姜洪波，馮素萍,黃艷芬,杜愛林△,尉 娜

(1. 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院； 2.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院 生理學(xué)與神經(jīng)生物學(xué)教研室，河南 新鄉(xiāng) 453003)

急性失血性休克實驗是機能學(xué)實驗中一個重要的實驗。失血性休克是由于血容量急劇減少(一般大于總血量的20%),使組織器官血液灌流不足,從而產(chǎn)生機能、代謝嚴(yán)重障礙的一種全身性病理過程。本實驗通過觀察休克發(fā)生、發(fā)展的過程中血壓和微循環(huán)等的變化，加深對“休克發(fā)病的關(guān)鍵不在于血壓，而在于血流”的理論知識的認(rèn)識。家兔急性失血性休克模型中能夠觀察到微循環(huán)的流動為整個實驗的關(guān)鍵，只有觀察到微循環(huán),才能進一步放血完成急性失血性休克實驗?zāi)Ｐ偷闹苽鋄1]。然而在教學(xué)實踐中，尤其在冬季，很多家兔由于溫度低等多種因素影響，在急性失血性休克實驗?zāi)Ｐ偷闹苽淝熬鸵呀?jīng)觀察不到微循環(huán)的血液流動，致使無法觀察急性失血對微循環(huán)的血液流動的影響，影響了教學(xué)效果，可能與家兔體溫下降有關(guān)。本實驗主要觀察溫?zé)嵋后w對觀察家兔微循環(huán)模型成功率的影響。

1 材料與方法

1.1 動物 健康家兔36只，體重2.0～3.0 kg，新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。隨機分為2組，常溫組18只, 靜脈輸注液體溫度(20.83±2.55)℃；溫?zé)峤M(n=18)，靜脈輸注液體溫度(40.89±1.18 )℃。

1.2 器械和藥品電腦，BL-420F生物信號采集處理系統(tǒng)，哺乳類實驗器械1套，兔手術(shù)臺1個，灌流盒1個，動脈夾1個，氣管插管1個，注射器50 mL、20 mL、5 mL各1個、1 mL 3個，壓力換能器、刺激電極、動脈插管、三通、棉線、紗布、小燒杯各1個，生理鹽水、20%氨基甲酸乙酯、0.1%肝素、 0.01%腎上腺素、0.01%去甲腎上腺素、0.01%異丙腎上腺素、2% 654-2等藥品配好備用。

1.3 步驟和項目

1.3.1 抓取、稱重、麻醉、固定 抓取家兔頸背部皮膚，用另一只手托住家兔臀部，稱重后記錄家兔重量，用20%氨基甲酸乙酯按每公斤體重1 g的劑量從耳緣靜脈先快速注入三分之一的劑量，后以每分鐘1 mL的速度緩慢注入，家兔麻醉的標(biāo)志為夾家兔后趾疼痛反射消失。麻醉后用繩子將動物背位固定于手術(shù)臺上，以備手術(shù)。

1.3.2 頸部手術(shù) 用粗剪刀剪除頸部正中手術(shù)野的兔毛，沿頸部正中線切開皮膚5～7 cm，用止血鉗鈍性分離皮下組織及肌肉，暴露出氣管并游離氣管2～4 cm，在氣管下穿線備用。用兩把止血鉗分別夾住氣管兩側(cè)的皮膚和肌肉的邊緣，并將其拉向兩側(cè)，即可見到氣管兩側(cè)與氣管平行的左、右頸總動脈及與其相伴而行的一束神經(jīng)，這束神經(jīng)中包括緩沖神經(jīng)(三根神經(jīng)中最細，以往稱為減壓神經(jīng))、交感神經(jīng)和迷走神經(jīng)(三根神經(jīng)中最粗)。①氣管插管：用組織剪在家兔甲狀軟骨下方3—4軟骨環(huán)之間做一橫向切口，其長度約為氣管周徑1/2，再向家兔頭端方向做一縱向切口，長度約1 cm，使總切口呈倒“T”型。把氣管插管斜面向下朝向肺臟方向插入，旋轉(zhuǎn)180度，用備用棉線結(jié)扎固定，并在氣管插管分叉處二次結(jié)扎固定。②分離左側(cè)緩沖神經(jīng)、交感神經(jīng)、迷走神經(jīng)，神經(jīng)注意保持濕潤，從而保證興奮性。分離左側(cè)頸總動脈，分離右側(cè)頸外靜脈穿線備用，注意先分離神經(jīng)后分離血管，以免血管出血影響神經(jīng)分離。分離神經(jīng)先細后粗。③右頸外靜脈插管：先用動脈夾夾閉靜脈近心端，等待靜脈充分充盈后結(jié)扎靜脈遠心端，用眼科剪朝向心臟方向與靜脈成20～45度角剪開靜脈，切口大小約為靜脈周徑1/3—1/2，靜脈插管和輸液管相連，排完空氣后斜面向下朝向心臟方向插入靜脈(二次結(jié)扎固定，以防插管滑脫)，撤掉動脈夾，調(diào)整輸液速度，以15～20滴/min為宜，常溫組(n=18)，靜脈輸注液體溫度(20.83±2.55)℃；溫?zé)峤M(n=18)，靜脈輸注液體溫度(40.89±1.18)℃。④全身肝素化：從耳緣靜脈(或右側(cè)頸外靜脈)注射125 U/mL的肝素，首次劑量為1 mL/kg，以后每隔1 h注射1 mL肝素維持血液抗凝狀態(tài)。⑤左頸總動脈插管：先將帶有三通接頭并與壓力換能器相連的動脈插管充滿125 U/mL肝素溶液，結(jié)扎動脈遠心端，待動脈充分充盈后用動脈夾夾閉近心端，用眼科剪朝向心臟方向與動脈成20～45度角剪開動脈，切口大小約為動脈周徑1/3—1/2，向心臟方向插入、二次結(jié)扎固定，輕輕松開動脈夾，觀察動脈插管無出血后再撤掉動脈夾。

1.3.3 實驗裝置的連接 先打開BL-420F生物信號采集處理系統(tǒng)，把壓力換能器的輸入線插入BL-420F生物信號采集處理系統(tǒng)上的信號輸入孔，刺激電極插入刺激輸出孔，打開電腦進入BL-420F生物信號采集處理系統(tǒng)，調(diào)整三通的位置，使血壓波動傳遞到壓力換能器，選擇相應(yīng)通道，實驗觀察。

1.3.4 動脈血壓的調(diào)節(jié) ①正常血壓[2]。②向心臟方向快速牽拉一側(cè)頸總動脈插管，觀察血壓的波動。一般表現(xiàn)為頸動脈竇壓力感受器向中樞傳入沖動增加,中樞使迷走神經(jīng)緊張增加,交感神經(jīng)緊張降低,導(dǎo)致心率減慢,心輸出量減少,外周血管阻力降低,動脈血壓下降。③向心臟方向持續(xù)牽拉一側(cè)頸總動脈插管，觀察血壓的波動。一般表現(xiàn)為動脈血壓下降但沒有快速牽拉一側(cè)頸總動脈插管幅度大，并且緩慢回升，提示壓力感受器對刺激的快速變化敏感。④夾閉另一側(cè)頸總動脈3～5 s，觀察血壓的波動。夾閉另一側(cè)頸總動脈,頸動脈竇神經(jīng)向中樞傳入沖動減少, 中樞使迷走緊張降低,交感緊張加強,表現(xiàn)為外周阻力增加,心率加快,心輸出量增加,從而導(dǎo)致動脈血壓上升。⑤將緩沖神經(jīng)雙重結(jié)扎并從中間剪斷，分別刺激緩沖神經(jīng)中樞端和外周端，觀察血壓的波動。緩沖神經(jīng)為傳入神經(jīng)，刺激緩沖神經(jīng)的外周端對血壓和心率沒有明顯影響；適宜的刺激刺激緩沖神經(jīng)的中樞端會引起血壓降低。

1.3.5 觀察微循環(huán) 在家兔左側(cè)腹部做一5～7 cm的切口，打開腹腔，找到回腸袢，把它拉出體外，把腸系膜平鋪到恒溫微循環(huán)灌流盒里(盒內(nèi)盛有38 ℃臺氏液，液面高度約為盒內(nèi)小平臺高度的1/2)小平臺上，腸系膜上覆蓋保鮮膜，防止污染顯微鏡。注意小平臺、腸系膜、保鮮膜之間不要有空氣，空氣會影響觀察效果。用顯微鏡觀察腸系膜微循環(huán)的流動，能夠觀察到腸系膜微循環(huán)的流動為實驗成功。

1.3.6 制備家兔急性失血性休克模型 ①少量放血:從左頸總動脈三通處連接50 mL注射器(內(nèi)裝1 mL肝素)放血量約為總血量(總血量按70 mL～80 mL/kg計算)的10%，同時密切觀察微循環(huán)的血流速度變化。②大量放血:再次打開三通開始放血，放血量約為總血量的10%～20%，邊放血邊觀察微循環(huán)的血流速度的變化，直至血流速度明顯變慢為粒流、粒擺流或停止，可認(rèn)為出現(xiàn)休克。

1.3.7 實驗性搶救 將50 mL注射器內(nèi)放出的家兔血液通過靜脈回輸，加快輸液速度為50～60滴/min，并根據(jù)休克發(fā)生發(fā)展的病理變化和提供的藥品，設(shè)計搶救方案。

1.3.8 處死動物 空氣栓塞法。

2 結(jié)果

常溫組家兔微循環(huán)模型成功率72.22%(13/18),而溫?zé)峤M微循環(huán)模型成功率88.89%(16/18)，二者相比P<0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 討論

本實驗的核心內(nèi)容是觀察急性失血性休克發(fā)生、發(fā)展的過程中血壓和微循環(huán)等的變化，尤其是微循環(huán)的變化，加深對“休克發(fā)病的關(guān)鍵不在于血壓，而在于血流”的理論知識的認(rèn)識。如果在制備急性失血性休克模型的放血前，由于溫度低、失血等原因，家兔就已經(jīng)休克，無法觀察到家兔微循環(huán)的血液流動，更無法觀察失血對家兔微循環(huán)的影響，會嚴(yán)重影響本實驗的教學(xué)效果。因此觀察到家兔微循環(huán)的血液流動是本實驗成功的關(guān)鍵所在，也是本實驗成功的標(biāo)志。本實驗溫?zé)峤M家兔失血性休克模型成功率88.89%(16/18)，明顯高于常溫組成功率72.22%(13/18)?？赡芘c常溫液體輸入相比，溫?zé)嵋后w輸入后,可使家兔體溫相對穩(wěn)定有關(guān)，不至于在麻醉狀態(tài)下體溫下降過快。體溫相對穩(wěn)定有利于血管舒張,增加血管床面積,降低外周阻力,使有效循環(huán)血量增加,組織灌流改善,有益于增加心輸出量,改善心功能。

[1] 常全忠.機能實驗學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2007:126-131.

[2] 李東亮，王合軒.生理學(xué)實驗方法[M].2版. 北京：軍事誼文出版社，1999:73-76.

[3] 王建榮，張黎明，劉玉春，等.溶液溫度對失血性休克兔循環(huán)功能的影響[J]. 中華護理雜志,2004, 39(12): 896-898.