李 碩，梅晶晶

(皖南醫(yī)學(xué)院附屬弋磯山醫(yī)院 1.婦產(chǎn)科;2.病理科，安徽 蕪湖 241001)

宮頸癌早期就可發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是評(píng)估預(yù)后的一個(gè)獨(dú)立因素，是決定術(shù)后是否放化療的指標(biāo)之一，但對(duì)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的術(shù)前評(píng)估，目前還沒有特別有效的方法。近年來研究表明，COX-2除在炎癥反應(yīng)中起重要作用外，尚與腫瘤密切相關(guān)，它可通過刺激腫瘤細(xì)胞增殖和生長、抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)腫瘤血管形成、增加細(xì)胞侵襲力、抑制機(jī)體免疫功能、促進(jìn)癌前病變向腫瘤轉(zhuǎn)化等腫瘤的形成［1］，因此在許多腫瘤組織呈COX-2高表達(dá)［2］。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)測定宮頸癌組織標(biāo)本中COX-2蛋白表達(dá)水平，探討其在宮頸癌中的表達(dá)規(guī)律，評(píng)價(jià)COX-2基因是否能成為宮頸癌術(shù)前預(yù)測盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后評(píng)估的一個(gè)指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 病例選擇 均選自2009年1月～2010年12月在皖南醫(yī)學(xué)院附屬弋磯山醫(yī)院婦產(chǎn)科經(jīng)術(shù)前活檢和(或)術(shù)后石蠟切片病理證實(shí)的宮頸癌患者組織標(biāo)本。所有患者取標(biāo)本前均未接受化療或放療，既往無其他惡性腫瘤史。正常宮頸標(biāo)本均取自于該院同期因子宮肌瘤行子宮全切的正常宮頸組織(經(jīng)術(shù)后病理證實(shí))。

1.2 一般資料 患者年齡32～70歲。正常宮頸標(biāo)本20例，宮頸鱗癌標(biāo)本55例(其中10例宮頸標(biāo)本為宮頸活檢標(biāo)本)。病理分級(jí):G1(高分化)19例、G2(中分化)21例、G3(低分化)15例。按FIGO臨床分期，Ⅰ期20例，Ⅱ期27例，Ⅲ期8例。

1.3 標(biāo)本處理 避開壞死組織，盡量在宮頸的轉(zhuǎn)化區(qū)取新鮮組織1份，生理鹽水沖洗血跡后，浸入10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚度連續(xù)切片，用于免疫組化染色。

1.4 試劑和檢測方法 濃縮型兔抗人多克隆COX-2抗體購自博士德生物有限公司，DAB顯色，蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，按SABC法試劑盒說明操作。用PBS液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.5 結(jié)果判定 采用兩人雙盲法觀察切片，用半定量積分方法判斷結(jié)果。COX-2蛋白陽性定位于細(xì)胞漿(見圖1、2)，為棕黃色顆粒，陽性細(xì)胞≤5%為0分，6% ～25% 為 1分(+)，26% ～50% 為 2分()，50%以上為3分()。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較用 χ2檢驗(yàn)，P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 COX-2表達(dá)的分布及強(qiáng)度 55例癌組織中，COX-2蛋白陽性28例，陽性率為50.9%，其中(+)5例，()13例，)10例，對(duì)照組宮頸組織中未見COX-2陽性表達(dá)。

2.2 COX-2基因的表達(dá)與腫瘤病理分級(jí)的關(guān)系COX-2與腫瘤的分級(jí)有著密切的關(guān)系，在病理分級(jí)Ⅰ和Ⅱ級(jí)的陽性表達(dá)率分別為26.3%和47.6%，在Ⅲ級(jí)中其陽性表達(dá)率為86.7%。趨勢χ2=11.739，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明腫瘤病理分級(jí)越高，細(xì)胞分化程度越低，COX-2表達(dá)的陽性率越高，見表1。

表1 表達(dá)COX-2與腫瘤分級(jí)之間的關(guān)系Tab 1 COX-2 expression and grading of the carcinoma

2.3 COX-2基因與子宮頸癌臨床分期和腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系 見表2。

表2 COX-2表達(dá)與子宮頸癌臨床分期和腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系Tab 2 COX-2 expression and clinical stage of cervical carcinoma

2.4 COX-2基因與子宮頸癌腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系 見表3。

表3 COX-2基因與子宮頸癌腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系Tab 3 COX-2 expression and local lymph node metastasis in cervix carcinoma

3 討論

子宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤，過早性生活、性生活紊亂、HPV感染等因素導(dǎo)致宮頸癌發(fā)病逐漸趨于年輕化，且發(fā)病率有逐年上升的趨勢，嚴(yán)重威脅著廣大婦女的健康及生命。如何早期將具有潛在轉(zhuǎn)移危險(xiǎn)的患者篩選出來，給予積極治療，是目前急需解決的問題之一。

圖1 Ⅱ期宮頸癌組織中COX-2蛋白的表達(dá)(SABC×400)Fig 1 Clinical stageⅡ:The expression of COX-2 protein in cervical cancer tissues(SABC×400)

圖2 Ⅲ期宮頸癌組織中COX-2蛋白的表達(dá)(SABC×400)Fig 2 Clinical stageⅢ:The expression of COX-2 protein in cervical cancer tissues(SABC×400)

環(huán)氧化酶(cyclooxy-genase，COX)又稱前列腺素內(nèi)過氧化物酶，是前列腺素合成過程中一個(gè)主要的限速酶。COX是膜結(jié)合蛋白，存在于核膜和微粒體膜，它有兩種同工酶，即結(jié)構(gòu)型 COX-1和誘生型COX-2［3］。COX-2 基因長 8.3 kb，位于染色體 1q 25.2～25.3，其編碼604個(gè)氨基酸。在正常生理狀態(tài)下，絕大多數(shù)正常組織中檢測不到COX-2表達(dá)，它是一種誘導(dǎo)性即刻反應(yīng)基因，只有當(dāng)細(xì)胞受到刺激才能迅速誘導(dǎo)表達(dá)COX-2［4］。己有多種研究表明，COX-2的過高表達(dá)與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。在多種腫瘤和細(xì)胞系中均發(fā)現(xiàn)了COX-2表達(dá)升高。由于COX-2高表達(dá)在癌前病變、原位癌時(shí)即已存在，且與正常組織相比，其表達(dá)有顯著差異，所以一般認(rèn)為COX-2高表達(dá)是癌癥發(fā)生的早期事件，這也為COX-2抑制劑化學(xué)預(yù)防腫瘤提供了理論依據(jù)［5］。國內(nèi)外研究表明，COX-2抑制劑有預(yù)防卵巢癌的發(fā)生、抑制卵巢癌細(xì)胞生長的作用［6］。

本研究顯示:宮頸癌中COX-2表達(dá)的陽性率為50.9%，而G3期子宮頸癌中COX-2蛋白的陽性表達(dá)率為86.7%，高于 G1、G2的 47.6%和 86.7%。在臨床分期病變中，Ⅰ～Ⅱ期的COX-2的陽性率為42.6%，Ⅲ期為100%;無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的COX-2蛋白的陽性率為38.6%，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的COX-2蛋白的陽性率為100%。以上每兩組比較差異均有顯著性(P＜0.05)。因此表明隨著子宮頸癌癌細(xì)胞分化程度降低、臨床分期增高和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，COX-2蛋白的陽性率愈來愈高，說明COX-2與子宮頸癌的生物學(xué)行為關(guān)系密切，可能是子宮頸癌預(yù)后的標(biāo)記物之一。

近年研究表明，誘生型COX-2在多種惡性腫瘤中高表達(dá)，可促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制腫瘤細(xì)胞凋亡、促進(jìn)腫瘤新生血管形成、抑制機(jī)體免疫反應(yīng)、增加轉(zhuǎn)移潛能、抑制DNA修復(fù)，也可能是聯(lián)系炎癥與癌變的重要因素之一［7－8］。就 COX-2基因而言，在各種致癌刺激物作用下，由相對(duì)靜止?fàn)顟B(tài)轉(zhuǎn)到激活狀態(tài)，直到產(chǎn)生過量的基因產(chǎn)物，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，在這一過程中，除轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控產(chǎn)生過多的COX-2 mRNA外，是否存在DNA及染色體水平的調(diào)控，如基因擴(kuò)增、去甲基化、基因重排等，還有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

［1］CAO Y，PRESCOTT S M.Many actions of cyclooxygenase-2 in cellular dynamics and in cancer［J］.J Cell Physiol，2002，190(3):279－286.

［2］LUO WEI-REN，CHEN XIAO-YI.Research advance of the relationship between cyclooxygenase-2 and tumor［J］.Cancer Research on Prevention and Treatment，2006，33(1):62 －64.

［3］VANE JR，BAKHLE YS，BOTTING RM.Cyclooxygenase 1 and 2［J］.Annu Rev Pharmacol Toxicol，1998，38(5):97 －120.

［4］SANO H，KAWAHITO Y，WILDER R L，et al.Expression of cyclooxygenase-1 and-2 in human colorectal cancer［J］.Cancer Res，1995，55(12):3785 －3789.

［5］MASFERRER J L，LEAHY K M，KOKI A T，et al.Antiangeogenic and Antitumor Activities of Cyclooxygenase-2 Inhibitors［J］.Cancer Res，2000，60(5):1306 －1311.

［6］ROSENBERG L，PALMER J R，RAO R S，et al A Case-control Study of Analgesic Use and Ovarian Cancer［J］.Cancer Epidemiol Biomarkers Prey，2000，9:933 －937.

［7］SOO R，PUTTI T，TAO Q，et al.Overexpression of cyclooxygenase in nasopharyngeal carcinoma and association with epidermal growth factor receptor expression［J］.Arch Otolaryngol Head Neck Surg，2005，131(2):147 －152。

［8］DURSUN P，YUCE K，USNBUTUN A，et al.Cyelooxygenase-2 expression in cervical intraepithelial neoplasia III and squamous cell cervical carcinoma，and its correlation with clinieopathologic variables［J］.Int J Gyneco Cancer，2007，17(1):164 －173.