張磊 宋清福 高素芳 劉金碌 李軍

血細(xì)胞分析儀是臨床檢驗(yàn)中的常規(guī)檢測(cè)設(shè)備，已有的血細(xì)胞分析儀經(jīng)過(guò)維修后或新購(gòu)置的血細(xì)胞分析儀經(jīng)過(guò)運(yùn)輸，其檢測(cè)性能可能會(huì)發(fā)生一定的變化。實(shí)驗(yàn)室在使用檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行患者標(biāo)本檢測(cè)前，從保證檢驗(yàn)質(zhì)量考慮，必須在實(shí)驗(yàn)室的具體條件下用實(shí)驗(yàn)去證實(shí)或確認(rèn)檢測(cè)系統(tǒng)的基本分析性能符合臨床要求，或和廠商提供的資料一致，才可以將檢測(cè)系統(tǒng)用于常規(guī)檢測(cè)。我們以ICSH［1］、美國(guó)CLSI［2－4］及FDA［5］制定的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)以及ISO15189－《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的通用要求》［6］和《衛(wèi)生部醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》［7］的相關(guān)條款的要求，自建檢測(cè)系統(tǒng)需要進(jìn)行精密度、方法比對(duì)和偏倚評(píng)估、線性、攜帶污染率評(píng)價(jià)。本文將我院新購(gòu)置的邁瑞B(yǎng)C5300 型血細(xì)胞分析儀進(jìn)行性能評(píng)價(jià)結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器、試劑與樣本待評(píng)價(jià)儀器:邁瑞B(yǎng)C5300 型血細(xì)胞分析儀，配套試劑，校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，由深圳邁瑞公司生產(chǎn);對(duì)照儀器:SYSMEX XE5000 型血細(xì)胞分析儀，配套試劑，校準(zhǔn)品和質(zhì)控物，由日本SYSMEX 公司生產(chǎn);樣本:我院患者新鮮EDTA-K2 抗凝全血。

1.2 方法按照ICSH［1］、美國(guó)CLSI［2－4］及FDA［5］制定的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)以及ISO15189-《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的通用要求》［6］和《衛(wèi)生部醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》［7］相關(guān)條款的要求對(duì)邁瑞B(yǎng)C5300 型血細(xì)胞分析儀的精密度、方法比對(duì)和偏倚評(píng)估、攜帶污染率、線性進(jìn)行評(píng)價(jià)測(cè)定，對(duì)邁瑞B(yǎng)C5300 血細(xì)胞分析儀進(jìn)行日常清洗維護(hù)，進(jìn)行本底檢查，滿(mǎn)足要求［白細(xì)胞(WBC)≤0.3×109/L，紅細(xì)胞(RBC)≤0.03×1012/L，血紅蛋白(HGB)≤1 g/L，血小板(PLT)≤10×109/L)］后采用配套校準(zhǔn)物按照規(guī)范操作規(guī)程對(duì)血細(xì)胞分析儀進(jìn)行校準(zhǔn)，采用配套質(zhì)控物進(jìn)行日常室內(nèi)質(zhì)量控制。

1.2.1 重復(fù)性:根據(jù)CLSI EPl5-A 文件［3］，每天選取患者新鮮EDTA-K2 抗凝血標(biāo)本高、中水平各一份，分別連續(xù)重復(fù)測(cè)定11次，重復(fù)測(cè)定3 d［8］，每天測(cè)定需自帶質(zhì)控，在2 h 內(nèi)完成［9］。取2 ～11 次結(jié)果分別計(jì)算WBC、RBC、HGB、PLT 的CV 值與標(biāo)準(zhǔn)CV 值比較，計(jì)算其精密度。

1.2.2方法比對(duì)和偏倚評(píng)估:根據(jù)《衛(wèi)生部醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》檢查表(血液學(xué)部分)［6］，檢驗(yàn)同一項(xiàng)目的不同方法、不同分析系統(tǒng)應(yīng)定期(至少6 個(gè)月)進(jìn)行結(jié)果的比對(duì)。參照臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)會(huì)(clinical and laboratory standards institute，CLSI)的《采用病人標(biāo)本進(jìn)行方法比對(duì)和偏倚評(píng)估方案(批準(zhǔn)方案)第2 版》(EP9-A2)［2］，制定本實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)系統(tǒng)間的方法比對(duì)操作程序。目前實(shí)驗(yàn)室主要使用的血細(xì)胞分析儀XE5000，除參加北京市臨床檢驗(yàn)中心、衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心的室間質(zhì)評(píng)，還參加Sysmex 公司全球在線質(zhì)控系統(tǒng)SNCS(Sysmex Network Communication Systems SNCS)，且每年進(jìn)行2 次校準(zhǔn)，每開(kāi)機(jī)日做1 次兩個(gè)水平的室間質(zhì)控測(cè)定。儀器精密度、準(zhǔn)確度、抗干撓能力等都優(yōu)于其他儀器，故用此儀器測(cè)定結(jié)果做為真值，本儀器做為基準(zhǔn)儀器，邁瑞B(yǎng)C5300 為考核儀器。

校準(zhǔn)后每天選取新鮮EDTA-K2 抗凝血標(biāo)本8 例(所選濃度范圍應(yīng)盡可能在考核方法測(cè)量范圍內(nèi)均勻分布，參比方法的范圍應(yīng)盡可能滿(mǎn)足考核方法的范圍要求。標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表1)，于兩臺(tái)血細(xì)胞分析儀上進(jìn)行平行測(cè)定，雙份標(biāo)本應(yīng)變換順序，如按1 ～8和8 ～1 的順序重復(fù)測(cè)定2 次，取其均值為測(cè)定值。每批測(cè)定需帶質(zhì)控，在2 h 內(nèi)完成［9］。連續(xù)測(cè)定5 d，分別計(jì)算每個(gè)標(biāo)本每個(gè)項(xiàng)目基準(zhǔn)儀器測(cè)定值和考核儀器測(cè)定值差值占基準(zhǔn)儀器測(cè)定值的百分比對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行分析。

1.2.3 線性:參照臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)會(huì)(clinical and laboratory standards institute，CLSI)的《定量測(cè)量方法線性評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方案(批準(zhǔn)方案)》(EP6-A)，制定本實(shí)驗(yàn)室自建檢測(cè)系統(tǒng)的線性評(píng)價(jià)操作程序［4］。分別收集高WBC、RBC、HGB、PLT值新鮮全血標(biāo)本離心濃縮分離得到接近預(yù)期上限的高值WBC、RBC、HGB、PLT 標(biāo)本，以此樣本為100%。用稀釋液(離心制備同型乏血小板血漿)將濃縮后的血標(biāo)本分別按90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%、10%、5%不同濃度進(jìn)行稀釋?zhuān)謩e從低到高測(cè)定不同稀釋度的標(biāo)本，每一份標(biāo)本用邁瑞B(yǎng)C5300 測(cè)定3 次，取其均值為測(cè)定值，運(yùn)用SPSS 軟件將其與各稀釋度的理論值做線性回歸分析。

1.2.4 攜帶污染率:分別選取檢測(cè)線性上限和下限附近的WBC、RBC、HGB 和PLT 新鮮EDTA-K2 抗凝全血標(biāo)本，混勻后連續(xù)檢測(cè)高值標(biāo)本3 次(H1、H2、H3)，馬上連續(xù)檢測(cè)低值標(biāo)本3 次(L1、L2、L3)，計(jì)算公式為:攜帶污染率(%)=［(L1－L3)/(H3－L3)］×100%［10，11］。與BC5300 產(chǎn)品說(shuō)明［6］上規(guī)定的攜帶污染率比較。

2 結(jié)果

2.1 本底檢查WBC、RBC、HGB 和PLT 的每次本底計(jì)數(shù)均為0。

2.2 重復(fù)性根據(jù)衛(wèi)生部臨檢中心《血液分析儀校準(zhǔn)要求》，BC5300 連續(xù)3 d 高、中值樣本W(wǎng)BC、RBC、HGB 和PLT 的變異系數(shù)均小于儀器規(guī)定［12］的要求，顯示了較好的重復(fù)性和重現(xiàn)性。見(jiàn)表1。

表1 WBC、RBC、HGB 和PLT 的重復(fù)性 %

2.3 方法比對(duì)和偏倚評(píng)估血細(xì)胞分析結(jié)果的偏差范圍依項(xiàng)目不同而不同，采用1/2CLIA＇88 標(biāo)準(zhǔn)做為偏差范圍。比對(duì)的偏差范圍在該范圍內(nèi)為滿(mǎn)足要求，40 份標(biāo)本中有32 份滿(mǎn)足要求為比對(duì)合格，邁瑞B(yǎng)C5300 和sysmex XE5000 對(duì)WBC、RBC、HGB 和PLT 的測(cè)定具有良好的相關(guān)性。見(jiàn)表2。

表2 邁瑞B(yǎng)C5300 和sysmex XE5000 的比對(duì)結(jié)果 份(%)

2.4 線性WBC、RBC、HGB、PLT 的線性范圍分別是0 ～104.3、0 ～10.4、0 ～267.2、0 ～1 103.7，相關(guān)系數(shù)均＞0.99，能滿(mǎn)足BC-5300 生產(chǎn)廠商的宣稱(chēng)要求和臨床需求。見(jiàn)表3、4。

表3 WBC、RBC、HGB 和PLT 的線性方程

表4 WBC、RBC、HGB 和PLT 的線性范圍

2.5 攜帶污染率WBC、RBC、HGB、PLT 等參數(shù)的高低值樣本攜帶污染率檢測(cè)均符合產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)要求［6］。見(jiàn)表5、6。

表5 攜帶污染率數(shù)據(jù) %

表6 攜帶污染率結(jié)果

3 討論

邁瑞B(yǎng)C5300 血細(xì)胞分析儀是邁瑞公司自主研發(fā)生產(chǎn)的全自動(dòng)五分類(lèi)血液細(xì)胞分析儀，采用電阻抗法檢測(cè)RBC 和PLT的數(shù)目以及體積分布;采用比色法測(cè)量血紅蛋白濃度;采用半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞技術(shù)獲得WBC 總數(shù)和五分類(lèi)WBC 的分類(lèi)統(tǒng)計(jì)計(jì)數(shù)［13］。在此基礎(chǔ)之上，分析儀計(jì)算出其余參數(shù)的結(jié)果。邁瑞B(yǎng)C5300 全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀采用半導(dǎo)體激光系統(tǒng)，通過(guò)多角度的激光散射，可以提供細(xì)胞的大小、細(xì)胞核、細(xì)胞顆粒大小等復(fù)雜的信息，并結(jié)合細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)，準(zhǔn)確地把嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)，同時(shí)可以篩選各類(lèi)異常、幼稚細(xì)胞，從而實(shí)現(xiàn)更精確的五分類(lèi)檢測(cè)結(jié)果［12］。同時(shí)血細(xì)胞分析儀仍只能作為全血細(xì)胞分析的一種過(guò)篩手段，當(dāng)遇到可疑情況，尤其是在病理?xiàng)l件下，其測(cè)定結(jié)果并不可靠，需要人工以顯微鏡復(fù)查。邁瑞B(yǎng)C5300 提供了復(fù)檢提示功能，醫(yī)院可以在儀器內(nèi)選擇復(fù)檢規(guī)則或者自定義復(fù)檢規(guī)則，儀器可以對(duì)相應(yīng)的異常樣本進(jìn)行提示。同時(shí)為保障BC5300 計(jì)數(shù)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，就必須做好實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理工作，對(duì)操作人員進(jìn)行培訓(xùn)，提高專(zhuān)業(yè)理論知識(shí)和操作能力，另外實(shí)驗(yàn)室還要保持恒溫，做好日常維護(hù)保養(yǎng)工作和每天質(zhì)控工作，并定期對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，以此來(lái)保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。本試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明該儀器主要檢測(cè)參數(shù)的重復(fù)性、儀器可比性、攜帶污染測(cè)試結(jié)果良好，CV 值、偏差百分比以及攜帶污染率均滿(mǎn)足產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)要求;儀器的線性范圍較寬，4 個(gè)參數(shù)的線性范圍基本涵蓋了臨床樣本分布的濃度范圍;儀器的檢測(cè)結(jié)果與對(duì)照機(jī)SysmexXE5000 具有良好的相關(guān)性。

綜上所述，BC5300 性能能達(dá)到廠家要求的標(biāo)準(zhǔn)，故障率低，操作簡(jiǎn)單，其分析功能能滿(mǎn)足大中小型醫(yī)院住院、門(mén)診、急診臨床檢驗(yàn)工作，是一種較理想的全自動(dòng)五分類(lèi)血液細(xì)胞分析儀。

1 ICSH.Guidelines for the evaluation of blood cell analysers including those used for differential leucocyte and retieulocyte counting and cell marker applications.Clin Lab Haemat，1994，16:157-174.

2 CLSI.Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples;Approved Guideline-Second Edition;Document EP9-A2.940 West Valley Road，Suite 1400，Wayne，PA19087-1898.USA，2002.

3 CLSI.User Verificationof Performance for Precisionand Trueness;Approved Guideline-Second Edition;Document EP15-A2.940West Valley Road，Suite 1400，Wayne，PA19087-1898.USA，2005.

4 CLSI.Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures:A Statistical Approach;Approved Guideline;Document EP6-A.940WestValleyRoad，Suite1400，Wayne，Pennsylvania19087-1898.USA.2003.

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6 衛(wèi)生部醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法.

7 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的通用要求(即ISO15189).

8 曾完威.邁瑞B(yǎng)C-5500 全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀的性能評(píng)價(jià).檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2007，4:613-615.

9 蘇慶軍，趙燕，陳建國(guó)，等.血液標(biāo)本存放條件對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響.華北國(guó)防醫(yī)藥，2007，19:55-57.

10 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員主編.中華人民共和國(guó)藥典(二部).北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2000.659.

11 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.YY/T 0653—2008 一中華人民共和國(guó)醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(血液分析儀)，ICSII.100，C44，2009.6.

12 Operator’sManual:BC-5300AutomatedHematology Analyzer.Shenzhen，China:MindrayBio-Medical Electronics Co.Ltd，2010-04:B2-B4.

13 張旭凱，陸海峰.五分類(lèi)血液細(xì)胞分析儀的原理及應(yīng)用.中國(guó)醫(yī)療器械信息.2006，12:52-56.