張 崇，薛飛群，張麗芳，張曉曉，王霄旸，江善祥

（1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，獸醫(yī)藥理與毒理實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京 210095；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所，獸藥安全評(píng)價(jià)與獸藥殘留重點(diǎn)開(kāi)放 實(shí)驗(yàn)室，上海 200241）

親水液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定羊肌肉組織中安乃近代謝物的殘留量

張 崇1,2，薛飛群2，張麗芳2，張曉曉2，王霄旸2，江善祥1,*

（1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，獸醫(yī)藥理與毒理實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京 210095；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所，獸藥安全評(píng)價(jià)與獸藥殘留重點(diǎn)開(kāi)放 實(shí)驗(yàn)室，上海 200241）

建立了羊肌肉組織中安乃近4 種主要代謝物——4-甲氨基安替比林、4-氨基安替比林、4-甲酰氨基安替比林和4-乙酰氨基安替比林的親水液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析方法。肌肉樣品均質(zhì)后，用體積分?jǐn)?shù)為5%的氨水乙腈提取，提取液用Cleanert PSA初步凈化，60 ℃氮?dú)獯蹈?乙腈復(fù)溶后過(guò)MAX（SPE）柱凈化，采用親水液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定，4 種物質(zhì)均采用外標(biāo)法定量。結(jié)果顯示：4-甲氨基安替比林、4-甲酰氨基安替比林和4-乙酰氨基安替比林在添加量為4～200 μg/kg范圍內(nèi)線性良好；4-氨基安替比林在添加量為40～2 000 μg/kg范圍內(nèi)線性良好。在5、50、100、1 000 μg/kg 4 個(gè)添加量，回收率在75.02%～116.2%范圍內(nèi)。日內(nèi)變異系數(shù)為1.63%～15.12%（n=5），日間變異系數(shù)均小于11%（n=15）。4-甲氨基安替比林、4-甲酰氨基安替比林和4-乙酰氨基安替比林的檢測(cè)限均為0.5 μg/kg，4-氨基安替比林的檢測(cè)限為5 μg/kg。該方法靈敏度高、重復(fù)性好，適用于羊肌肉組織中安乃近4 種主要代謝物的大批量樣品檢測(cè)。

羊肌肉；安乃近代謝物；親水液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

安乃近（dipyrone）1922年最早在德國(guó)上市，是臨床常用的解熱鎮(zhèn)痛藥之一，屬于吡唑酮類非甾體抗炎藥[1]。安乃近被歸類為一種典型的前體藥物，經(jīng)口攝入后，被迅速水解成4-甲氨基安替比林（4-methylaminoantipyrine，MAA），經(jīng)過(guò)一系列的酶促反應(yīng)吸收、轉(zhuǎn)化發(fā)揮主要的藥理作用。在肝臟中MAA被進(jìn)一步氧化為4-甲酰氨基安替比林（4-formylaminoantipyrine，F(xiàn)AA），去甲基化為4-氨基安替比林（4-aminoantipyrine，AA）。AA又可進(jìn)一步甲?；癁镕AA或乙?；癁?-乙酰氨基安替比林（4-acetylaminoantipyrine，AAA）[2]。安乃近及其代謝物結(jié)構(gòu)如圖1所示。

圖1 安乃近及其代謝物的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 Chemical structures of dipyrone and metabolites

在獸醫(yī)領(lǐng)域，安乃近主要作為一些嚴(yán)重疾病的輔助對(duì)癥藥物。由于其解熱鎮(zhèn)痛療效確切，價(jià)廉易得，經(jīng)常被長(zhǎng)期過(guò)量使用，且由于不嚴(yán)格遵守休藥期等原因，容易在動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生蓄積殘留，進(jìn)而危害人類的生命健康。

安乃近不良反應(yīng)主要包括導(dǎo)致粒細(xì)胞減少、再生障礙性貧血、嚴(yán)重的過(guò)敏反應(yīng)和休克虛脫等[3-4]。鑒于其嚴(yán)重的毒性作用，美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局1977年取消了含安乃近的人用藥物制品的批準(zhǔn)上市，隨后包括加拿大，瑞典在內(nèi)的一些西方國(guó)家也頒布了關(guān)于禁止安乃近應(yīng)用于食源性動(dòng)物的規(guī)定[5-6]。中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第235號(hào)文件規(guī)定，安乃近在食源動(dòng)物（包括牛、豬、馬）的肌肉組織中的最高殘留限量為200 μg/kg（以MAA為殘留標(biāo)示物計(jì)算）[7]，歐洲藥品管理局規(guī)定食源動(dòng)物（包括牛、豬、馬）的肌肉組織中安乃近的最高殘留限量為100 μg/kg（以MAA為殘留標(biāo)示物計(jì)算）[8]。關(guān)于羊肌肉組織中最高殘留限量，中外都沒(méi)有規(guī)定。已報(bào)道的安乃近檢測(cè)方法中，國(guó)內(nèi)主要有液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[9-11]、液相色譜法[12-14]、差示分光光度法[15]等，國(guó)外主要有液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[16-17]、液相色譜二極管陣列法[5]、分光光度法[18]等，檢測(cè)對(duì)象主要是藥品制劑，城市廢水，牛、豬肌肉組織，牛奶等。對(duì)于安乃近在羊可食性組織中的殘留檢測(cè)未見(jiàn)有報(bào)道。隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人們?cè)絹?lái)越關(guān)注肉類膳食的營(yíng)養(yǎng)和保健作用，國(guó)民的肉食結(jié)構(gòu)重心逐漸向味美、質(zhì)優(yōu)、滋補(bǔ)的羊肉轉(zhuǎn)移。為完善我國(guó)的食品安全建設(shè)，更好的保障人民的生命健康，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了羊肌肉組織中安乃近4 個(gè)代謝物——MAA、AA、FAA、AAA殘留的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定方法研究。

近年來(lái)，親水液相色譜（hydrophilic interaction liquid chromatography，HILIC）技術(shù)作為反相柱的補(bǔ)充，被越來(lái)越多的應(yīng)用于極性和親水性化合物的分離，該類型的柱子能夠?yàn)闃O性化合物提供良好的保留，從而有效的提高質(zhì)譜檢測(cè)器的靈敏度[19]。因此本實(shí)驗(yàn)嘗試采用Waters Atlantis HILIC色譜柱對(duì)待測(cè)物質(zhì)進(jìn)行分離，并達(dá)到了很好的定量效果。該方法快速、穩(wěn)定，靈敏度高，回收率和精密度等各項(xiàng)指標(biāo)均符合殘留分析要求。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

羊肉 市購(gòu)；MAA、AA、FAA、AAA和4-異丙氨基安替比林標(biāo)準(zhǔn)品（純度＞99%） 德國(guó)Witega公司；甲醇、乙腈（色譜純） 美國(guó)Thermo Fisher公司；N-丙基乙二胺（primary secondary amine，PSA） 北京Agela Technology公司；Waters OASISTMMAX-MCX固相萃取柱（solid phase extraction cartridge，SPE）（30 mg/cm3）美國(guó)Waters公司；其余試劑均為分析純 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司。

1.2 儀器與設(shè)備

2695液相色譜儀（配有Atlantis HILIC 色譜柱）美國(guó)Waters公司；Quattro Micromass MS-MS（配有電噴霧離子源） 英國(guó)Waters公司；電子天平 意大利梅特勒-托利多公司；氮吹儀 美國(guó)Organomation公司；渦旋混合器 美國(guó)Scientific Industris公司；高速勻漿機(jī)美國(guó)Waring公司。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取5.0 mg的各種安乃近代謝物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用甲醇定容至10 mL棕色容量瓶中，配制成質(zhì)量濃度為500 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，避光-20 ℃保存。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液的配制

準(zhǔn)確量取一定量的MAA、AA、FAA和AAA標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用甲醇定容于10 mL棕色容量瓶中，配制成MAA、FAA和AAA質(zhì)量濃度為0.08、0.1、0.4、1、2、4 μg/mL；AA質(zhì)量濃度為0.8、1、4、10、20、40 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液。

1.3.3 色譜條件

Atlantis HILIC Silica HPLC色譜柱（2.1 mm×100 mm，3 μm）；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量10 μL；流動(dòng)相為梯度洗脫流動(dòng)相，條件如表1所示。

表1 液相分離梯度洗脫條件Table1 Mobile phase composition for gradient elution

1.3.4 質(zhì)譜條件

電噴霧正離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；毛細(xì)管電壓3.2 kV；碰撞氣：氬氣；霧化氣：氮?dú)?；霧化氣流速400 L/h；霧化氣溫度300 ℃；離子源溫度120 ℃。各組分的定性離子對(duì)、定量離子對(duì)、采集時(shí)間、碰撞能量和錐孔電壓見(jiàn)表2。

表2 安乃近殘留代謝物的保留時(shí)間和質(zhì)譜條件Table2 Retention times of dipyrone metabolites and MS-MS condition

1.3.5 樣品前處理

稱取（2.00±0.01）g肌肉組織，置于50 mL具塞玻璃離心管中，加入10 mL乙腈，500 μL氨水，1 g氯化鈉，5 g無(wú)水硫酸鈉，渦旋混合30 s，超聲提取10 min，4 000 r/min離心10 min，將上層提取液轉(zhuǎn)移至另一50 mL具塞玻璃離心管中，加入200 mg PSA，渦旋混勻10 s，4 000 r/min離心10 min，轉(zhuǎn)移提取液至15 mL試管中，60 ℃恒溫水浴氮?dú)獯蹈桑瑥?fù)溶至2 mL乙腈中。上MAX固相萃取柱（預(yù)先將MAX固相萃取柱用2 mL甲醇活化），2 mL乙腈洗滌，收集合并濾液，60 ℃恒溫水浴氮?dú)獯蹈?，?.0 mL V（0.1%甲酸＋1 g/L甲酸銨溶液）：V（乙腈）=5：95溶液定容，0.22 μm針式濾膜過(guò)濾，10 μL進(jìn)樣供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品提取條件的優(yōu)化

采用乙腈＋氨水、乙酸乙酯＋氨水、乙腈＋甲酸等溶液對(duì)組織中的4 種安乃近代謝物進(jìn)行提取，結(jié)果表明，采用乙腈+氨水一組提取時(shí)，效果明顯好于其他兩組。而且提取次數(shù)的增加并不會(huì)引起明顯的提取率升高，因此只用乙腈＋氨水一組提取一次，簡(jiǎn)化前處理方法。此外，組織中的水分被無(wú)水硫酸鈉吸收，氯化鈉的加入增強(qiáng)了無(wú)水硫酸鈉的吸水效果，減少了氮?dú)獯蹈蓵r(shí)間。

2.2 樣品凈化條件的優(yōu)化

考慮到Cleanert PSA填料可以有效的去除有機(jī)酸、色素等，對(duì)提取液起到一定的凈化作用。本實(shí)驗(yàn)也比較了加入200 mg Cleanert PSA與否對(duì)凈化的影響。結(jié)果表明，加入200 mg Cleanert PSA 一組4 種待測(cè)物的信號(hào)強(qiáng)度明顯強(qiáng)于未加組。

由于固相萃取小柱具有良好的凈化效果，本實(shí)驗(yàn)選用固相萃取法對(duì)提取液進(jìn)行凈化。WatersOasis MCX和MAX SPE柱均屬于混合型（離子交換和反相吸附）固相萃取柱，前者采用陽(yáng)離子交換反相吸附劑，對(duì)堿性化合物有高的選擇性；后者采用陰離子交換反相吸附劑，對(duì)酸性化合物有強(qiáng)的吸附性?？紤]到4 種待測(cè)物均屬于堿性化合物，可以通過(guò)MCX SPE柱吸附堿性藥物，再洗脫；通過(guò)MAX SPE柱吸附酸性和中性雜質(zhì)，兩種方法達(dá)到凈化目的。因此，本實(shí)驗(yàn)比較了MAX、MCX固相萃取柱的富集和凈化效果。過(guò)柱的過(guò)程分別為：MAX柱一組經(jīng)甲醇活化后直接上樣穿透，并用2 mL乙腈清洗；MCX組則按照說(shuō)明書(shū)操作規(guī)程進(jìn)行操作：將MCX柱用2 mL甲醇活化，2 mL體積分?jǐn)?shù)為2%甲酸水平衡后，上樣，用2 mL乙腈洗滌，最后用2 mL體積分?jǐn)?shù)為5%氨水乙腈溶液洗脫，收集最后的洗脫液。結(jié)果表明各待測(cè)物過(guò)柱后的回收率均比較理想，殘留標(biāo)示物MAA經(jīng)MAX柱凈化后信號(hào)強(qiáng)度稍高于MCX組。考慮到采用MAX柱相比MCX柱可以減少平衡、清洗、洗脫等步驟，有效的節(jié)省了材料和前處理時(shí)間。故本實(shí)驗(yàn)采用Waters OASIS MAX柱對(duì)樣品進(jìn)行凈化。

2.3 LC-MS-MS 條件優(yōu)化

本實(shí)驗(yàn)以AA、FAA、MAA和AAA標(biāo)準(zhǔn)溶液在正離子模式下進(jìn)行母離子掃描，確定AA、FAA、MAA和AAA的分子離子分別為：m/z 204、232、218和246，然后分別以這些離子作為母離子對(duì)其子離子進(jìn)行掃描。分別選擇各物質(zhì)豐度最強(qiáng)的兩個(gè)子離子作為監(jiān)測(cè)離子，優(yōu)化錐孔電壓、碰撞能量、脫溶劑溫度和離子源溫度等質(zhì)譜條件。

本實(shí)驗(yàn)比較了Waters X-terra C18色譜柱和Waters Atlantis HILIC色譜柱對(duì)待測(cè)物質(zhì)地分離效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HILIC柱對(duì)待測(cè)物質(zhì)有較好地分離效果，且同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，經(jīng)兩種色譜柱分離后，HILIC色譜柱組各待測(cè)物質(zhì)信號(hào)強(qiáng)度遠(yuǎn)高于C18柱組。故本實(shí)驗(yàn)采用Waters Atlantis HILIC色譜柱對(duì)樣品進(jìn)行分離。

采用正離子模式進(jìn)行質(zhì)譜監(jiān)測(cè)時(shí)，在流動(dòng)相中加入一定的酸度可以使待測(cè)物容易質(zhì)子化而帶上正電荷。為了增強(qiáng)待測(cè)物在HILIC色譜柱上的保留，改善峰形，通常在流動(dòng)相中加入緩沖鹽（如甲酸銨、乙酸銨等）。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)優(yōu)化液相分離條件，發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相選擇（1 g/L甲酸銨＋0.1%甲酸）溶液-乙腈，采用梯度洗脫程序進(jìn)行分離，各待測(cè)物質(zhì)得到了較好地分離，且在質(zhì)譜上有較強(qiáng)的響應(yīng)。

2.4 定量方法的選擇

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)參考沈金燦等[12]的定量方法，采用MAA的結(jié)構(gòu)類似物4-異丙氨基安替比林作為內(nèi)標(biāo)對(duì)待測(cè)物進(jìn)行定量時(shí)，在本實(shí)驗(yàn)的條件下，4-異丙氨基安替比林始終對(duì)AA的出峰有干擾，并影響AA的定量。因此，本實(shí)驗(yàn)嘗試外標(biāo)法作為定量方法，結(jié)果如表3所示，4 種待測(cè)物均得到較好的定量效果。

2.5 專屬性

分別按照1.3.5節(jié)前處理方法對(duì)空白羊肌肉組織和空白添加標(biāo)樣的樣品提取制備后進(jìn)行測(cè)定，由圖2可知，在4 種待測(cè)物質(zhì)的保留時(shí)間區(qū)域內(nèi)均沒(méi)有明顯的干擾物質(zhì)出現(xiàn)，該結(jié)果表明本方法的專屬性良好。

圖2 空白樣品和加標(biāo)樣品的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)色譜圖Fig.2 MRM chromatograms of blank goat muscle and spiked blank goat muscle

2.6 線性關(guān)系和定量限

為了消除基質(zhì)效應(yīng)對(duì)定量結(jié)果的影響，本實(shí)驗(yàn)選擇了空白添加標(biāo)準(zhǔn)曲線作為線性校正曲線。將各濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液100 μL分別加入2 g空白勻漿羊肌肉組織中，配制成含量為AA：40、50、200、500、1 000、2 000 μg/kg；FAA、MAA、FAA：4、5、20、50、100、200 μg/kg的羊組織樣品，按1.3.5節(jié)提取測(cè)定。以峰面積為縱坐標(biāo)，相應(yīng)肌肉組織中各物質(zhì)的添加量為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果顯示4 種待測(cè)物質(zhì)濃度與其對(duì)應(yīng)的峰面積值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（表3）。以3倍信噪比條件下確定檢測(cè)限，10倍信噪比條件下確定定量限。得出MAA、FAA和AAA在肌肉組織中的檢測(cè)限為0.5 μg/kg，定量限為1 μg/kg；AA在肌肉組織中的檢測(cè)限為5 μg/kg，定量限為10 μg/kg。圖2為空白羊肌肉組織和添加1 μg/kg的MAA、FAA和AAA，10 μg/kg的AA時(shí)得到的各待測(cè)物定量離子對(duì)的色譜圖。

表3 4 種待測(cè)物的線性關(guān)系Table3 Calibration curve or four analytes

2.7 準(zhǔn)確度和精密度

表4 羊肌肉組織中安乃近4 種代謝物的回收率和批內(nèi)批間精密度Table4 Recoveries and precision (RSD) of dipyrone metabolites in goat muscle

本檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度采用相對(duì)回收率來(lái)評(píng)價(jià)。取空白羊肌肉組織2.00 g，選擇4 種代謝物3 個(gè)不同的添加量（AA為50、500、1 000 μg/kg，MAA、FAA、AAA為5、50、100 μg/kg），每個(gè)添加量5個(gè)重復(fù)，添加到空白組織中按照1.3.5節(jié)樣品前處理方法處理后進(jìn)行檢測(cè)。樣品的相對(duì)回收率按2.6節(jié)方法制備的基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量。

本方法的精密度包括日內(nèi)精密度和日間精密度，都采用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差來(lái)評(píng)價(jià)。選擇4 種代謝物3 個(gè)不同的添加量（AA為50、500、1 000 μg/kg，MAA、FAA、AAA為5、50、100 μg/kg），每個(gè)添加量5 個(gè)重復(fù)，連續(xù)測(cè)定3 d，并用當(dāng)天的空白基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)計(jì)算得到實(shí)測(cè)值，再分別計(jì)算日內(nèi)精密度和日間精密度。

準(zhǔn)確度和精密度的結(jié)果見(jiàn)表4。結(jié)果顯示，添加5 μg/kg實(shí)驗(yàn)，待測(cè)物的回收率在75.44%～116.16%之間；添加50 μg/kg實(shí)驗(yàn)，回收率在75.02%～107.35%之間，添加500、1 000 μg/kg實(shí)驗(yàn)，回收率在95.38%～110.04%之間。4 種待測(cè)物在5、50、100 μg/kg添加實(shí)驗(yàn)，日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差≤16%，日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差≤16%；添加500、1 000 μg/kg實(shí)驗(yàn)，日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差≤11%，日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差≤10%。本方法的準(zhǔn)確度和精密度完全符合國(guó)內(nèi)外相關(guān)法律法規(guī)的要求。

3 3 結(jié) 論

該實(shí)驗(yàn)成功建立了羊肌肉組織中安乃近的4 種主要代謝物的HPLC-MS-MS檢測(cè)方法。用HILIC色譜柱分離，有效的提高了質(zhì)譜的靈敏度。對(duì)比Piotr[16]和Lisa[17]等報(bào)道的方法，本研究具有較低的檢測(cè)限，與沈金燦等[11]報(bào)道的研究相比，本方法在具有相近靈敏度的前提下，極大的簡(jiǎn)化了前處理過(guò)程，實(shí)現(xiàn)了一個(gè)工作日內(nèi)對(duì)大批量樣品的檢測(cè)。方法的回收率和精密度均符合SN/T 0005—1996《出口商品中農(nóng)藥、獸藥殘留量及生物毒素檢驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)的基本規(guī)定》[20]。方法的定量限低，重復(fù)性好，前處理方法經(jīng)濟(jì)、高效，可用于大批量實(shí)際樣品的殘留檢測(cè)。

[1] LEVY M, ZYLBER K E, ROSENKRANZ B. Clinical pharmacokinetics of dipyrone and its metabolites[J]. Clin Phormocokinet, 1995, 28(3): 216-234.

[2] TOBIAS R, CHRISTIAN S, AGNES P, et al. Novel bioactive metabolites of dipyrone (metamizol)[J]. Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2012, 20(1): 101-107.

[3] SABBAGA J, OSAWA C, PAUL F H. Acute agranulocytosis after prolonged high-dose usage of intravenous dipyrone-adifferent mechanism of dipyrone toxicity[J]. Annals of Hematology, 1993, 66(3): 153-155.

[4] MARIA J G, CARLA S, MILAGROS M, et al. Photodegradation study of three dipyrone metabolites in various water systems: Identification and toxicity of their photodegradation products[J]. Water Research, 2008, 42(10): 2698-2706.

[5] SALMERON G A, NAVAS N, MARTIN A, et al. Determination of tramadol, metamizole, ropivacaine, and bupivacaine in analgesic mixture samples by HPLC with DAD detection[J]. Journal of Chromatographic Science, 2009, 47(3): 231-237.

[6] BENSENOR I M. To use or not to use dipyrone? Or maybe, central station versus ER? That is the question[J]. Sao Paulo Medical Journal, 2001, 119(6): 190-191.

[7] 農(nóng)業(yè)部. 公告第235號(hào)文件 動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量[S]. 2002.

[8] European Agency for the Evaluation of Medicinal Products. EMEA/ MRL/878/03-FINAL, Metamizole summary report[R]. European: The European Agency for the Evaluation of Medicinal Products, 2003.

[9] 沈金燦, 肖陳貴, 謝麗琪, 等. 牛奶中4 種安乃近代謝物的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析[J]. 食品科學(xué), 2010, 31(4): 161-165.

[10] 張?bào)P, 孫雷, 劉琪, 等. 豬肉中氨基比林、安替比林和安乃近代謝物殘留檢測(cè)超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法研究[C]//中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物藥品學(xué)分會(huì)第四屆全國(guó)會(huì)員代表會(huì)員大會(huì)暨2011學(xué)術(shù)年會(huì)論文集. 石家莊: 中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物藥品學(xué)分會(huì), 2011: 283-291.

[11] 沈金燦, 龐國(guó)芳, 謝麗琪, 等. 牛和豬肌肉組織中安乃近代謝物殘留的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析[J]. 分析化學(xué), 2007, 35(11): 1565-1569.

[12] 沈金燦, 龐國(guó)芳, 謝麗琪, 等. 高效液相色譜法分析牛和豬肌肉組織中殘留的安乃近藥物的三種代謝物[J]. 色譜, 2007, 25(6): 844-847.

[13] 崔景斌, 奚念朱, 蔣新國(guó). 安乃近代謝物4-甲氨基安替比林的HPLC測(cè)定及其鼻腔滴劑在人體的相對(duì)生物利用度[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào), 1997, 32 (1): 65-68.

[14] 梁選革, 張春燕. HPLC測(cè)定安乃近片中的安乃近和4-N-去甲安乃近[J].華西藥學(xué)雜志, 2008, 23(2): 211-213.

[15] 劉燕, 張宏祥. 差示分光光度法測(cè)定安乃近片的含量[J]. 中國(guó)藥房, 2012, 23(5): 450-451.

[16] PIOTR J, TERESA S J, MALGORZATA O, et al. Determination of non-steroidal anti-inflammatory drugs residues in animal muscles by liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Analytica Chimica Acta, 2010, 672(1): 85-92.

[17] LISA P, CARALEE B, BERGERON C, et al. Simultaneous determination of residues of dipyrone and its major metabolites in milk, bovinemuscle , and porcine muscle by liquid chromatographymass spectrometry[J]. Journal of AOAC International, 2005, 88(2): 496-504.

[18] ERDAL D, FEYYAZ O. Application of a new spectrophotometric method for the analysis of a ternary mixture containing metamizol, paracetamol and caffeine in tablets[J]. Analytica Chimica Acta, 1998, 359(1): 93-106.

[19] 羅浩師. 動(dòng)物性食品中甲氧芐啶和二甲氧芐啶殘留量的測(cè)定[D]. 北京: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院, 2013.

[20] 中華人民共和國(guó)國(guó)家進(jìn)出口商品檢驗(yàn)局. SN/T 0005—1996 出口商品中農(nóng)藥、獸藥殘留量及生物毒素檢驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)的基本規(guī)定[S]. 北京: 中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社, 1996.

Simultaneous Determination of Residues of Four Dipyrone Metabolites in Go at Muscle by Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography-Mass Spectrometry

ZHANG Chong1,2, XUE Fei-qun2, ZHANG Li-fang2, ZHANG Xiao-xiao2, WANG Xiao-yang2, JIANG Shan-xiang1,*
(1. Laboratory of Veterinary Pharmacology and Toxicology, College of Veterinary Medicine, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China; 2. Key Laboratory of Veterinary Drug Safety Evaluation and Residue Research, Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 200241, China)

A hydrophilic interaction liquid chromatography-mass spectrometry (HILIC-MS) method was developed for the determination of four dipyrone metabolites, namely 4-methylaminoantipyrine (MAA), 4-aminoantipyrine (AA), 4-formylaminoantipyrine (FAA), and 4-acetylaminoantipyrine (AAA) in goat muscle. These metabolites were extracted with acetonitrile mixed with 5% ammonia. The extracts were cleaned up with Cleaner PSA, and then blow-dried by nitrogen gas, re-dissolved in acetonitrile and re-cleaned up using MAX (SPE) cartridge. After chromatographic separation, the analytes were quantifi ed by the external standard method. The calibration curves were linear between 4 and 200 μg/kg matrix equivalent concentrations for MAA, FAA, and AAA, and between 40 and 2 000 μg/kg for AA. The mean recoveries in blank samples at four spike levels (5, 50, 100, and 1 000 μg/kg) ranged between 75.02% and 116.2%. The intra-day coeffi cient of variation (CV) was 1.63% to 15.12% (n = 5), and the inter-day CV was less than 11% (n = 15). The detection limits were 0.5 μg/kg for MAA, FAA and AAA and 5 μg/kg for AA. The proposed method is sensitiv e and repeatable, allowing analysis of a large number of samples in a working day.

goat muscle; dipyrone metabolites; hydrophilic interaction liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry

S859.84

A

1002-6630（2014）10-0158-05

10.7506/spkx1002-6630-201410029

2013-09-16

2013年農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè) 行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)制修訂項(xiàng)目（2013-550）

張崇（1987—），男，碩士，研究方向?yàn)榛A(chǔ)獸醫(yī)學(xué)。E-mail：CQ1301@126.com

*通信作者：江善祥（1966—），男，教授，博士，研究方向?yàn)樾芦F藥及制劑。E-mail：nauvy@sina.com