冉啟軍，許 洋，丁 寧

(1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 藥劑科,貴州 遵義 563099；2.貴陽中醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)系，貴州 貴陽 550002)

·技術(shù)與方法·

HPLC法測(cè)定婦陰舒洗液中綠原酸的含量

冉啟軍1，許 洋1，丁 寧2

(1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 藥劑科,貴州 遵義 563099；2.貴陽中醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)系，貴州 貴陽 550002)

目的建立測(cè)定婦陰舒洗液中綠原酸含量的HLPC方法。方法采用高效液相色譜法，選用Hypersil ODS C18(250 mm×4.6 mm 5 μm)色譜柱；流動(dòng)相為甲醇-0.5%醋酸酐水溶液(20∶80)；柱溫：25 ℃，檢測(cè)波長為327 nm，流速為1.0 mL/min。結(jié)果綠原酸在0.25～2.50 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系(r=0.9999),平均回收率98.28%,RSD=0.80%(n=5)。結(jié)論該方法操作簡便、靈敏度高、重現(xiàn)性好、測(cè)定結(jié)果可靠，可用于婦陰舒洗液中綠原酸的含量測(cè)定。

婦陰舒洗液；綠原酸；高效液相色譜法

婦陰舒洗液是用金銀花、虎耳草、蛇床子等7味中藥制成的婦科外用復(fù)方制劑。主要用于由金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和白色念珠菌等引起的婦科炎癥，具有抗菌、消炎、止癢作用。婦陰舒洗液中的君藥金銀花LonicerajaponicaThunb所含主要有效化學(xué)成分為“綠原酸”，綠原酸具有對(duì)大腸桿菌、金色葡萄球菌、肺炎球菌和病毒有較強(qiáng)的抑菌和殺菌作用，臨床上用于治療急性細(xì)菌性感染疾病[1-2]；我們用HPLC法對(duì)婦陰舒洗液中綠原酸含量進(jìn)行測(cè)定，從而為建立婦陰舒洗液

的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1100高效液相色譜儀(在線脫氣機(jī)， 單泵， VWD檢測(cè)器， 自動(dòng)進(jìn)樣器，Agilent化學(xué)工作站)、FA1004型電子分析天平(上海良平儀器儀表有限公司)。

1.2 試藥 對(duì)照品：綠原酸由中國藥品生物制品檢定所提供(批號(hào)53-200111，供含量測(cè)定用)； 甲醇為色譜純、醋酸酐為分析純、水為重蒸餾水；供試品：由貴陽中醫(yī)學(xué)院三源藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(批號(hào)20120301)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Hypersil ODS C18(250 mm×4.6 mm 5 μm);流動(dòng)相：甲醇-0.5%醋酸酐水溶液(20∶80); 柱溫：25 ℃；流速為1.0 mL/min; 檢測(cè)波長327 nm，進(jìn)樣量10 μL。

2. 2 對(duì)照品溶液的制備 綠原酸，精密稱定，置于10 mL棕色容量瓶中,加甲醇溶解,并定容至刻度,搖勻,制成對(duì)照品綠原酸的濃度為0.15 mg/mL的溶液，備用。

2. 3 供試品溶液及陰性對(duì)照液的制備 精密吸取溶液4mL，置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至10 mL，搖勻，微孔濾膜濾過，即得供試品溶液；按處方比例和制備方法，制成不含金銀花的溶液。按照供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照液。

2.4 專屬性試驗(yàn) 分別取對(duì)照品、供試品、陰性對(duì)照溶液各10 μL進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果見圖1，對(duì)照品、供試品溶液均出現(xiàn)了綠原酸色譜峰，而陰性對(duì)照溶液無色譜峰，表明在本實(shí)驗(yàn)條件下，無其它雜質(zhì)干擾綠原酸的測(cè)定。

2.5 線性關(guān)系的考察 精密稱定10 mg綠原酸對(duì)照品，加甲醇溶解后，分別配成濃度為：0.025、0.050、0.10、0.150、0.20、0.250 mg/mL的對(duì)照品溶液，分別取上述對(duì)照品溶液10 μL進(jìn)樣,記錄色譜峰面積,綠原酸在0.25～2.50 μg線性范圍內(nèi)，線性回歸方程為Y=2982.83X - 47.45(r=0.9999,n=6)。

2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取綠原酸對(duì)照品溶液10 μL,重復(fù)進(jìn)樣5次，結(jié)果以峰面積計(jì)算，RSD為0.12%，表明該精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次(批號(hào)20120301)的樣品5份，按2.3項(xiàng)下方法分別制成供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果，綠原酸的平均含量為3.854 mg/mL,RSD=0.9%(n=5),表明本試驗(yàn)方法重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果 取2.7項(xiàng)下一份供試品溶液，分別于0、2、4、6、8 h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD=1.07%(n=5)，表明該方法制備的供試品溶液在8h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率試驗(yàn) 精密吸取婦陰舒洗液(批號(hào)20120301)2.0 mL，各取5份，分別于每份樣品中分別加入綠原酸對(duì)照品, 按供試品制備方法制備及測(cè)定，結(jié)果回收率為：98.28%、RSD=0.80%(見表1)。

注：A： 陰性對(duì)照溶液;B： 綠原酸對(duì)照品溶液;C ： 供試品溶液。 圖1 HPLC圖譜

表1加樣回收率試驗(yàn)(n=5)

樣品含量(mg)加入對(duì)照品(mg)測(cè)得值(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)0．19270．19000．381299．210．19270．19000．380498．790．19270．19000．379498．2698．280．800．19270．19000．377397．160．19270．19000．378998．00

2.10 樣品含量測(cè)定 取不同批次的婦陰舒洗液供5批，按供試品制備方法制備及測(cè)定，結(jié)果(見表2)。

表2 5個(gè)批號(hào)婦陰舒洗液的含量測(cè)定結(jié)果

批號(hào)稱樣量(mL)平均值(mg/mL，n=3)總平均值(mg/mL)201202014．03．197RSD=1．1%201203014．03．854RSD=0．9%201003024．03．261RSD=1．2%3．639201204014．03．684RSD=0．9%201205014．04．368RSD=1．3%

3 討論

3.1 色譜條件的選擇 本文在色譜條件的選擇上，采用了3種不同品牌色譜柱：Hypersil ODS C18(250mm×4.6mm 5μm)、lichrspher5-C18(150mm×4.6mm 5μm) 、 Diamonsil HPLC C18(4.6×250mm 5μm)色譜柱；流動(dòng)相的選擇：甲醇-0.5%醋酸酐水溶液(20∶80)、甲醇-3%冰醋酸(8∶92)[5]、甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(15∶85∶1∶0.3)[6]、0.4%磷酸溶液-乙腈(85∶15)[7]等4種，在各系統(tǒng)條件下對(duì)綠原酸進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)以流動(dòng)相甲醇-0.5%醋酸酐水溶液(20∶80)進(jìn)行洗脫時(shí)，綠原酸在不同色譜柱上均能得到了良好的分離。

3.2 本研究考察了5個(gè)批次婦陰舒洗液中綠原酸含量，結(jié)果顯示婦陰舒洗液中綠原酸含量平均為3.639 mg/mL。采用高效液相色譜法對(duì)婦陰舒洗液中綠原酸含量進(jìn)行測(cè)定，此方法具有分離度大于1.5，且該試驗(yàn)方法精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、以及加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果滿意，可作為婦陰舒洗液生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制參考。

[1] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大詞典[M].上海：科學(xué)技術(shù)出版社，1997：1335.

[2]侯家玉，方泰惠.中藥藥理學(xué)[M].北京：中國中藥出版社,2007:53.

[3]國家藥典委員會(huì).中國人民共和國藥典(一部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社， 2010：205-206.

[4] 胡生俊，徐岳鑫，董塞文，等.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方金銀花顆粒中綠原酸含量[J].中國藥業(yè)，2011,20(3)：33.

[5]姜鋒衛(wèi).HPLC法測(cè)定清熱解毒注射液中綠原酸的含量[J].中國醫(yī)學(xué)工程，2011，19(9)：46-47.

[6]唐慧慧，蔡清宇.高效液相色譜法測(cè)定柴銀口服液中綠原酸含量[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2011，27(5)：442-443.

[7]史國舉.HPLC法測(cè)定雙花百合片中綠原酸的含量[J].中國當(dāng)代醫(yī)藥，2011,18(20)：38-39.

[收稿2013-03-03;修回2013-04-05]

(編輯：王福軍)

HPLCdeterminationforthecontentofchlorogenicacidinFuYinShulotions

Ranqijun,Xuyang,Dingning

(1.Department of Pharmacy, The Affiliated Hospital of Zunyi Medical University, Guizhou Zunyi 563099, China;2.Departmene of Pharmscy,Guiyang College of TCM,Guizhou Guiyang 550002 ,China)

ObjectiveTo establish the determination method for the content of chlorogenic acid inFuYinShulotions by HPLC.MethodsThe content of chlorogenic acid was determined by HPLC with Diamonsil column (4.6mm×250mm, 5μm) and column temperature of 25℃. The mobile phase was a mixture of methyl alcohol and 0.5% acetic anhydride (20∶80) with the flow rate of 1.0 mL/min and the detection wavelength of 327 nm.ResultsThe content of chlorogenic acid presented a good linearity from 0.25 μg to 2.50 ug (r=0.9999). The average recovery was 98.28% and RSD was 0.80% (n=5).ConclusionThis method is accurate and sensitive with a good reproducibility and could be used for the determination of chlorogenic acid content inFuYinShulotions.

Fuyinshulotions; chlorogenic acid; HPLC

R927.2

A

1000-2715(2013)03-0264-03

丁寧，男，副教授，研究方向：中藥現(xiàn)代化，E-mail:360669971@qq.com。