孟登科 周 靜 樓建秀 浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院 杭州 310000

清宮湯抗焦慮作用實(shí)驗(yàn)研究

孟登科 周 靜 樓建秀 浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院 杭州 310000

目的 研究清宮湯的抗焦慮作用。方法 健康雄性昆明種小鼠50只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、地西泮組、清宮湯高、中、低劑量組，每組10只?？瞻讓?duì)照組給予生理鹽水，其余各組給藥10天，第10天進(jìn)行國際通用的高架十字迷宮模型（EPM）行為學(xué)觀察，統(tǒng)計(jì)各組進(jìn)開臂時(shí)間和進(jìn)開臂次數(shù)。結(jié)果 與空白對(duì)照組比較，地西泮組、清宮湯中劑量組小鼠進(jìn)開臂次數(shù)（OE）和進(jìn)開臂時(shí)間（OT）、低頭探究次數(shù)和臂內(nèi)雙腿自立次數(shù)明顯增加（P＜0.05），清宮湯低劑量和清宮湯高劑量組增加不明顯（P＞0.05）。結(jié)論 清宮湯有抗焦慮作用，中劑量組抗焦慮作用最明顯。

小鼠；焦慮模型；抗焦慮；清宮湯；EPM；行為學(xué)

清宮湯由元參心、蓮子心、竹葉卷心、連翹心、犀角（水牛角代）、連心麥冬組成[1]，出自清代吳鞠通《溫病條辨》，主治溫病誤用汗法，汗出過多，耗傷心液，邪陷心包而致的身膚灼熱、神昏譫語、舌蹇肢厥等癥[2]。臨床報(bào)道可治療更年期失眠、狂證、房顫、心動(dòng)過速等病證[3-4]。焦慮癥臨床表現(xiàn)常見頭暈、胸悶、心悸、呼吸困難、口干、尿頻、尿急、出汗、震顫和運(yùn)動(dòng)性不安等癥，與清宮湯適應(yīng)證有一定的相似之處。本研究擬對(duì)清宮湯進(jìn)行抗焦慮作用研究，為擴(kuò)大清宮湯的臨床應(yīng)用范圍提供一定的理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1．1 動(dòng) 物 健康雄性昆明種小鼠50只，5～6周齡，清潔級(jí)，體質(zhì)量17～19g，上海醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK（滬）2009-0601。

1．2 藥品與試劑 地西泮（規(guī)格：2.5mg，批號(hào)：0912130），臨用碾碎藥片，用去離子水配制成溶液；清宮湯常規(guī)方法煎煮后制成高、中、低，即12.25g/（9kg·d）、6.50g/（kg·d）、3.75/g（kg·d）劑量，分裝滅菌后4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1．3 器 材 小鼠高架十字迷宮（EPM）（自制）[5]。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2．1 分組和給藥 雄性昆明種小鼠50只，隨機(jī)分為5組，即空白對(duì)照組、地西泮組、清宮湯高、中、低劑量組,每組10只。清宮湯高、中、低劑量組分別按12.25g/（9kg·d）、6.50g/（kg·d）、3.75/g（kg·d）給予灌胃，地西泮組按2.0mg/（kg·d）給以地西泮混懸液灌胃，空白對(duì)照組灌服等容積生理鹽水，各組連續(xù)灌胃10天。實(shí)驗(yàn)第10天，清宮湯高、中、低劑量組和空白對(duì)照組末次灌胃1h后，地西泮組給藥0.5h后，于8: 00～14:00做高架十字迷宮測(cè)試。所有動(dòng)物均于實(shí)驗(yàn)前一天進(jìn)入測(cè)試實(shí)驗(yàn)室。

2．2．1 測(cè)試條件 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)光線昏暗（以1.5m距離處能區(qū)分小鼠細(xì)微活動(dòng)的最低亮度為準(zhǔn)）并保持恒亮，室溫20℃左右，保持安靜。

2．2 ．2 測(cè)試指標(biāo) 迷宮測(cè)試前每只小鼠自由活動(dòng)，探究5min后迅速置于EPM的中央平臺(tái)處，使其頭部正對(duì)其中一個(gè)開放臂，釋放后即開始記錄下述指標(biāo)。每只小鼠測(cè)試5min。①記錄進(jìn)入開放臂次數(shù)（OE），以小鼠4個(gè)爪子均進(jìn)入到臂內(nèi)為準(zhǔn)，中途1個(gè)爪子從該臂中完全退出則為該次進(jìn)入活動(dòng)完成；②記錄進(jìn)入開放臂時(shí)間（OT）；③觀察小鼠低頭探究次數(shù)和臂內(nèi)雙腿直立次數(shù)。

觀測(cè)人員在距離測(cè)試箱1.5m處分別觀察記錄動(dòng)物的活動(dòng)。中間用濕布擦拭迷宮，清除糞便，繼用干布擦凈后再進(jìn)行下一只小鼠的測(cè)試。

2．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件，數(shù)據(jù)以（±s）表示，采用單因素方差分析、Student-Newman-Keuls檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

3．1 各組小鼠進(jìn)開臂次數(shù)和時(shí)間 與空白對(duì)照組比較，地西泮組、清宮湯中劑量組小鼠進(jìn)入開放臂次數(shù)和進(jìn)入開放臂時(shí)間明顯增加（P＜0.05）；清宮湯低劑量和清宮湯高劑量組增加不明顯，見表1。

表1 各組小鼠進(jìn)開臂次數(shù)和進(jìn)開臂時(shí)間（±s）

表1 各組小鼠進(jìn)開臂次數(shù)和進(jìn)開臂時(shí)間（±s）

注：空白對(duì)照組比較，*P＜0.05

組別空白對(duì)照組地西泮組清宮湯低劑量組清宮湯中劑量組清宮湯高劑量組n/只10 10 10 10 10進(jìn)開臂次數(shù)/次15.35±5.07 28.40±3.22* 14.74±3.86 27.17±4.59* 16.97±4.02進(jìn)開臂時(shí)間/s 13.45±5.57 19.88±6.07* 12.12±3.33 22.36±6.03* 13.92±4.86

3．2 小鼠低頭探究次數(shù)和臂內(nèi)雙腿直立次數(shù)比較

與空白對(duì)照組比較，地西泮組和清宮湯中劑量小鼠在開放臂內(nèi)雙腿直立次數(shù)百分率和中央平臺(tái)區(qū)低頭探究次數(shù)百分率顯著增加（P＜0.05）；清宮湯高劑量組和清宮湯低劑量組增加不明顯，見表2。

表2 各組小鼠低頭探究次數(shù)和臂內(nèi)雙腿直立次數(shù)（±s）

表2 各組小鼠低頭探究次數(shù)和臂內(nèi)雙腿直立次數(shù)（±s）

注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05

組別空白對(duì)照組地西泮組清宮湯低劑量組清宮湯中劑量組清宮湯高劑量組n/只10 10 10 10 10低頭探究/次2.25±1.08 14.09±2.12* 3.45±1.07 15.13±2.06* 2.27±1.13臂內(nèi)雙腿直立/次5.71±1.03 11.66±4.43* 6.84±1.56 13.35±3.09* 4.11±1.01

4 討論

本實(shí)驗(yàn)以O(shè)E和OT反映動(dòng)物的焦慮狀態(tài)，OE和OT是動(dòng)物趨近-規(guī)避沖突的結(jié)果，與焦慮程度直接相關(guān)。焦慮動(dòng)物的OE和OT明顯降低，經(jīng)典抗焦慮藥物可使兩者升高，而此二者的下降則意味著預(yù)處理措施加劇了動(dòng)物的焦慮程度（致焦慮作用）。通常抗焦慮藥物只增加動(dòng)物對(duì)開放臂的探索，使OT和OE上升，而致焦慮藥物也僅是降低OT和OE，不會(huì)使封閉臂的探索減少。動(dòng)物在開放臂和中央平臺(tái)區(qū)低頭探究的次數(shù)則反映了在非保護(hù)區(qū)內(nèi)的探索行為，代表動(dòng)物對(duì)陌生環(huán)境的好奇探究或因恐懼而尋求逃避，與焦慮程度也有一定相關(guān)性。本研究顯示，空白對(duì)照組小鼠較少進(jìn)入或停留于開放臂中，而傾向探究封閉臂，體現(xiàn)了模型的設(shè)計(jì)原理；2.0mg/（kg· d）的地西泮可使OE、OT顯著增加，低頭探究次數(shù)明顯增多，說明小鼠對(duì)開放臂和非保護(hù)區(qū)的探究增加，反映了地西泮的抗焦慮作用，符合Handley和Mithani的模型設(shè)計(jì)理念[8]，并與Pellow的結(jié)果[9]一致，表明本實(shí)驗(yàn)中EPM模型的復(fù)制成功。實(shí)驗(yàn)還觀察到，清宮湯中劑量可顯著增加小鼠OE和OT值，明顯提高小鼠在開放臂和中央平臺(tái)區(qū)低頭探究次數(shù)；清宮湯高、低劑量對(duì)OE、OT、低頭探究的影響均不明顯。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，清宮湯高、低劑量組沒有抗焦慮效果，清宮湯中劑量具有一定的抗焦慮效應(yīng)，符合經(jīng)典抗焦慮藥物的原理，與地西泮的作用方向一致。

焦慮癥又稱焦慮性神經(jīng)癥，是以廣泛性焦慮癥（慢性焦慮癥）和發(fā)作性驚恐狀態(tài)（急性焦慮癥）為主要臨床表現(xiàn)，常伴有頭暈、胸悶、心悸、呼吸困難、口干、尿頻、尿急、出汗、震顫和運(yùn)動(dòng)性不安等癥，其焦慮并非由實(shí)際威脅所引起，或其緊張?bào)@恐程度與現(xiàn)實(shí)情況很不相稱，主要表現(xiàn)為睡眠障礙、心事煩多、坐立不安、失眠多夢(mèng)、食欲不振等焦慮和植物神經(jīng)功能紊亂癥狀。

應(yīng)用抗焦慮藥是治療焦慮癥的主要方法。目前臨床最常用的抗焦慮藥物仍是以地西泮為代表的苯二氮卓類（Benzodiazepines，BDZ），這類藥物雖有較好的抗焦慮作用，但也存在著肌肉松弛、記憶力減弱等不良反應(yīng)。此外，這類藥物還可與酒精產(chǎn)生相互作用，引起嚴(yán)重后果，久用可產(chǎn)生藥物依賴性[10-13]。因此，尋找療效確切、副作用小的抗焦慮藥仍是目前抗焦慮研究的重要課題。

近年來社會(huì)競(jìng)爭(zhēng)的日趨激烈與生活壓力的不斷加大，焦慮疾病發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，世界衛(wèi)生組織研究報(bào)告顯示，中國人疾病負(fù)擔(dān)較高的25種疾病中精神疾病占5項(xiàng)。精神障礙所造成的負(fù)擔(dān)，己經(jīng)超過心腦血管疾病、糖尿病和惡性腫瘤等疾患，在中國人疾病總負(fù)擔(dān)中排名第一[14]。中醫(yī)無“焦慮癥”之名，從臨床表現(xiàn)看，屬于情志病、心病范疇，與“郁證”等有關(guān)，多因不良環(huán)境、精神刺激致憂思?xì)饨Y(jié)，氣滯血瘀，久之化熱生火，擾動(dòng)心神，此外，肝陽上亢、肝風(fēng)上擾等也可致病。

清宮湯方中玄參滋水養(yǎng)陰，水牛角清熱解毒，共為君藥；臣以麥冬養(yǎng)陰清心；佐以連翹清心解毒，竹葉心清心通竅；使以蓮心清心去熱，能使心火下通于腎，又能使腎水上濟(jì)于心。諸藥合用，能清心營之熱而育養(yǎng)心陰[15]。

綜上所述，清宮湯中劑量抗焦慮作用效果最佳。但本實(shí)驗(yàn)缺乏對(duì)清宮湯中劑量附近的劑量研究。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)和本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，清宮湯具有抗焦慮作用，最佳劑量為6.50g/（kg·d）。

［1］吳瑭.溫病條辯［M］.北京：中國書店，1994：23.

［2］王偉，唐戈.清宮湯加減治療狂證［J］.吉林中醫(yī)藥，2002，22（1）：16.

［3］劉斌，曹順明.清宮湯臨床新用［J］.山東中醫(yī)雜志，2001，20（12）：754.

［4］徐文煒.Ellis理性情緒行為療法對(duì)抑郁癥的作用［J］.臨床精神醫(yī)學(xué)雜志，2006，16（16）：205.

［5］倪小虎，白潔.高架十字迷路課題中人參根和莖葉皂苷抗焦慮效果的研究［J］.中草藥，2001，32（3）：238-241.

［6］郭克鋒，郭珊，楊文清，等.心理與藥物治療焦慮性神經(jīng)癥的隨機(jī)對(duì)照觀察［J］.中國臨床康復(fù)，2004，8：412.

［7］Gard PG，Haigh SJ，Cambursano PT，et al.Strain differences in anxiolytic effects of losartan in the mouse［J］.Pharmacol Biochem Behav，2001，69：35-40.

［8］王欣，謝鳴.酸棗仁湯對(duì)高架十字迷宮大鼠行為學(xué)影響的量效關(guān)系評(píng)價(jià)［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2004，10（1）：35-37

［9］曾岳峰，劉永有，王懷記，等.吸毒患者親屬心理-行為干預(yù)方法及效果研究［J］.中國藥物濫用防治雜志，2005，11（6）：317-320.

［1 0］Gabizon A，Shmeeda H，Barenholz Y.Pharmacokinetics of pegylated liposomal Doxorubicin:review of animal and human studies［J］.Clin Pharmacokinet，2003，42（5）：4192-4361

［1 1］榮春蕾，代永霞，崔瑛.酸棗仁對(duì)陰虛小鼠焦慮行為的影響［J］.中藥材，2008，11（31）：1703-1705.

［1 2］Chilvers CR，Nguyen MH，Robertson IK.Changing from epidural to multimodal analgesia for colorectal laparotomy an audit［J］.Anesth Intensive Care，2007，35（2）：23-28.

［1 3］Yamashita K，F(xiàn)ukusaki M，Ando Y，et al.1Preoperative administration of intravenous flurbiprofen axetil reduces postoperative pain for spinal fusion surgery［J］.J Anesth，2006，20（2）：922-951.

［1 4］楊紅菊，羅質(zhì)璞.抗焦慮藥的研究進(jìn)展［J］.中華精神科雜志，2002，35（4）：250.

［1 5］粟華魁，黃淵喜.清宮湯加減方治療急性病毒性心肌炎56例［J］.臨床療效觀察，2004，12（10）：66.

Effect of Qinggong Decoction on Anxiety

MENG Dengke,ZHOU Jing,LOU Jianxiu.The First Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou(310000),China

ObjectiveTo study the anxiolytic effect of Qinggong decoction.MethodsFifty healthy male Kun ming mice were randomly divided into control group,diazepam（DZP）,and Qinggong decoction groups with high（12.25, 6.50,3.75 g·kg-1·d-1）,medium,and low doses（n＝10）.Control group

normal saline and other groups were administered the corresponding drugs for 10 days.Elevated plus maze（EPM）test was used to observe the anxiety-related behavior of mice.ResultsCompared with control group,total number of entries and duration into the open arms of DZP group and Qinggong decoction with medium dose group were significantly increased（P＜0.05）,while no significant difference in entries and duration was noted in the low-and high-dose Qinggong decoction groups（P＞0.05）.Compared with control group,an increase in the number of head dip of DZP and Qingtang decoction groups was found（P＜0.05）,but the same increase was not seen in the low-and high-dose groups of Qingtang decoction（P＞0.05）.ConclusionQinggong decoction possesses anxiolytic effect and acts effectively at the dose of 6.50 g·kg-1·d-1.

mice；anti-anxiety；Qinggong decoction；EPM；behavior

2013-04-08