袁 明，余春平

（武漢能邁科實業(yè)有限公司，湖北武漢 430010）

肉桂酸鉀在食品添加劑、香精香料、畜牧業(yè)、日化用品等工農(nóng)業(yè)領(lǐng)域有著極其廣泛的應(yīng)用。肉桂酸鉀具有較強的抑菌能力，尤其是對引起食品腐敗的霉菌、細(xì)菌和酵母菌作用明顯，且由于其良好的溶解性，是一種廣泛使用的食品防腐保鮮劑，且屬于無公害的環(huán)保防腐劑，可替代苯甲酸鈉，山梨酸鉀等產(chǎn)品[1-3]。張志軍等[4]研究了用乙醇和硫酸將食品中的肉桂酸鉀衍生為肉桂酸后提取，利用高效氣相色譜儀來測定提取后得到的肉桂酸含量，從而計算出食品中的肉桂酸鉀含量，并通過正交試驗對衍生條件進(jìn)行了優(yōu)化，最終肉桂酸鉀的回收率達(dá)到了97.51%，但衍生過程比較煩瑣，不夠簡便。王李平等[5]同樣是通過將食品中的肉桂酸鉀用酸衍生為肉桂酸，再通過二氯甲烷來萃取肉桂酸，利用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀來測定肉桂酸的含量，從而計算得到食品中肉桂酸鉀的含量，取得了較好的效果，但上述方法檢測過程同樣比較煩瑣，且質(zhì)譜儀設(shè)備昂貴，無法大規(guī)模推廣，且尚未見到肉桂酸鉀的液相檢測方法的相關(guān)報道，本文通過檢測過程中液相色譜設(shè)備的重復(fù)性，樣品處理方法的穩(wěn)定性和肉桂酸鉀的回收率，樣品配制后的穩(wěn)定性等來研究該方法的可行性，建立了一種高效、穩(wěn)定、無毒的檢測食品中肉桂酸鉀含量的高效液相色譜法，提高肉桂酸鉀測定的準(zhǔn)確度。

1 材料與方法

1.1 材料

食品樣品香辣蘿卜干由客戶提供。

1.2 儀器與試劑

南京科捷高效液相色譜儀LC600，配備了UVD檢測器；色譜柱為南京杰島C18反相柱，規(guī)格為250 mm×4.6 mm，5 μm；語盟超聲波清洗機(jī)；肉桂酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品由國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，純度99.81%；蒸餾水為自制二重蒸餾水；甲醇為色譜級；其他試劑均為分析純。

1.3 實驗方法

1.3.1 色譜條件

流動相：甲醇-0.5%磷酸（50∶50，V/V）溶液；流動相流速：1 mL/min；檢測器光源波長：285 nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20 μL。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

精密稱取肉桂酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品100.0 mg，置于100 mL潔凈的容量瓶中，加適量甲醇溶解并定容至刻度線，搖勻并超聲脫氣，作為儲備液，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時，移液管精密移取一定量的標(biāo)準(zhǔn)溶液儲備液稀釋成一系列所需濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.3 樣品的制備

精密稱取待測樣品若干，使用潔凈的研缽將樣品搗碎后轉(zhuǎn)移至燒杯中，適量甲醇沖洗研缽后，向燒杯中添加15 mL甲醇，混合物超聲提取后離心，收集上清液，離心得到的固體再次使用15 mL甲醇沖洗，混合物超聲提取后離心，收集上清液，重復(fù)上述步驟3次，提取樣品中的肉桂酸鉀，集合所收集的上清液，經(jīng)0.22 μm微孔過濾膜過濾，定容至100 mL容量瓶，超聲脫氣，作為待測液。

1.3.4 測定方法

（1）高效液相色譜儀重復(fù)性測試方法。取同一標(biāo)準(zhǔn)溶液，連續(xù)進(jìn)樣3次，測定肉桂酸鉀峰面積，計算峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

（2）樣品處理方法重復(fù)性測試方法。精密稱取同一樣品3份，按上述樣品處理方法進(jìn)行處理，測定肉桂酸鉀峰面積，計算峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

（3）樣品中肉桂酸鉀的回收率測試方法。采用樣品加標(biāo)回收率驗證，精密稱取同一樣品6份，向3份樣品中加入一定量的肉桂酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品，3份樣品作為對照品，6份樣品均按上述樣品的制備方法處理樣品，測定肉桂酸鉀峰面積，計算肉桂酸鉀的回收率以及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

（4）樣品穩(wěn)定性測試方法。精密稱取待測樣品1份，按上述樣品處理方法處理樣品，每隔3 h進(jìn)樣，測定肉桂酸鉀峰面積，計算峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

配制濃度為0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.4 mg/mL、0.6 mg/mL、0.8 mg/mL和1.0 mg/mL的肉桂酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液，測定肉桂酸鉀峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖1。由圖1可知，肉桂酸鉀濃度在0～1.0 mg/mL，外標(biāo)曲線擬合度達(dá)到0.999 4，肉桂酸鉀濃度與峰面積的線性關(guān)系較好。

圖1 肉桂酸鉀濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 HPLC重復(fù)性驗證

取0.2 mg/mL的肉桂酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣3次，肉桂酸鉀的峰面積和保留時間如表1所示。由表1可知，肉桂酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣3次的峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.94%，保留時間基本一致，說明HPLC設(shè)備的重復(fù)性較好。

表1 肉桂酸鉀峰面積和保留時間

2.3 樣品處理方法重復(fù)性和肉桂酸鉀回收驗證

精密稱取香辣蘿卜干6份，每份10.000 0 g，編號為1～6號樣品，其中4～6號樣品中均添加肉桂酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品20.0 mg，1～3號樣品為對照樣品，4～6號樣品為加標(biāo)樣品，6份樣品均按上述樣品處理方法進(jìn)行處理，1～3號樣品的肉桂酸鉀的峰面積和保留時間結(jié)果如表2所示。4～6號樣品的肉桂酸鉀的回收率結(jié)果如表3所示。

表2 肉桂酸鉀峰面積和保留時間

表3 肉桂酸鉀回收率

由表2、表3可知，1～3號樣品按上述樣品處理方法處理后，所測得的肉桂酸鉀相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.89%，保留時間基本一致，4～6號樣品的肉桂酸鉀的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.23%，說明上述樣品處理方法穩(wěn)定、可靠，能較好地提取出待測樣品中的肉桂酸鉀。

2.4 樣品穩(wěn)定性驗證

將上述1號樣品分別靜置3 h和6 h后進(jìn)樣，測得的肉桂酸鉀峰面積和保留時間如表4所示。

表4 肉桂酸鉀峰面積和保留時間

由表4可知，其峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差0.98%，保留時間基本一致，說明樣品的穩(wěn)定性較好，放置6 h并不會對樣品中肉桂酸鉀含量的測定造成影響。

2.5 樣品中肉桂酸鉀含量的測定

精密稱取香辣蘿卜干1.000 0 g，按上述樣品處理方法處理后上機(jī)檢測，樣品中肉桂酸鉀含量測定的液相譜圖見圖2。將峰面積帶入到式（1）計算樣品中肉桂酸鉀添加量為0.329 0 mg/g。

圖2 產(chǎn)品液相測定譜圖

式中：w為肉桂酸鉀的添加量，mg/g；m為樣品的質(zhì)量，g；A為峰面積，mAu·s。

3 結(jié)論

該方法能較高效、穩(wěn)定、無毒地檢測出食品中肉桂酸鉀的含量，所測得的數(shù)據(jù)可靠性高，對于測定食品及其他化工品中肉桂酸鉀的含量和鑒定商品肉桂酸鉀的質(zhì)量具有一定的參考作用。