某些單種微生物培養(yǎng)及鑒定。然而隨著近年來生物科學(xué)技術(shù)的突飛猛進(jìn)，生物實(shí)驗(yàn)及微生物檢驗(yàn)中所需的培養(yǎng)基逐漸呈現(xiàn)出越來越廣泛的運(yùn)用趨勢(shì)，而隨之培養(yǎng)基生產(chǎn)廠商在市面上也不斷增多［1］。規(guī)?；a(chǎn)的培養(yǎng)基雖然為微生物檢驗(yàn)提供了極大的方便，但據(jù)市場(chǎng)調(diào)查及研究結(jié)果顯示，市場(chǎng)化生產(chǎn)的培養(yǎng)基存在有制作工藝、生產(chǎn)質(zhì)量等還未達(dá)到規(guī)范化指標(biāo)，整體水平有待提高。而培養(yǎng)基的質(zhì)量是微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果的保障，同時(shí)也是微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的重要環(huán)節(jié)之一。筆者就商品培養(yǎng)基和自制培養(yǎng)基從其采購(gòu)、制備、滅菌、儲(chǔ)存及性能測(cè)試和人員素質(zhì)等方面所應(yīng)采用的質(zhì)量控制方法作一簡(jiǎn)要的闡述。

1 培養(yǎng)基的采購(gòu)及驗(yàn)收

1.1 培養(yǎng)基的采購(gòu) 如今市面上的培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家很多，但其產(chǎn)品質(zhì)量均存在一定的差異。因此在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室微生物培養(yǎng)基的采購(gòu)方面，需要嚴(yán)格控制其采購(gòu)質(zhì)量。首先應(yīng)盡量選擇通過ISO9001 或其他國(guó)家認(rèn)可的質(zhì)量認(rèn)證體系的商家，其次實(shí)驗(yàn)室采購(gòu)者必須讓生產(chǎn)企業(yè)提供培養(yǎng)基名稱、獨(dú)立成分、添加成分、有效期、性能評(píng)價(jià)、所用的測(cè)試菌株、技術(shù)數(shù)據(jù)清單、質(zhì)控證書以及必要的安全危害數(shù)據(jù)等，以利于使用者對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行記錄和比較驗(yàn)收［2］。市場(chǎng)信譽(yù)度高并且質(zhì)量確實(shí)經(jīng)得住實(shí)踐考驗(yàn)的供貨商可以考慮并且長(zhǎng)期合作，以利于培養(yǎng)基的一致性和穩(wěn)定性。

1.2 培養(yǎng)基的驗(yàn)收 包含了對(duì)采購(gòu)?fù)瓿珊笈囵B(yǎng)基進(jìn)行的各項(xiàng)檢驗(yàn)工作，微生物實(shí)驗(yàn)室收到培養(yǎng)基后應(yīng)有專人負(fù)責(zé)做好培養(yǎng)基的接收與驗(yàn)收工作。并且負(fù)責(zé)制作培養(yǎng)基的入庫(kù)記錄，內(nèi)容應(yīng)詳細(xì)記錄生產(chǎn)商家、培養(yǎng)基的名稱、接收日期、批號(hào)、有效期、包裝及其完整性。即使是長(zhǎng)期合作的供應(yīng)商也應(yīng)該認(rèn)真完成以上手續(xù)，一旦發(fā)現(xiàn)采購(gòu)后的培養(yǎng)基任何一項(xiàng)有差異及問題，一律歸為驗(yàn)收不合格，并且不得使用。

2 培養(yǎng)基的制備

2.1 培養(yǎng)基的配制 配制培養(yǎng)基要按照嚴(yán)格、科學(xué)的流程進(jìn)行，依據(jù)處方進(jìn)行認(rèn)真操作，并且將操作流程記錄下來。應(yīng)考慮到培養(yǎng)基處方需要的生物制品種類繁多，而不同的廠家、批次、日期都會(huì)造成產(chǎn)品質(zhì)量存在差異，所以在配制過程中一定要注意原料成分之間的差異性，做好嚴(yán)格的質(zhì)量控制工作。同時(shí)記錄不同成分的具體情況，從而方便查詢和檢驗(yàn)。自制培養(yǎng)基過程中應(yīng)嚴(yán)格按照培養(yǎng)要求和順序放入成分，確保滅菌有效及成分均勻，最大程度避免出現(xiàn)成分間互斥以及分布不均的情況。

2.2 培養(yǎng)基的稱量 稱量培養(yǎng)基時(shí)避免使用手或其他非專用工具進(jìn)行操作，要使用專門稱量培養(yǎng)基的角匙，從而降低發(fā)生交叉污染的概率，保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。特別值得注意的是在稱量選擇性培養(yǎng)基時(shí)要觀察是否有粉末吸入現(xiàn)象，同時(shí)還要考慮到實(shí)驗(yàn)環(huán)境的濕度問題，濕度高的空間會(huì)讓培養(yǎng)基吸潮，導(dǎo)致pH 升高，性狀發(fā)生改變，在條件允許的情況下盡量選擇干燥度較高的房間進(jìn)行稱?。?］。而對(duì)干粉培養(yǎng)基的配置要符合生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)和要求。

2.3 培養(yǎng)基的溶解 溶解培養(yǎng)基是分裝滅菌前的重要步驟，要保證不同組分能夠均勻溶解和分布，通常采取水浴加熱溶解的方式。而對(duì)于含有瓊脂粉末的培養(yǎng)基可以先進(jìn)行浸泡處理然后再加熱溶解，這樣有助于加快溶解的過程。一旦將培養(yǎng)基放入電爐內(nèi)就應(yīng)用小火加熱煮沸，同時(shí)利用攪拌來防止爆沸和焦化，如果培養(yǎng)基燒糊就極有可能產(chǎn)生有毒物質(zhì)，對(duì)操作人員和環(huán)境造成威脅，因此一旦發(fā)現(xiàn)焦化或爆沸培養(yǎng)基就要安全處理掉。

3 培養(yǎng)基的滅菌和儲(chǔ)存

3.1 培養(yǎng)基的滅菌 通常針對(duì)培養(yǎng)基的滅菌一般采取高壓蒸汽滅菌法，在121.3 ℃持續(xù)15 min，如果廠家定制了特殊或含有糖分的培養(yǎng)基，則需要按照說明流程進(jìn)行專門滅菌。培養(yǎng)基配制完成后要就應(yīng)該馬上進(jìn)行滅菌，在滅菌過程中要特別注意操作的完整性、科學(xué)性，同時(shí)標(biāo)注好時(shí)間和名稱，避免出錯(cuò)。

3.2 培養(yǎng)基的儲(chǔ)存 商品化規(guī)格的培養(yǎng)基和干粉培養(yǎng)基要按照其說明書標(biāo)識(shí)的存放環(huán)境要求進(jìn)行存放。通常放于干燥陰涼避光處，有效期一般為2 a。一旦開封應(yīng)注意防潮，盡快用完。檢驗(yàn)人員還要對(duì)各類培養(yǎng)基做定期排查，并詳細(xì)登記，避免其超過有效期。發(fā)現(xiàn)有硬化結(jié)塊，過期變色現(xiàn)象應(yīng)及時(shí)廢棄。

4 培養(yǎng)基的性能測(cè)試

當(dāng)經(jīng)過上述步驟制備好的培養(yǎng)基會(huì)顯現(xiàn)出不同的顏色及質(zhì)感。因此對(duì)培養(yǎng)基的性能測(cè)定可以根據(jù)其顏色、形態(tài)、質(zhì)感及檢驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)來做初步判定，完整的培養(yǎng)基應(yīng)該是顏色清晰，質(zhì)感明顯，沒有脫水、渾濁及沉淀等現(xiàn)象。基礎(chǔ)培養(yǎng)基不僅要求細(xì)菌能夠生長(zhǎng)，還必須發(fā)育良好并能使細(xì)菌充分表現(xiàn)出其典型的特征，如典型菌落形態(tài)、溶血特征等。選擇性培養(yǎng)基應(yīng)分別選擇1 株可生長(zhǎng)、1 株可抑制的菌株進(jìn)行接種培養(yǎng)，鑒別培養(yǎng)基應(yīng)選擇已知陽(yáng)性和陰性菌接種分別培養(yǎng)，以證實(shí)應(yīng)有的生化反應(yīng)能力。

5 提高檢驗(yàn)人員的水平素質(zhì)

通過以上環(huán)節(jié)可以有效地提高培養(yǎng)基的質(zhì)量，但人為因素也是影響實(shí)驗(yàn)室微生物檢驗(yàn)的重要因素之一。微生物檢測(cè)是一項(xiàng)要求高、分化細(xì)的工作，只有綜合素質(zhì)強(qiáng)、專業(yè)技術(shù)硬的技術(shù)人員才能勝任和做好。為了有效地做好微生物檢驗(yàn)中培養(yǎng)基的質(zhì)量控制，要嚴(yán)格篩選操作人員，要求其擁有扎實(shí)的微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)和能力，能良好地判斷和處理各種檢驗(yàn)情況，對(duì)工作有責(zé)任心。為了不斷提高檢驗(yàn)人員的素質(zhì)和能力，要定期或不定期組織檢驗(yàn)人員進(jìn)行專業(yè)培訓(xùn)和學(xué)習(xí)，在更新知識(shí)的過程中掌握新技能，跟隨檢驗(yàn)科學(xué)的發(fā)展而進(jìn)步。

綜上所述，培養(yǎng)基的質(zhì)量是微生物檢驗(yàn)過程中不可或缺的關(guān)鍵因素，事關(guān)檢測(cè)工作的科學(xué)性、準(zhǔn)確性和可靠性。在微生物監(jiān)測(cè)工作中地位舉足輕重，如果忽視任何一個(gè)環(huán)節(jié)，就會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)偏差?？梢酝ㄟ^嚴(yán)格產(chǎn)品的采購(gòu)、規(guī)范其操作以及提高檢驗(yàn)人員專業(yè)素質(zhì)等手段來進(jìn)一步加強(qiáng)培養(yǎng)基的質(zhì)量控制，從而有效地提高微生物檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性和科學(xué)性。總之，只有真正把微生物培養(yǎng)基的質(zhì)量控制重視起來，才能有利于提高微生物實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作的成效。

［1］顧文輝. 微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制［J］. 職業(yè)與健康，2010，26(16):1 906 -1 908.

［2］周小明.微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制和質(zhì)量保證［J］.職業(yè)與健康，2009，25(15):1 667 -1 668.

［3］賈月波.論食品微生物檢驗(yàn)中培養(yǎng)基的質(zhì)量控制措施［J］.中國(guó)保健營(yíng)養(yǎng)，2013，(4):18 -19.