馬翠云 劉高麗 吳松 王瓊波 石曉

漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南 漯河 462002

·實(shí)驗(yàn)教學(xué) Experimental Teaching·

關(guān)于氨基酸分離教學(xué)實(shí)驗(yàn)的改進(jìn)

馬翠云 劉高麗 吳松 王瓊波 石曉

漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南 漯河 462002

本文利用薄層層析法分離氨基酸，該實(shí)驗(yàn)在展開(kāi)過(guò)程中薄層板可立于展缸中，不用針線將層析做成圓筒，也不需懸掛系統(tǒng)。染色時(shí)層析板可以直接浸沒(méi)于茚三酮溶液中，無(wú)需染色噴霧器和吹風(fēng)機(jī)加熱，操作簡(jiǎn)單，反應(yīng)時(shí)間短，斑點(diǎn)清晰利于觀察，十分適合教學(xué)實(shí)驗(yàn)。

薄層層析法；反應(yīng)時(shí)間；教學(xué)實(shí)驗(yàn)

氨基酸的分離是生物化學(xué)的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，也是醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、生物化學(xué)和食品等專業(yè)的學(xué)生所必須掌握的基本操作，該實(shí)驗(yàn)的原理為茚三酮與氨基酸反應(yīng)生成藍(lán)紫色物質(zhì)（脯氨酸等仲胺氨基為黃色）化合物[1]主要過(guò)程分為展板、染色兩個(gè)部分：傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)展板時(shí)需要懸掛系統(tǒng)或用針線制成小圓筒；在染色噴霧過(guò)程中，因?qū)W生初學(xué)，噴灑技術(shù)欠佳，色斑易被沖散，若噴霧不均勻，導(dǎo)致比移值（Rf值）出現(xiàn)偏差，直接影響層析結(jié)果；紙層析所用的濾紙由于纖維的擴(kuò)展性強(qiáng)，能吸收22%左右的水，而且其中6%～7%的水是以氫鍵形式與纖維素的羥基結(jié)合，不易晾干，甚至于點(diǎn)樣時(shí)也不時(shí)需借助吹風(fēng)機(jī)加熱，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)的時(shí)間拉長(zhǎng)且需要吹風(fēng)機(jī)個(gè)數(shù)多，不利于學(xué)生教學(xué)，針對(duì)以上問(wèn)題，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行以下改進(jìn)。

1 實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)備

1.1 材料的準(zhǔn)備

薄層板（載玻片，GF254硅膠），點(diǎn)樣毛細(xì)管，鑷子，尺子和鉛筆，展缸，加熱套。

1.2 試劑

0.5%的纈氨酸，賴氨酸溶液；顯色劑（0.1%的茚三酮的乙醇溶液盛放于帶磨口蓋子的廣口瓶中）。

2 方法的改進(jìn)

2.1 展層的改進(jìn)—薄層層析的制備

薄層層析板可以直接購(gòu)買（底板為載玻片），可以在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行制作：0.1% CMC（羧甲基纖維素鈉）水溶液回流5個(gè)小時(shí)至無(wú)色透明粘稠狀液體，冷卻至室溫，取100 ml上清液加適量GF254硅膠并一個(gè)方向攪拌均勻（用藥匙瀝下呈流線型）；均勻薄厚一致的鋪在載玻片上，然后舀一勺倒在載玻片中間使其慢慢布滿整塊板面，最后輕輕振動(dòng)幾下，記住一定不要有氣泡，在透射光及反射光下檢視表面平整，麻點(diǎn)及破損；于室溫下晾干置于干燥器中備用。

2.2 點(diǎn)樣的改進(jìn)

在薄層板兩端各1 cm處畫(huà)一直線，在一端直線處平均分成3個(gè)點(diǎn)分別記為1，2，3；用毛細(xì)管吸取懶氨酸在1，3上，吸取纈氨酸在2，3點(diǎn)上。蘸取氨基酸時(shí)，如有毛細(xì)管處有氣泡滴夜等，可在薄層板上端1 cm處進(jìn)行處理。

2.3 展開(kāi)過(guò)程的改進(jìn)

在展瓶（可用磨口廣口瓶代替）中倒入少量的展層劑（液面小于1cm），用鑷子將點(diǎn)好樣的薄層板小心放入展瓶中，不要使薄層板貼壁，點(diǎn)樣的一端在下，擴(kuò)展劑的液面需低于點(diǎn)樣線，蓋上蓋子，待溶劑上升至上端直線處時(shí)，用鑷子將薄層板取出。

為防止氨基酸樣品拖尾現(xiàn)象，可在展開(kāi)劑中加一滴三乙胺，形成競(jìng)爭(zhēng)吸附，更便于實(shí)驗(yàn)觀察分析。

2.4 顯色的改進(jìn)

將展畢的薄層層析晾干后，用鑷子夾起上端慢慢使整塊薄層層析板浸沒(méi)到顯色劑中，取出后，把載玻片后面擦干凈，放入已穩(wěn)定的60 v的加熱套中，氨基酸慢慢顯色（從薄層板的背面更容易觀察出氨基酸點(diǎn)的形狀和顏色）。

2.5 Rf值的計(jì)算

用鉛筆圈出氨基酸斑點(diǎn)的大小，量出每個(gè)樣品從原點(diǎn)到層析斑點(diǎn)中心的距離x，原點(diǎn)到溶劑前沿的距離y，計(jì)算出各樣品的Rf＝x/y值.

3 總結(jié)

薄層層析法分離氨基酸的試驗(yàn)不需配置氨基酸混合液，避免傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)用濾紙做載體，不需要用針線將濾紙做成圓筒形，也不需要先放一個(gè)裝有展層劑的小燒杯預(yù)平衡整個(gè)大層析缸[2-3]。整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中，改進(jìn)的層析法耗材少；染色時(shí)可以直接浸沒(méi)于茚三酮溶液中，無(wú)需染色噴霧器染色和吹風(fēng)機(jī)使其顯色[4]，也不需要把茚三酮加入展開(kāi)劑中，只在展板結(jié)束后，用茚三酮顯色，準(zhǔn)確記錄氨基酸的Rf值。操作簡(jiǎn)單，反應(yīng)時(shí)間短，斑點(diǎn)清晰利于觀察等優(yōu)點(diǎn)，更便于學(xué)生容易掌握和運(yùn)用。

[1]刑其毅, 裴偉偉，徐瑞秋, 等. 基礎(chǔ)有機(jī)化學(xué)[M]. 3版. 北京：高等教育出版社，2005：983.

[2]周麗華, 馮道全, 倪惠瓊, 等. 氨基酸紙上層析方法的研究[J]. 安徽理工大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2003(1): 47-49.

[3]楊曉玲, 趙宗云, 劉永軍, 等. 應(yīng)用紙層析分離鑒定氨基酸的方法改進(jìn)[J]. 植物生理學(xué)通訊, 2002, 38(4): 368.

[4]楊麗, 尤麗, 葉金秀, 等. 紙層析分離鑒定氨基酸實(shí)驗(yàn)的改進(jìn)[J]. 云南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2011, 20(3): 229.

The Improvement of the Amino Acids' Separation on Experiment Teaching

MA Cuiyun LIU Gaoli WU Song WANG Qiongbo SHI Xiao,Luohe Medical College, Luohe He’nan 462002, China

In this article, Thin Layer Chromatography (TLC) was used to isolate the amino acid, during the process of deploy method, thin layer plate can stand in the ex-hibition bottle without cylinder which made by Layer Chromatography during a needle and thread and the suspension system. At the step of dyeing, the plate can be immersed in ninhydrin solution directly without dyeing spray and hair dryer heating, it is fully applicable to teaching experiment for its simple operation, short reaction time, and spots clear observation.

Thin layer chromatography, Reaction time, Teaching experiment

G642

B

1674-9308（2014）08-0018-02

10.3969/J.ISSN. 1674-9308.2014.08.010