張穎娟

（山西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，太原030024）

復(fù)方羽龍制劑是由鬼箭羽、白花蛇舌草和穿山龍三味藥的提取物按一定的配伍比例組合而成的一種新劑型，具有清熱解毒祛濕、活血化瘀的功效，治療蛋白尿療效顯著。阿霉素所致實驗性腎損傷模型，其病理變化與臨床表現(xiàn)符合人類的微小病變型腎病（MCN），是一個國際公認(rèn)的動物模型，所以本實驗選用該模型考察復(fù)方羽龍制劑對腎病綜合征的治療作用，并闡述其治療腎病的作用機制，為進一步研發(fā)此方提供實驗依據(jù)。

實驗材料

1.動物：同批清潔級健康雄性 Wistar大鼠60只，體重180±10g，購于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所，合格證號：20110310。

2.藥物：復(fù)方羽龍制劑（山西省中醫(yī)院制劑科制備，批號：20111012），配制為高、中、低3種劑量溶液（生藥含量分別為2g／ml、1g／ml、0.5g／ml）。雷公藤多苷片，上海復(fù)旦復(fù)華藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號：111102，10mg／片，用蒸餾水配制成2mg／ml的混懸液。注射用鹽酸多柔比星（阿霉素ADR），浙江海正藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號：120105，10mg／瓶，用生理鹽水配制成2mg／ml的溶液。

3.試劑與儀器：SOD 試劑盒（批號：110516）、MDA試劑盒（批號：120510）、T－AOC試劑盒（批號：110517）均購自南京建成生物工程研究所。

全自動血液生化分析儀 （美國實驗儀器公司生產(chǎn)制造），721紫外－可見分光光度儀（美國PACKA.Rn公司生產(chǎn)制造），奧林巴斯BX50光學(xué)顯微鏡，透射電鏡（JEM－1200EX），離心機（LD5－2A北京醫(yī)用離心機廠）。

實驗方法

1.動物模型的制作：大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，所有大鼠實驗前24h尿蛋白定量均正常，稱體重，按簡單隨機化原則分組，正常對照組、模型對照組、中藥高劑量組、中藥中劑量組、中藥低劑量組、雷公藤多苷片組，每組10只；并應(yīng)用SPSS10.0軟件統(tǒng)計分析確保各組間沒有顯著性差異，然后尾靜脈注射ADR造模。參照Bertani氏方法，改良復(fù)制阿霉素微小病變型腎病大鼠模型，每只鼠第一次尾靜脈注射ADR 4mg／kg，1周后，第2次注射3.5mg／kg?？瞻捉M用相同的方法注射相同體積的生理鹽水。第2次注射ADR 1周后收集尿液，檢測出尿蛋白，說明造模成功。

2.給藥：自造模后1周起，治療組大鼠分別予復(fù)方羽龍制劑溶液、雷公藤多苷混懸液灌胃，正常組、模型組給予等體積生理鹽水作為安慰對照，灌胃量10ml／（kg·d）。均連續(xù)給藥28天。

3.指標(biāo)測定方法。

一般情況：觀察大鼠的精神狀態(tài)、體重、體毛、進食量、飲水量、二便及活動情況等。

24h尿蛋白定量：實驗第7、14、21、28天，分別置大鼠于代謝籠中，留取24h尿量，用比色法測定大鼠24h尿蛋白定量。尿蛋白定量（mg／dl）＝比色結(jié)果×100×6.43。

血清 Alb、TC、TG、BUN、Scr、SOD、MDA、T－AOC測定：給藥結(jié)束后第2天，各組大鼠麻醉后經(jīng)腹主動脈采血，分離血清。血清Alb、TC、TG、BUN、Scr含量采用全自動血液生化儀測定；SOD、MDA和T－AOC均按試劑盒規(guī)定程序進行測定。

4.統(tǒng)計學(xué)處理：SPSS10.0版統(tǒng)計軟件，組間差異的比較采用單因素方差分析。

實驗結(jié)果

1.一般情況：除正常組外，尾靜脈注射ADR的各組大鼠均有不同程度的腹瀉，攝食減少，精神委頓，形體消瘦，活動減少，體毛干枯不齊，尾部蒼白粗糙，藥物組大鼠表現(xiàn)均較模型組輕，但不如正常組健康。共死亡大鼠3只，模型組2只，低劑量組1只。

正常組大鼠體重持續(xù)增加；造模后，模型組體重持續(xù)降低；藥物組給藥后3～5天體重開始緩緩增加。

2.24 h尿蛋白定量比較：給藥后第7、14、21、28天，模型組尿蛋白定量進行性升高，明顯高于正常組（P＜0.01）；各藥物組尿蛋白定量均較同期模型組降低，給藥后第7天無統(tǒng)計學(xué)意義；給藥后14天正常組及復(fù)方羽龍制劑高、中劑量組明顯低于模型組，差異顯著（P＜0.05），復(fù)方羽龍制劑高劑量組治療作用最為顯著（P＜0.01），而高劑量組與中劑量組降尿蛋白效果無統(tǒng)計學(xué)差異，見表1。

表1 各組大鼠24h尿蛋白量比較（±s）

表1 各組大鼠24h尿蛋白量比較（±s）

注：與正常對照組比較，△△P＜0.01；與模型組比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

組 別 數(shù)目（只）尿蛋白量（mg／24h）第7天 第14天 第21天 第28天正常對照組 10 10.53±0.25 11.84±0.32 10.83±0.27 10.63±0.21模型對照組 10 40.45±10.56△△ 73.78±15.54△△ 135.76±25.72△△221.08±38.56△△雷公藤組 10 22.73±12.76 49.47±17.36＊ 95.43±23.34＊＊120.82±41.75＊＊高劑量組 10 24.78±10.34 45.24±16.23＊ 85.28±27.73＊＊108.57±40.32＊＊中劑量組 10 26.45±11.81 46.86±15.45＊ 86.57±24.62＊ 110.56±37.52＊＊低劑量組 10 30.71±13.67 50.12±16.39 97.96±27.9＊ 116.21±39.35＊＊

3.大鼠血液生化指標(biāo)比較：模型組較正常組血清Alb水平明顯降低（P＜0.01），TC、TG、TP、BUN、Scr水平明顯升高（P＜0.01）。各治療組較模型組血清Alb水平增高，TC、TG、BUN、Scr水平降低，均有顯著性差異（P＜0.05，P＜0.01）。復(fù)方羽龍制劑高劑量組效果最為明顯，見表2。

表2 各組大鼠血液生化指標(biāo)比較±s）

表2 各組大鼠血液生化指標(biāo)比較±s）

注：與正常對照組比較，△△P＜0.01；與模型組比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

組 別數(shù)目（只）Alb（g／L）TC（mmol／L）TG（mmol／L）TP（g／L）BUN（mmol／L）Scr（μmol／L）正常對照組 10 30.5±2.2 2.86±0.75 1.32±0.26 68.4±5.6 12.1±2.2 52±15模型對照組 8 18.5±3.2△△6.54±1.26△△3.25±0.68△△54.3±2.5△△ 26.5±3.6△△ 96±12△△雷公藤組 10 26.8±2.4＊＊4.23±1.12＊＊2.45±0.42＊＊60.2±4.5＊ 22.4±2.8＊ 68±15＊＊高劑量組 10 28.3±2.8＊＊3.56±1.05＊＊1.79±0.53＊＊64.3±5.1＊＊15.7±2.3＊＊ 62±14＊＊中劑量組 10 27.6±2.5＊＊3.68±1.12＊＊1.82±0.39＊＊63.8±4.7＊＊ 16.9±2.5＊ 64±11＊低劑量組 9 26.8±2.1＊ 4.02±1.03＊ 2.23±0.46＊61.7±4.3＊＊19.5±3.1＊＊ 67±12＊

4.六組大鼠血清MDA含量、SOD活力、總抗氧化能力檢測 與正常組相比，模型組MDA含量顯著升高（P＜0.01），SOD活力顯著降低（P＜0.01），總抗氧化能力明顯降低（P＜0.05）。各藥物組均較模型組血清MDA含量降低，且有顯著差異（P＜0.01，P＜0.05）。各給藥組SOD活力、總抗氧化能力均較模型組強，復(fù)方羽龍制劑高劑量組作用最強，與模型組有非常顯著性差異（P＜0.01）。見表3。

表3 各組大鼠血清SOD活性、MDA含量及總抗氧化能力比較±s）

表3 各組大鼠血清SOD活性、MDA含量及總抗氧化能力比較±s）

注：與正常對照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型組比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別 數(shù)目（只）SOD（U／ml）MDA（nmol／ml）T－AOC（U／ml）正常對照組5.75±1.73 10 25.87±5.67 3.12±0.85 7.63±1.68模型對照組 8 11.83±2.13△△ 5.62±1.04△△ 4.77±0.91△雷公藤組 10 18.44±4.61＊ 3.63±1.23＊ 6.43±1.63＊高劑量組 10 22.76±3.52＊＊ 3.46±1.25＊＊ 7.12±1.67＊中劑量組 10 21.73±4.64＊＊ 3.52±1.06＊ 6.98±1.54＊低劑量組 9 19.45±2.66＊ 3.60±1.24＊

討論

腎病蛋白尿既是腎臟疾病較常見的病理變化漏出物，也是一組腎臟發(fā)病過程中的微觀證候。其發(fā)病因素還不十分明確，其中免疫因素介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)和氧自由基等非免疫因素在疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用［1，2］。胡明昌等［1］提出，腎病綜合征時機體的脂質(zhì)過氧化速率增加，抗氧化能力下降，表現(xiàn)為MDA升高，SOD活性下降。因此，通過抗氧化途徑減少氧自由基及脂質(zhì)過氧化損傷而減輕、延緩腎臟損害已成為防治腎小球疾病的重要手段。

本實驗于注射阿霉素的第1周開始出現(xiàn)蛋白尿，并逐步增多，至第4周達到高峰，并呈現(xiàn)低蛋白血癥、高脂血癥，表明MCNS模型制備成功。模型組大鼠血清MDA活力降低，SOD活力升高，T－AOC降低，表明模型大鼠存在亢進的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。

此復(fù)方由白花蛇舌草、穿山龍和鬼箭羽等三味清熱解毒祛濕與活血化瘀藥物組成。鬼箭羽功能破血通經(jīng)，解毒消腫，頗合腎病蛋白尿瘀血阻滯證病機。藥理研究表明其具有改善血液流變學(xué)和微循環(huán)、調(diào)血脂；擴張血管，增加腎血流量，減少腎小球免疫復(fù)合物的沉積，促進蛋白質(zhì)合成，降低尿蛋白。用白花蛇舌草清熱利濕解毒，以通暢三焦，使氣機通暢，補而不滯，消除蛋白尿，減輕腎臟損害。鄧躍毅等［3］研究表明，清熱活血方（白花蛇舌草、忍冬藤、赤芍、丹參）對改善新月體腎炎患者的腎功能作用明顯，優(yōu)于西藥對照組，顯示了中西醫(yī)結(jié)合治療新月體腎炎的優(yōu)勢。穿山龍具有活血舒筋、消食利水之功，使血瘀通利，水行通暢，腎功能恢復(fù)?，F(xiàn)代藥理研究證明，穿山龍對體液和細(xì)胞免疫功能均有顯著的抑制作用。諸藥相配，清熱解毒，活血利水、祛瘀生新、補脾益腎，既可以增強機體的免疫功能，又可以解除腎臟病患者血液的高凝狀態(tài)，修復(fù)和改善腎小球的濾過屏障，從而達到清除蛋白尿，改善腎功能的目的。

［1］王海燕.腎臟病學(xué)［M］.第2版 .北京：人民衛(wèi)生出版社，1996：475－486.

［2］陽 曉，葉任高，劉冠賢.38年中西醫(yī)結(jié)合治療腎臟病的臨床和實驗研究［J］.中山醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2000，21（6）：401－408.

［3］鄧躍毅，陳以平.清熱活血方治療中晚期新月體性腎炎的臨床研究［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2004，24（12）：23.