蘇晨霞，李健和，易利丹，彭六保

(1.湖南省新化縣孟公鎮(zhèn)中心衛(wèi)生院，湖南新化 417605；2.中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院藥學(xué)部，湖南長(zhǎng)沙 410011)

奧沙利鉑(oxaliplatin)為第三代鉑絡(luò)合物類抗腫瘤藥物，適用于經(jīng)過氟尿嘧啶治療失效之后結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的病人，可單獨(dú)或聯(lián)合氟尿嘧啶使用[1]。為避免醫(yī)護(hù)人員在對(duì)注射用奧沙利鉑或奧沙利鉑注射液配制過程中交叉污染和發(fā)生差錯(cuò)事故(注射用奧沙利鉑或奧沙利鉑注射液臨用時(shí)須重新配制，可能錯(cuò)選溶劑，如選用常用的0.9%氯化鈉注射液，而奧沙利鉑與各種濃度的氯化鈉有配伍禁忌)，作者在參考相關(guān)專利[2，3]的基礎(chǔ)上研制開發(fā)了奧沙利鉑靜脈輸液，并獲得了新藥證書，技術(shù)轉(zhuǎn)讓藥廠?，F(xiàn)將在研制、開發(fā)過程中進(jìn)行的過敏性、溶血性、血管刺激性和熱原實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道如下, 以期為安全用藥提供依據(jù)。

1 藥物、儀器和動(dòng)物

1.1 藥物和儀器 奧沙利鉑靜脈輸液(規(guī)格 100 ml∶100 mg奧沙利鉑和5.1 g甘露醇，批號(hào) 20111220，中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院藥學(xué)部研制提供)。0.9%氯化鈉注射液(批號(hào) 20111022，湖南中南科倫藥業(yè)有限公司)。L-600臺(tái)式低速自動(dòng)平衡離心機(jī)(湘儀離心機(jī)儀器有限公司)； HH-420型三用恒溫水箱(上海喬躍電子有限公司)。

1.2 動(dòng)物 豚鼠, 雌雄兼用, 體重(294.7±21.9) g；新西蘭兔, 雌雄兼用,體重1.8～2.5 kg。上述實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均購(gòu)自長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào): SCXK(湘)2009-0012。

2 方法和結(jié)果

根據(jù)化學(xué)藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則(2005年)附錄方法進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。

2.1 過敏性實(shí)驗(yàn) 采用自動(dòng)全身性過敏反應(yīng)(active systemic anaphylaxis，ASA)，豚鼠18只，根據(jù)體重按隨機(jī)數(shù)字表法分為3組，每組6只，分別腹腔注射奧沙利鉑靜脈輸液、1%雞蛋清或0.9%氯化鈉注射液各0.5 ml，隔日注射一次，共3次，使豚鼠致敏。于首次注射后14 d及21 d，每組各取3只動(dòng)物，分別從后肢靜脈注射奧沙利鉑靜脈輸液、1%雞蛋清或0.9%氯化鈉注射液各1.0 ml激發(fā)，觀察注射后30 min 內(nèi)豚鼠有無用爪搔鼻、噴嚏、咳嗽、豎毛、干嘔、抽搐、呼吸困難、休克和死亡等過敏反應(yīng)癥狀。并按照指導(dǎo)原則全身致敏性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)分為過敏反應(yīng)陰性、弱陽性、陽性、強(qiáng)陽性和極強(qiáng)陽性。結(jié)果顯示，腹腔注射1%雞蛋清的豚鼠，在首次注射后第14天(d 14)和d 21，靜脈注射1%雞蛋清后2 min內(nèi)，全部出現(xiàn)豎毛、呼吸困難、痙攣、抽搐、休克等反應(yīng), 并在注射后10 min 內(nèi)全部死亡，為過敏反應(yīng)極強(qiáng)陽性。腹腔注射0.9%氯化鈉注射液或奧沙利鉑靜脈輸液的所有豚鼠，在靜脈注射0.9%氯化鈉注射液或奧沙利鉑靜脈輸液后30 min內(nèi)均未見明顯異常表現(xiàn), 為過敏反應(yīng)陰性。該實(shí)驗(yàn)表明，奧沙利鉑靜脈輸液的過敏反應(yīng)呈陰性。

2.2 溶血性實(shí)驗(yàn) 用常規(guī)的體外試管法(肉眼觀察法)進(jìn)行溶血性實(shí)驗(yàn)。家兔心臟穿刺采血15 ml，用竹簽攪拌以除去纖維蛋白，然后轉(zhuǎn)入刻度離心管內(nèi)，再用0.9%氯化鈉注射液洗滌5次，每次加0.9%氯化鈉注射液10 ml，混勻后560×g離心15 min，棄去上清液，直到上清液不顯紅色為止。然后按所得紅細(xì)胞的容積，用0.9%氯化鈉注射液配制2%的紅細(xì)胞混懸液，供實(shí)驗(yàn)用。

取7個(gè)試管并編號(hào)，加入2%的紅細(xì)胞混懸液2.5 ml， 然后于第1～5管中依次加入奧沙利鉑靜脈輸液0.5、0.4、0.3、0.2、0.1 ml和0.9%氯化鈉注射液2.0、2.1、2.2、2.3、2.4 ml, 第6管加0.9%氯化鈉注射液2.5 ml作陰性對(duì)照, 第7 管加2.5 ml無菌水作為陽性對(duì)照。將各管輕輕混勻, 置37 ℃恒溫水浴箱中觀察4 h。1 h內(nèi)每隔15 min觀察一次，1 h后每隔1 h觀察一次，共7次，觀察各管有無溶血及凝聚現(xiàn)象。結(jié)果顯示，在混勻后0.25、0.5、0.75、1、2、3和4 h，7號(hào)管均為澄明紅色溶液，管底無細(xì)胞殘留，為全溶血。6號(hào)管上層液體為無色澄明, 未發(fā)生溶血現(xiàn)象；紅細(xì)胞逐漸沉于管底, 經(jīng)振搖后可均勻散開, 說明亦無紅細(xì)胞凝聚現(xiàn)象。試管1～5與6號(hào)管一樣，上層液體為無色澄明,沉于管底的紅細(xì)胞經(jīng)振搖后可均勻散開，既未發(fā)生溶血，亦未發(fā)生紅細(xì)胞凝聚現(xiàn)象。

2.3 血管刺激性實(shí)驗(yàn) 取新西蘭兔16只，體重(2.1±0.3) kg，雌雄兼用，按體重隨機(jī)分為對(duì)照組和用藥組，每組8只，分別自耳緣靜脈注射0.9%氯化鈉注射液10 ml/kg和奧沙利鉑靜脈輸液10 ml/kg。注射后24 h，對(duì)注射部位進(jìn)行肉眼觀察，然后每組取4只家兔以注射部位為中心，剪下兔耳(含血管)3～5 cm，面積9～15 cm2，放入0.4%甲醛的溶液中固定，石蠟包埋，橫斷面切片(5～7 μm厚)，蘇木素-伊紅染色，進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。另4只家兔于靜脈注射給藥后7 d，進(jìn)行肉眼觀察和組織病理學(xué)檢查。肉眼觀察：注射部位有無紅、腫、增厚、硬結(jié)及潰瘍等現(xiàn)象，紅、腫程度分為0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ度。病理學(xué)檢查：觀察靜脈注射部位血管內(nèi)有無血栓形成；血管壁內(nèi)、中、外膜是否完整，血管壁有無變性、壞死；血管周圍組織有無水腫及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等改變。每項(xiàng)指標(biāo)按病變程度分輕、中、重三級(jí)，計(jì)1、2、3分，每組兔的每項(xiàng)指標(biāo)分值相加得該組兔該項(xiàng)指標(biāo)的總積分，除以家兔數(shù)，即得該組家兔該項(xiàng)指標(biāo)的平均分值，然后根據(jù)血管刺激性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

結(jié)果顯示，兔耳緣靜脈注射奧沙利鉑后24 h，注射部位未見明顯的紅、腫，亦未見明顯的增厚、硬結(jié)、潰瘍，與0.9%氯化鈉注射液對(duì)照組比較，無明顯差異。7 d后觀察也未見明顯的變化。病理組織學(xué)檢查：給藥后24 h，對(duì)照組家兔的各項(xiàng)指標(biāo)均為0分；奧沙利鉑組1只家兔血管周圍組織輕度水腫(1分)，2只家兔血管周圍有極少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)(各1分)，其余各項(xiàng)指標(biāo)均為0分，奧沙利鉑組的平均積分為0.75分。給藥后7 d，對(duì)照組和奧沙利鉑組兔的各項(xiàng)指標(biāo)均為0分。表明奧沙利鉑對(duì)血管有輕度刺激性，是可以恢復(fù)的。

2.4 熱原實(shí)驗(yàn) 按《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版二部附錄Ⅺ D熱原檢查法[4]進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 新西蘭兔，實(shí)驗(yàn)前測(cè)體溫2次(測(cè)量時(shí)肛溫計(jì)插入肛門的深度約6 cm，時(shí)間不得<1.5 min)，間隔30 min。選擇體溫在38.0～39.6 ℃，兩次體溫之差<0.2 ℃的健康家兔3只，兩次體溫的平均值為該兔的正常體溫。于第二次測(cè)正常體溫后15 min內(nèi)，自耳緣靜脈緩慢注入預(yù)熱至38 ℃的奧沙利鉑靜脈輸液10 ml/kg。然后每隔30 min測(cè)定其體溫1次，共6次。以6次體溫中最高的一次減去正常體溫，即為該兔的體溫升高度數(shù)。每只家兔體溫升高<0.6 ℃，3只家兔體溫升高總度數(shù)<1.3 ℃，不必復(fù)試。

結(jié)果顯示，3只家兔注射前的體溫分別為39.0、39.2、38.9 ℃，注射奧沙利鉑靜脈輸液后的最高體溫分別為39.4、39.5、39.1 ℃，體溫分別升高0.4、0.3、0.2 ℃，奧沙利鉑靜脈輸液熱原檢查符合規(guī)定。

3 討論和結(jié)論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，奧沙利鉑靜脈輸液過敏實(shí)驗(yàn)呈陰性，未產(chǎn)生溶血作用，對(duì)血管有輕度的刺激作用，熱原實(shí)驗(yàn)合格。另外，本品恒溫加速實(shí)驗(yàn)6個(gè)月和長(zhǎng)期留樣實(shí)驗(yàn)12個(gè)月，除在光照、高溫60 ℃條件下pH值略有升高、有關(guān)物質(zhì)有所增加(但仍在<1.0%的合格范圍內(nèi))，以及高溫60 ℃條件下顏色略有加深外，其他指標(biāo)均無明顯變化，其穩(wěn)定性良好[5]。這些均表明作者研制開發(fā)的奧沙利鉑靜脈輸液符合臨床安全性方面的要求。

【參考文獻(xiàn)】

[1]Ibrahim A，Hirschfeld S，Cohen M H,etal. FDA drug approval summaries: oxaliplatin[J]. Oncologist，2004，9(1)：8-12.

[2]Ibrahim H,Mauvernay R Y.Pharmaceutically stable preparation of oxaliplatinum：US，5716988[P].1998-02-10.

[3]Kaplan M A,Phusanti L,Perrone R K,etal.Stablized solutions of platinum(Ⅱ)antitumor agents：US，2128641[P]. 1995-02-12.

[4]國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典. 2010年版 二部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄 Ⅺ D.

State Pharmacopoeia Committee. Pharmacopoeia of the People’s Republic of China.2010 ed. Volume 2[S]. Beijing：Chinese Medical and Science Press,2010：Appendix Ⅺ D. In Chinese.

[5]蘇晨霞，李健和，易利丹，等. 奧沙利鉑靜脈輸液處方工藝優(yōu)化及其穩(wěn)定性考察[J].中國(guó)藥房，2013，24(13)：1201-1204.

Su ChenXia，Li JianHe，Yi LiDan，etal. Optimization of formulation and technology of oxaliplatin intravenous infusion and its stability study[J].China Pharmacy，2013，24(13)：1201-1204. In Chinese with English abstract.