李慶偉，梁明勤，賀愛利，劉榮寧

(河南農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)工程系，河南 鄭州 451450)

瓦松(Orostachys fimbriatus)為景天科瓦松屬的植物，在中國山東、河南、江蘇、湖北等省及俄羅斯、日本等國家和地區(qū)均有分布［1］。瓦松全株可入藥［2］，提取有效成分制成的栓劑、膜劑可用于治療宮頸糜爛［3-6］、口腔潰瘍［7］、胃腸潰瘍、肺炎［8-9］等癥狀。由于以瓦松為原料合成的新藥品市場需求旺，所以與瓦松相關(guān)的國家專利和科技成果［3］使瓦松新藥越來越多地應(yīng)用于臨床上。然而，天然生長瓦松受自然條件和人為采挖等影響較大，產(chǎn)量不穩(wěn)定，難以滿足臨床上持續(xù)增加的需要，因此瓦松的人工栽培與生物快繁成為研究熱點(diǎn)。本試驗(yàn)對瓦松試管苗煉苗移栽技術(shù)進(jìn)行探索，旨在為瓦松的人工栽培提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

生根瓦松試管苗。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 煉苗方法

9月上旬挑具有完整根系的試管苗于室外進(jìn)行煉苗。處理1-5 打開瓶口，在室外自然條件下分別鍛煉1，3，5，7 和9 d;處理6-10 先打開瓶口，后蓋上瓶蓋，分別在室外自然條件下鍛煉1，3，5，7 和9 d;處理11-15 自然條件下打開瓶蓋再蓋上，3 d 后去除瓶蓋，分別鍛煉1，3，5，7 和9 d。

1.2.2 移栽方法

煉苗后，洗去試管苗根部培養(yǎng)基，栽于食用菌菌糠和蛭石不同體積配比的基質(zhì)中。試驗(yàn)設(shè)6個(gè)基質(zhì)處理:分別單獨(dú)使用食用菌菌糠和蛭石;食用菌菌糠和蛭石體積配比分別為1∶0.5，1∶1，1∶1.5，1∶2。觀察移栽后試管苗的成活率。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

移栽后20 d，統(tǒng)計(jì)各處理間移栽成活率和移栽苗生長狀態(tài)等。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同煉苗法對瓦松試管苗移栽成活率的影響

從表1 可以看出，隨著煉苗時(shí)間的增加，試管苗的移栽成活率不斷升高;試管苗的鍛煉方式不同，其移栽成活率存在較大差異。試管苗從培養(yǎng)室中拿出后，直接在室外打開瓶蓋進(jìn)行鍛煉，導(dǎo)致長期生長在高濕條件下的瓶苗失水嚴(yán)重，根系變褐，試管苗葉片邊緣卷縮，所有處理移栽成活率最高僅為22.0%。若只在開始打開試管苗瓶蓋，通風(fēng)換氣后再蓋上，然后經(jīng)過一段時(shí)間的鍛煉，其移栽成活率明顯高于直接打開瓶口的，這說明試管苗在進(jìn)行室外鍛煉時(shí)，需要進(jìn)行生理和形態(tài)適應(yīng)。分析原因，開瓶換氣降濕，使試管苗進(jìn)行簡單的適應(yīng);再次蓋上瓶蓋，并沒有影響瓶內(nèi)外氣體和水分的緩慢交換，又形成了一個(gè)相對密閉的環(huán)境，使試管苗進(jìn)行自身的調(diào)整(氣孔閉合、產(chǎn)生保護(hù)組織等)，從而使移栽成活率提高。然而僅在開始階段打開培養(yǎng)容器，直至移栽時(shí)直接取苗移栽，這樣的處理方式的移栽成活率最高也僅為88.7%。采用先開瓶處理，然后密閉3 d 后，再次打開瓶蓋進(jìn)行開瓶鍛煉，移栽成活率明顯提高，開瓶鍛煉5～9 d 的移栽成活率最低為95.5%，最高為100%。說明試管苗經(jīng)過開瓶-閉瓶-開瓶的鍛煉后，其適應(yīng)能力大大提升。

表1 不同煉苗方式對瓦松試管苗移栽成活率的影響

由表1 可知，各組合間多重比較差異較明顯，說明不同組合對瓦松的移栽成活率影響不同。組合14，15 與其他組合間差異達(dá)到極顯著。相同的煉苗處理方法，不同煉苗時(shí)間的各處理間也達(dá)到極顯著差異，說明煉苗方式對瓦松試管苗移栽影響較大。所進(jìn)行的各種方式中，以組合14，15 煉苗成活率最高，移栽試管苗100%成活。因此，瓦松試管苗的鍛煉，以試管苗從培養(yǎng)室中取出，置于室外，打開瓶口換氣后，重新蓋上瓶蓋，封口鍛煉3 d 后，再次打開瓶蓋煉苗5～9 d 為宜。

2.2 基質(zhì)對瓦松試管苗移栽成活率的影響

瓦松移栽所用基質(zhì)采用食用菌菌糠和蛭石。食用菌菌糠具有疏松透氣的特性，但保水性差;而蛭石特性恰好相反，保水性好，通透性差。二者結(jié)合則能很好地起到互補(bǔ)作用。試管苗在不同基質(zhì)中的移栽情況見表2。

表2 不同基質(zhì)對試管苗移栽成活率的影響

從表2 可看出，瓦松試管苗在不同基質(zhì)中生長存在差異，移栽到單獨(dú)的食用菌菌糠或蛭石中，其成活率明顯較低，最高僅為29.9%，這與2種基質(zhì)的特性和瓦松試管苗的生理狀態(tài)與特性有關(guān)。瓦松本身耐旱，試管苗雖經(jīng)鍛煉，但與自然界中的植株相比還是較為幼嫩，對環(huán)境條件的適應(yīng)性差，因此在保水性差的食用菌菌糠中并不能很好地存活下來;又因?yàn)橥咚砷L期來形成了根系喜通氣良好的環(huán)境，而移栽至蛭石中不能滿足其根部環(huán)境需要，故長勢緩慢，死亡率高。

比較顯示，不同移栽基質(zhì)組合試驗(yàn)中，組合3和4，2 和5，1 和6 均達(dá)到顯著性差異。組合3，4的試管苗移栽成活率最高，平均達(dá)99.3%。因此，瓦松試管苗移栽時(shí)，以食用菌菌糠和蛭石的配比(容積比)為1∶1 或1∶1.5 較宜，植株生長健壯，長勢良好(圖1)。

圖1 移栽成活的試管苗

3 小結(jié)與討論

3.1 煉苗方式對試管苗成活率的影響

組培苗長期處于高濕、恒溫、弱光的室內(nèi)環(huán)境條件下，幼苗對外界環(huán)境的抗性和適應(yīng)能力大幅下降，出瓶移栽時(shí)，環(huán)境條件變化大，直接影響其成活率。在瓦松煉苗試驗(yàn)中，采用開瓶換氣、閉瓶3 d、開瓶5～9 d 的鍛煉方式，明顯改善了試管苗的生理狀態(tài)，提高了移栽成活率。已有研究顯示，試管苗煉苗方式不盡相同。潘登浪［10］以荸薺為試材進(jìn)行煉苗移栽時(shí)，直接取出后移栽效果好;宋會訪［11］用桂花組培苗鍛煉時(shí)，采用將封口膜打開，室內(nèi)散射光煉苗，5 d 后移栽，成活率最高可達(dá)80%;李翔［12］對山銀花組培苗不開蓋，先在散射光下鍛煉20～30 d，然后開蓋2～3 d，移栽成活率最高可達(dá)100%?？梢姛捗绶绞诫m不同，但其目的基本一致，都是增強(qiáng)試管苗對外界環(huán)境的適應(yīng)性，具體采用何種方式煉苗，應(yīng)根據(jù)具體材料種類和環(huán)境條件來選擇。

3.2 移栽基質(zhì)對試管苗成活的影響

試管苗移栽是組織培養(yǎng)最后一步，也是制約種苗工廠化生產(chǎn)的最關(guān)鍵的一步［13］。不同的材料在不同的基質(zhì)上的移栽成活率不同。移栽時(shí)應(yīng)根據(jù)試管苗的生物學(xué)特性，采用合理的基質(zhì)。瓦松長期在野生環(huán)境條件下生長，其植株形成了耐旱、喜光的特性，根系喜疏松透氣環(huán)境。因此試驗(yàn)中，以疏松的食用菌菌糠和保水性強(qiáng)的蛭石為基本移栽基質(zhì)，通過不同的配比試驗(yàn)表明，食用菌菌糠∶蛭石1∶1～1.5 的比例下，瓦松植株生長健壯，長勢良好。

［1］傅書遐，傅坤俊.中國植物志［M］.北京:科學(xué)技術(shù)出版社，1984.

［2］江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1997.

［3］趙玉山，崔維初，苗得足，等.瓦松栓及其制備方法:中國，CN1436525A ［P］.2003-8-20.

［4］蔡玉英，韋興光，張偉，等.瓦松栓治療宮頸糜爛臨床療效觀察［J］.中草藥，2000，31 (5):370-371.

［5］陸永濱，賀慧琴，蔡玉英，等.瓦松栓治療宮頸糜爛302例臨床觀察［J］.江蘇中醫(yī)，2000，21 (5):22-23.

［6］王淑貞，石冬梅.瓦松拴治療宮頸糜爛82 例報(bào)告［J］.山東醫(yī)藥，2002，42 (8):65.

［7］蔡玉英，何劍.瓦松膜劑治療復(fù)發(fā)性口腔潰瘍初步臨床研究［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，1999，10 (10):720.

［8］李杰，崔淑香，周玲，等.瓦松提取物對實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍的治療作用［J］.中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2008，13(4):388-391.

［9］趙玉山，任正偉，李廣，等.瓦松在腸胃病藥中的應(yīng)用及藥物:中國，CN1444973 ［P］.2003-10-1.

［10］潘登浪.荸薺植物組織培養(yǎng)技術(shù)研究［D］.桂林:廣西師范大學(xué)，2007.

［11］宋會訪.桂花組織培養(yǎng)體系技術(shù)研究［D］.武漢:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2004.

［12］李翔.山銀花的組織培養(yǎng)［D］.南寧:廣西大學(xué)，2007.

［13］杜研.鈣果組織培養(yǎng)關(guān)鍵技術(shù)研究［D］.蘭州:甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007.