劉樂霞 梁俊杰 肖瑋 劉建嶺 王瑞麗 徐聞鉑 趙國宏 張國霞 于桂軍

ABO 亞型造成的ABO 正反定型不符，給輸血工作者鑒定血型和患者輸血都帶來了困難。B(A)血型最早由Yamamoto等［1］于1956 年發(fā)現(xiàn)的，是一種非常罕見的ABO 亞型，人群中的發(fā)生頻率非常低，被認(rèn)為是遺傳學(xué)上的B 型，國內(nèi)報(bào)道較少［2］。近期筆者從臨床送檢ABO 正反定型不符標(biāo)本中檢出1例B(A)血型，進(jìn)行了血型血清學(xué)、家系調(diào)查及基因遺傳學(xué)研究，并成功為其解決了臨床輸血困難，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料先證者，男，71 歲，胃癌，血常規(guī)檢查:紅細(xì)胞(RBC)2.8×109/L，血紅蛋白(Hb)52 g/L，紅細(xì)胞比容(HCT)0.29，ABO 正反定型不符逐送我站做進(jìn)一步鑒定和疑難配血。家庭成員:先證者的配偶，1 個(gè)兒子及配偶，2 個(gè)女兒及配偶，兒子的2 個(gè)兒子，大女兒的2 個(gè)兒子，小女兒的2 個(gè)兒子，先證者的曾孫。

1.2 試劑單克隆抗-A、抗-B 血型定型試劑、抗-H、抗-A1、抗人球蛋白試劑、聚凝胺試劑(上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司提供);人源抗-A 和抗-B 及Ac、Bc、Oc、A2c 和自身紅細(xì)胞(本站制備)。

1.3 血型血清學(xué)試驗(yàn)ABO 血型正反定型、吸收放散試驗(yàn)、血型物質(zhì)檢查均按相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程進(jìn)行［3］。

1.4家系血型遺傳調(diào)查對(duì)家系共16 人抽取血液分別進(jìn)行血型鑒定，8 名B(A)做了基因分型。

1.5 ABO 基因分型由上海市血液中心國家血型參比室對(duì)家族中8 名B(A)者做了基因分型與克隆測(cè)序，方法參照文獻(xiàn)［4］。先證者的曾孫后來出生，未能做分子生物學(xué)鑒定。1.6 交叉配血試驗(yàn) 按相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程進(jìn)行［3］。

2 結(jié)果

2.1 血型血清學(xué)結(jié)果見表1。

表1 家系中B(A)血型成員血型血清學(xué)鑒定結(jié)果

2.2 家系調(diào)查結(jié)果家系4 代16 人中有9 人為B(A)血型，先證者、2 代先證者的兒子和2 個(gè)女兒、3 代中兒子的大兒子、大女兒的大兒子、小女兒的2 個(gè)兒子、4 代先證者的曾孫均為B(A)血型。見圖1。

圖1 先證者家系血型遺傳圖

2.3 分子生物學(xué)結(jié)果先證者的ABO 基因在第7 外顯子發(fā)生640A ＞G 突變，其它他合位點(diǎn)均符合B101/O01 特征，見圖2。2、3 代中的7 名B(A)家系成員其基因型結(jié)果除5 號(hào)先證者兒子的大兒子和6 號(hào)大女兒的大兒子為B(A)04/B101 外，余均為B(A)04/O01，測(cè)序結(jié)果均為B(A)640A ＞G 等位基因，見表2。

圖2 先證者ABO 基因第7 外顯子中檢出點(diǎn)突變 箭頭示B(A)640(A→G)突變

2.4 交叉配血結(jié)果先證者與O 型洗滌細(xì)胞及3 個(gè)子女交叉配血主次側(cè)均無凝集、無溶血。見表3。

表2 先證者及其7 個(gè)B(A)家系成員基因型、克隆測(cè)序、血型結(jié)果

表3 先證者交叉配血結(jié)果

3 討論

我們通過以上血型血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)家系中9 名成員均為紅細(xì)胞上僅有少量A 抗原和幾乎正常含量的B 抗原，其血清中包含抗-A，可以和A1 細(xì)胞和部分A2 細(xì)胞發(fā)生凝集，H 物質(zhì)增多或未增多，符合B(A)血型血清學(xué)特點(diǎn)［4］，初定為B(A)血型。

血清學(xué)方法無法對(duì)亞型正確定型，通過表型和家系調(diào)查我們可以推斷其基因型，通過分子生物學(xué)方法對(duì)其進(jìn)行基因定型［5］。家系調(diào)查分析發(fā)現(xiàn)B(A)血型中的A 和B 抗原的傳遞呈穩(wěn)定的順式遺傳方式，目前已經(jīng)遺傳了4 代，不分性別遺傳。從該家系血型血清學(xué)遺傳規(guī)律推測(cè)B(A)血型的形成機(jī)制可能是B 等位基因在正常B 基因序列的基礎(chǔ)上了發(fā)生單堿基突變，變異的B 基因可能具有編碼雙功能活性酶的能力，因此血清學(xué)除了表現(xiàn)B 抗原特異性，還表現(xiàn)少量A 抗原特異性。通過基因分型與克隆測(cè)序后確認(rèn)其中8 例B(A)血型是由B 等位基因在正常B 基因序列的基礎(chǔ)上發(fā)生單堿基突變(nt640(A→G))形成的B(A)血型，B101 基礎(chǔ)上的640A ＞G 突變?yōu)锽(A)04 等位基因。以上推斷及分子生物學(xué)定型發(fā)現(xiàn)B(A)基因具有家系遺傳性。

鑒于B(A)血型的特殊性，在臨床配血、定型中，需要我們血型工作者引起高度的重視。若B(A)血型誤判為B 型，做為獻(xiàn)血者輸給B 型患者，將發(fā)生急性溶血性輸血反應(yīng)，非常危險(xiǎn)。但B(A)血型在輸血科和血庫的血清學(xué)檢測(cè)方法難以正確定型，易于與AxB 或CisAB 亞型相混淆［6］，增加了輸血的風(fēng)險(xiǎn)。血站通過采用單克隆及人源試劑做ABO 正反定型和吸收放散、唾液血型物質(zhì)抑制等血型血清學(xué)試驗(yàn)法，考慮為B(A)血型，針對(duì)其血型血清學(xué)特點(diǎn)，可考慮輸O 型或B 型洗滌紅細(xì)胞，緊急情況下先輸注了理論上的萬能O 型洗滌紅細(xì)胞2 U，后通過家系調(diào)查，用分子生物學(xué)方法分析家系成員的基因型，鑒定出家系中的B(A)血型，選擇了先證者的3 個(gè)均為B(A)血型的子女家屬互助獻(xiàn)血共4 U，對(duì)患者先后兩次輸血進(jìn)行了輸血后的追蹤調(diào)查，均未發(fā)生輸血不良反應(yīng)，輸血后Hb 為91 g/L。用洗滌紅細(xì)胞要先做體外循環(huán)，容易造成細(xì)胞碎掉，而且違背了同型輸血的原則，有一定的風(fēng)險(xiǎn)，僅在緊急情況下使用［7］。對(duì)于罕見亞型患者輸血，可通過家系調(diào)查，動(dòng)員家屬，進(jìn)行同型互助輸血，另外在國內(nèi)建立罕見亞型者檔案庫，將以上調(diào)研資料輸入檔案庫，備同型罕見亞型者互助獻(xiàn)血，對(duì)于有條件的罕見亞型者還可考慮自體冷藏及紅細(xì)胞冰凍長期保存貯血。罕見ABO 亞型的血型血清學(xué)分析鑒定、家系遺傳學(xué)調(diào)查研究，對(duì)罕見亞型的研究和臨床采取正確的輸血有重要意義。

葉有玩等［8］報(bào)道803G 血型基因與O 型妻子生育的B(A)血型孩子發(fā)生嚴(yán)重的新生兒溶血病(HDN)，先證者與O 型配偶生育3 個(gè)B(A)血型子女，家系第二代B(A)血型2 個(gè)女兒與O型、B 型配偶生育的B(A)血型孩子，均未發(fā)生HDN，也無流產(chǎn)史，B(A)血型發(fā)生HDN 是否與B(A)基因分型有關(guān)，有待研究。另據(jù)報(bào)道血型與癌癥發(fā)病率相關(guān)［9］，吳杰等［7，10］報(bào)道B(A)亞型患者均為癌癥，我們發(fā)現(xiàn)的B(A)亞型先證者患胃癌，B(A)血型是否與癌癥相關(guān)，尚需進(jìn)一步調(diào)查研究。

1 Yamamoto F，McNeill PD，Yammoto M，et al.Molecular geneticanalysis of theABO blood group system 3.A(X)and B(A)alleles.Vox Sang，1993，64:171-174.

2 Schenkel-Brunner H.ABO system.Human blood groups chemical and biochemical basis of antigen specificity.2ed.New York:Spinger wien，2000.145-147.

3 葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜主編.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程.第3 版.南京:東南大學(xué)出版社，2006.262-264.

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6 康瓊英，閆偉.AxB 及B(A)亞型各1 例檢測(cè)分析.河北醫(yī)藥，2011，33:280-281.

7 吳杰，徐笑紅，葉紅宇，等.B(A)血型遺傳特性及其患者輸血方法探討.中國輸血雜志，2010，23:951-952.

8 葉有玩，鄧志輝，周曙明，等.中國漢族人群檢出B(A)803C→G 等位基因并引起重度新生兒溶血病的研究.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2008，31:68-71.

9 楊春晴，張榮華，周少為，等.肺癌、肝癌、胃癌與ABO 血型關(guān)系的探討.臨床輸血與檢驗(yàn)，2000，1:11-12.

10 范亞欣，孟慶麗，潘凌子，等.1 例罕見的B(A)亞型患者的血型鑒定和配血.中國輸血雜志，2011，24:892-893.