劉煥蘭,武夏林,曲衛(wèi)玲,聞 哲

(廣州中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,廣東廣州510006)

衰老是生命發(fā)展過(guò)程中的必然規(guī)律,是一個(gè)全身性的、緩慢的、漸進(jìn)的、十分復(fù)雜的退化過(guò)程。衰老雖不可避免,但延緩衰老卻是可能的。楊麗華等[1]認(rèn)為氣虛及津液不足會(huì)對(duì)人體的臟腑功能、氣血運(yùn)行和陰陽(yáng)平衡產(chǎn)生一定影響,對(duì)衰老的發(fā)生發(fā)展有密切的關(guān)系。瓊玉膏是益氣養(yǎng)陰的古代經(jīng)典名方,由于配伍組成獨(dú)特,決定了其在抗衰老及對(duì)老年性疾病的保健治療作用。本文擬以瓊玉膏組成為基礎(chǔ)制成瓊玉口服液,研究分析其對(duì)衰老小鼠腦組織SOD活性及血清中SOD、MDA含量的影響,以確定其是否有抗衰老作用,從而為臨床選用抗衰老藥物提供科學(xué)數(shù)據(jù)及參考。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物 昆明種小鼠72只,雌雄各半,體質(zhì)量18～22 g,由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 藥物與試劑 瓊玉口服液由廣州中醫(yī)藥大學(xué)養(yǎng)生教研室提供;六味地黃丸,北京同仁集團(tuán)。D-半乳糖,由廣州科因公司提供;SOD(超氧化物歧化酶試劑盒)、MDA(丙二醛)試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。

1.3 儀器與設(shè)備 WFZ-UV2000紫外可見分光光度計(jì),離心機(jī),水浴鍋,移液槍,電子天平均由廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥藥理實(shí)驗(yàn)室提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物分組與造模 取昆明種小鼠72只,雌雄各半,體質(zhì)量 18～22 g。共分6組:空白組、衰老模型組、陽(yáng)性對(duì)照組及瓊玉口服液高、中、低劑量組,每組14只,其中除空白組外其余各組每天頸背部皮下注射5%D-半乳糖0.005 g/10 g體質(zhì)量,連續(xù)造模6周,建立小鼠衰老模型,空白組注射等量的生理鹽水。從實(shí)驗(yàn)第1天起模型組和空白組每天灌胃給予蒸餾水0.2 mL/10 g體質(zhì)量,陽(yáng)性對(duì)照組灌胃給予六味地黃丸0.15 g/10 g體質(zhì)量,其余3組受試藥物組分別按高中低(0.1 mL/10 g體質(zhì)量,0.05 mL/10 g體質(zhì)量,0.025 mL/10 g體質(zhì)量)3個(gè)劑量給予瓊玉口服液,各組均按0.2 mL/10 g體質(zhì)量給藥,連續(xù)給藥6周。

2.2 樣本處理和指標(biāo)測(cè)定 1)血樣:小鼠眼眶取血,3 500 r/min離心5 min,取上層血清,測(cè)血清中SOD、MDA含量,測(cè)定方法嚴(yán)格按照試劑盒所附方法步驟進(jìn)行。2)大腦SOD測(cè)定:取大腦稱重,按1∶9(W/V)加入冰生理鹽水,低溫(4℃)勻漿,3 500 r/min離心取上清液,測(cè)定方法嚴(yán)格按照試劑盒所附方法步驟進(jìn)行。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS軟件16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,各指標(biāo)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,組間樣本均數(shù)比較采用方差分析和t檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1 小鼠腦組織SOD活性的測(cè)定 見表1。統(tǒng)計(jì)處理表明,與空白對(duì)照組比較,模型對(duì)照組小鼠腦組織SOD活性明顯降低(P<0.01);與模型對(duì)照組相比較,瓊玉口服液低劑量組小鼠腦組織SOD活性變化不明顯,瓊玉口服液高劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組含量增加(P<0.05),瓊玉口服液中劑量組小鼠腦組織SOD活性顯著增加(P<0.01)。

表1 瓊玉口服液對(duì)腦組織SOD活性(±s)

表1 瓊玉口服液對(duì)腦組織SOD活性(±s)

注:與空白對(duì)照組比較,##P<0.01;與模型對(duì)照組比較,#P<0.05,##P<0.01。

組別 n 腦SOD活性(u/mL)空白對(duì)照組 12 67.85±9.70##模型對(duì)照組 12 51.75±4.27##低劑量組 12 54.25±2.12中劑量組 12 60.17±4.03##高劑量組 12 59.64±8.39#陽(yáng)性對(duì)照組 12 60.01±9.09#

3.2 對(duì)衰老小鼠血清SOD、MDA含量的影響 見表2。從表2中可以看出,空白組和模型組比較各指標(biāo)均有顯著性差異(P<0.01),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。瓊玉口服液中、高劑量組跟模型組比較,前兩組血清中SOD的含量明顯大于模型組,有顯著性差異(P<0.01或者P<0.05),MDA的含量明顯小于模型組,有顯著性差異(P<0.01或者 P<0.05),均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。瓊玉口服液低劑量組跟模型組比較除了血清中SOD的含量明顯增加有顯著性差異(P<0.05)外,其它指標(biāo)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與陽(yáng)性組和模型組比較,各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2 小鼠血清SOD、MDA含量的影響(±s)

表2 小鼠血清SOD、MDA含量的影響(±s)

注:與模型對(duì)照組比較,#P<0.05,##P<0.01;與空白對(duì)照組比較,##P<0.01。

組別 n 血清SOD活力/(u/mL)血清MDA活力/(nmol/mL模型組 12 12.02±1.21## 36.944±12.760##空白組 12 13.60±0.52## 23.419±7.493##瓊低組 12 13.27±0.93# 29.701±7.284瓊中組 12 13.75±0.66## 24.461±10.169#瓊高組 12 13.17±1.80# 25.889±7.033#陽(yáng)性組 12 13.05±1.37 29.893±9.240)

4 討論

衰老是指生物體在正常環(huán)境條件下發(fā)生的機(jī)能減退,逐漸趨向死亡的現(xiàn)象,是機(jī)體在成年以后隨著年齡的增長(zhǎng)而逐漸產(chǎn)生的一系列生理功能和形態(tài)結(jié)構(gòu)方面的變化。眾所周知,由于衰老原因紛繁復(fù)雜,但眾多的學(xué)說(shuō)之中,最為中外學(xué)者所認(rèn)同的是自由基學(xué)說(shuō)。正常情況下,體內(nèi)存在的氧化防御系統(tǒng)包括SOD等,對(duì)抗氧化應(yīng)激反應(yīng),清除機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生的自由基,從而起到抗衰老的作用[2]。因此,在研究中藥抗衰老的實(shí)驗(yàn)中,測(cè)定自由基的代謝水平有重大意義。瓊玉膏又名“神仙瓊玉膏”,是益氣養(yǎng)陰的古代經(jīng)典名方,按宋·洪遵《洪氏集驗(yàn)方》卷一引申鐵翁方,由生地黃、茯苓、人參、蜂蜜組成。從古代醫(yī)籍對(duì)瓊玉膏的相關(guān)記載及現(xiàn)代研究來(lái)看,此方是集治療、保健于一身的古代良方,在延緩衰老方面有重要作用。

4.1 瓊玉口服液抗氧化作用評(píng)價(jià) SOD是體內(nèi)一種清除氧自由基的酶,對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡起著重要作用,是機(jī)體抗自由基損傷的重要防御機(jī)制[3];SOD通過(guò)催化超氧陰離子歧化為H2O2和O2,從而達(dá)到清除自由基,抗衰老的作用[4],其活性隨著年齡增長(zhǎng)而減弱,是評(píng)價(jià)衰老的重要指標(biāo)之一。

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看出,瓊玉口服液能抑制衰老小鼠血清SOD及腦組織中SOD的活性,從而提高機(jī)體抗氧化物質(zhì)的活性起到抗衰老作用。與模型組相比,中劑量效果顯著,并優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照組。在與中、高劑量對(duì)比中,中劑量的數(shù)據(jù)在趨勢(shì)上呈現(xiàn)出明顯優(yōu)勢(shì),因中劑量小鼠血清中SOD的含量在6個(gè)組中最高,和模型組比較含量增加顯著(P<0.01),故可以初步判斷中劑量效果最佳。

4.2 瓊玉口服液清除代謝產(chǎn)物能力評(píng)價(jià) MDA是體內(nèi)脂褐素形成的中間產(chǎn)物,隨著年齡的增長(zhǎng)而升高,它能間接反映機(jī)體內(nèi)的脂質(zhì)過(guò)氧化水平[5],反映機(jī)體內(nèi)自由基的產(chǎn)生情況和機(jī)體組織細(xì)胞的脂質(zhì)過(guò)氧化程度。在老年色素類生物垃圾以及與衰老相關(guān)的蓄積產(chǎn)物的形成過(guò)程中起著核心作用。研究表明,在患病及衰老的動(dòng)物和人體內(nèi),脂質(zhì)過(guò)氧化物質(zhì)(其中約85%為丙二醛)明顯升高[6]。因此,一般認(rèn)為,MDA可以作為評(píng)價(jià)衰老的指標(biāo)之一[7]。

本實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行該指標(biāo)測(cè)定,能反映出給藥后是否有改善機(jī)體抗脂質(zhì)過(guò)氧化能力及減少小鼠體內(nèi)自由基的生成,從而證明其抗衰老作用。瓊玉口服液對(duì)血清MDA的影響表明,瓊玉口服液中、高劑量可以減少機(jī)體自由基的生成,從而減少自由基對(duì)身體的傷害,達(dá)到延緩衰老的目的。同時(shí),血清MDA含量在中劑量組均出現(xiàn)了最低趨勢(shì),進(jìn)一步證明了中劑量在各組中的優(yōu)勢(shì)。

綜上所述,瓊玉口服液在增加小鼠體內(nèi)抗氧化物質(zhì)含量、減少小鼠體內(nèi)自由基生成方面有一定作用,能夠起到延緩衰老的功效。然而中藥成分復(fù)雜多樣,復(fù)方更是如此,對(duì)人體疾病的調(diào)節(jié)是多種成分綜合作用的結(jié)果,其作用機(jī)制還需進(jìn)一步深入研究。

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