錢(qián)國(guó)強(qiáng) 彭 霞 高宇勤 蔡 川 梁雪冰 郭 軍 潘勝軍 趙國(guó)平

(黃淮學(xué)院,河南 駐馬店 463000)

再灌注性心律失常(RA)以室性心律失常居多，如室性心動(dòng)過(guò)速和心室顫動(dòng)等。RA發(fā)生的基本條件：①再灌注區(qū)必須存在有功能上可以恢復(fù)的心肌細(xì)胞，這種心肌細(xì)胞存在越多，心律失常的發(fā)生率越高；②再灌注前缺血時(shí)間的長(zhǎng)短：實(shí)驗(yàn)證明，全冠狀動(dòng)脈阻斷后15～45 min再灌注，心律失常的發(fā)生率最高，缺血時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，其發(fā)生率都低；缺血心肌的數(shù)量、缺血的程度及再灌注恢復(fù)的速度與心律失常的發(fā)生率呈正比。NO為內(nèi)皮依賴(lài)性舒張因子，可舒張血管、減少心臟前后負(fù)荷而保護(hù)心肌，直接增強(qiáng)心室肌的擴(kuò)張效應(yīng)來(lái)保持心輸出量〔1〕。本研究觀察當(dāng)歸四逆湯有效成分組合(GFPC)〔2〕，對(duì)MIRI大鼠RA的發(fā)生率及其與NO的關(guān)系，探討防治MIRI的有效機(jī)制。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1動(dòng)物 SPF級(jí)雄性SD大鼠32只，體重280～400 g，購(gòu)自廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)SCXK(粵)2008-0002，本實(shí)驗(yàn)共有2只大鼠由于麻醉或手術(shù)原因死亡，死亡率為6.3%。

1.1.2藥物 芍藥苷、阿魏酸、甘草酸、肉桂酸均購(gòu)自南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司。NO試劑盒：購(gòu)自南京建成生物工程研究所；L-NAME：美國(guó)Sigma公司。

1.1.3器材 心電圖機(jī)(ASB240V生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng))，成都遨升電子公司低溫離心機(jī)(Eppendorf公司)。

1.2方法

1.2.1分組 32只雄性SD大鼠分為4組,每組8只。shame組：未經(jīng)缺血再灌注處理；I/R組：SD大鼠心肌缺血30 min再灌注120 min后取材；PPC組：灌胃4 d，每天1次，最后一次于實(shí)驗(yàn)前30 min灌胃，灌胃劑量為甘草酸50 mg/kg，阿魏酸400 mg/kg，芍藥苷100 mg/kg，肉桂酸400 mg/kg，心肌缺血30 min再灌注120 min取材；PPC+L組：灌胃4 d天，每天1次，最后一次于實(shí)驗(yàn)前30 min灌胃，灌胃劑量為甘草酸50 mg/kg，阿魏酸400 mg/kg，芍藥苷100 mg/kg，肉桂酸400 mg/kg，并于再灌注前15 min給予L-NAME(eNOS選擇性抑制劑)30 mg/kg，再灌注120 min取材。

1.2.2心電監(jiān)測(cè) 再灌注心律失常的發(fā)生包括早搏、傳導(dǎo)阻滯、房撲、房顫、室速、室顫。

1.2.3NO檢測(cè)方法 血液標(biāo)本靜置30 min，以3 000 r/min，4℃,離心15 min，取上清按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，根據(jù)公式計(jì)算NO含量。

2 結(jié) 果

2.1MIRI模型大鼠心電圖改變 ST段明顯抬高≥0.1 mV或T波高聳；心肌顏色變暗紅色為結(jié)扎成功標(biāo)志，30 min后松開(kāi)結(jié)扎線，抬高的ST段下降在 1/2以上為缺血再灌注成功。

2.2再灌注心律失常發(fā)生率 與shame組(12.5%)比較，I/R組RA發(fā)生率(87.5%)顯著高于shame組(P<0.05)，與I/R組比較PPC組的發(fā)生率(25.0%)顯著下降(P<0.05)，PPC+L組發(fā)生率為50.0%;GFPC可明顯降低MIRI大鼠RA的發(fā)生率。

2.3血清NO濃度 與shame組比較，I/R組大鼠血清NO含量(12.98±0.94)明顯降低(P<0.05);與I/R組(4.95±0.212)比較,PPC組血清NO含量(9.27±0.73)明顯升高(P<0.05);與PPC組比較,PPC+L組血清中NO含量(7.81±0.34)明顯降低(P<0.05)。MIRI時(shí)，大鼠血清中NO含量明顯降低，GFPC可明顯升高大鼠血清中NO。

3 討 論

血管內(nèi)皮細(xì)胞(VEC)作為組織與血液間的第一道屏障，在維持血液循環(huán)的穩(wěn)定中起重要調(diào)節(jié)作用〔3〕,VEC功能障礙與RA的發(fā)生和發(fā)展有關(guān),NO合成釋放是VEC損傷的標(biāo)志之一，VEC功能障礙與心律失常的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)〔4〕。研究表明，L-精氨酸可明顯抑制RA的發(fā)生，其機(jī)制與升高再灌注時(shí)體內(nèi)NO水平有關(guān)，有研究〔5〕指出RA級(jí)別與NO含量呈負(fù)相關(guān)。NO作為重要的信號(hào)分子介導(dǎo)多種生理功能,在心律失常的病理狀態(tài)下,EC功能受損,NOS及NO產(chǎn)物合成減少,并且活性也明顯降低,提示NO參與了心肌氧合期的損傷反應(yīng)〔6〕。MIRI導(dǎo)致的RA包括傳導(dǎo)阻滯、早搏、室速、室性并性心律等多種形式。本實(shí)驗(yàn)將GFPC聯(lián)合應(yīng)用，從多靶點(diǎn)發(fā)揮了抑制RA發(fā)生、抗MIRI的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明用eNOS選擇性阻斷劑L-NAME后，大鼠RA發(fā)生率有所上升，但未明顯升高，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CFPC藥物預(yù)處理后，RA發(fā)生率明顯下降，說(shuō)明藥物組合可明顯升高血清中NO的含量，降低RA的發(fā)生率，起到對(duì)抗RA的作用。RA的發(fā)生與NO的量成反比，eNOS蛋白磷酸化后，可以促進(jìn)L-arg合成釋放NO增加，從而激活下游通路發(fā)揮NO的抗心律失常、保護(hù)心肌作用，此結(jié)果與實(shí)驗(yàn)報(bào)道相一致〔7〕。

4 參考文獻(xiàn)

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