王石松

（河南省南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校第一附屬醫(yī)院血液科，南陽(yáng)473000）

基質(zhì)金屬蛋白酶－7（MMP－7）即基質(zhì)溶解素，在多種實(shí)體瘤中高表達(dá)并與腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移浸潤(rùn)有關(guān)。VEGF是血管形成的主要刺激因子，參與多種實(shí)體腫瘤的轉(zhuǎn)移。然而，MMP－7和VEGF在急性白血病表達(dá)的關(guān)系及意義尚未見報(bào)道。本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)SP法測(cè)定急性白血病中MMP－7和VEGF的表達(dá)，初步探討二者在急性白血病中表達(dá)的關(guān)系及意義。

1 材料與方法

1.1 材料來(lái)源 52例初治急性白血病患者為我院2010年2月至2012年8月住院患者，依據(jù)1986年FAB制定MIC分型標(biāo)準(zhǔn)確診，初治組52例 （急性淋巴細(xì)胞白血病17例，急性髓系白血病35例），其中男31例，女21例年齡15～65歲，平均46.5歲。浸潤(rùn)組 （肝脾淋巴結(jié)腫大）36例。無(wú)浸潤(rùn)組 （無(wú)肝脾淋巴結(jié)腫大）16例。對(duì)照組為健康志愿者22例，其中男13例，女9例；年齡17～66歲，平均44.2歲。

1.2 檢測(cè)方法 用免疫細(xì)胞化學(xué)SP法檢測(cè)骨髓單個(gè)核細(xì)胞 （BMMNC）中MMP－7和VEGF。MMP－7和VEGF單克隆抗體、S－P免疫標(biāo)記試劑盒為北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。髂后或髂前上嵴穿刺取骨髓，用淋巴細(xì)胞分離液 （比重1.077）分離BMMNC并涂片，干燥后用新鮮配制的丙酮溶液于室溫下固定30分鐘，用磷酸鹽緩沖液 （0.01mol／L，pH7.4）漂洗3次；0.1%Triton100通透10分鐘，再用PBS漂洗3次，然后根據(jù)試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作。每一批實(shí)驗(yàn)均設(shè)陽(yáng)性及陰性對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照采用胃癌切片 （由試劑公司提供），陰性對(duì)照以PBS代替一抗。

1.3 結(jié)果判定 細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒染色為陽(yáng)性。根據(jù)陽(yáng)性顆所占的面積及顯色程度，參照1997年全國(guó)免疫組化技術(shù)診斷標(biāo)準(zhǔn)化專題研討會(huì)意見，對(duì)陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行積分：細(xì)胞質(zhì)和 （或）核內(nèi)見淺黃色顆粒，明顯高于背景底色，陽(yáng)性顆粒所占細(xì)胞面積的比例＜50%為1分；細(xì)胞質(zhì)和 （或）核內(nèi)見較深黃色顆粒，陽(yáng)性顆粒所占細(xì)胞面積的比例為51%～70%為2分；細(xì)胞質(zhì)和（或）核內(nèi)見大量深黃色顆粒，漿和／或核有時(shí)可被顆粒掩蓋而不顯，陽(yáng)性顆粒所占細(xì)胞面積的比例＞70%為3分。每片統(tǒng)計(jì)500個(gè)細(xì)胞中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，結(jié)合每個(gè)細(xì)胞的積分算出總陽(yáng)性積分，平均陽(yáng)性積分＝總陽(yáng)性積分／500。并換算為每100個(gè)細(xì)胞的陽(yáng)性積分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，多組均數(shù)間采用t檢驗(yàn)，兩變量間相關(guān)性采用pearson相關(guān)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。

2 結(jié)果

2.1 MMP－7和VEGF陽(yáng)性產(chǎn)物呈棕黃色顆粒狀定位于胞漿內(nèi) 初治組MMP－7和VEGF平均積分顯著高于對(duì)照組 （P＜0.05）。肝脾淋巴結(jié)腫大組MMP－7和VEGF平均積分顯著高于無(wú)肝脾淋巴結(jié)腫大組 （P＜0.05）。見表1。

表1 MMP－7和VEGF在各組中平均積分 （分）表達(dá)的比較

2.2 MMP－7和VEGF在ALL中表達(dá)的關(guān)系 MMP－7和VEGF的過(guò)表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系，r＝0.5127，P＜0.05。

3 討論

MMP－7是基質(zhì)金屬蛋白酶 （matrixmetalloproteinasesMMPs）家族中重要成員之一，亦稱基質(zhì)溶素，其主要作用底物為層黏連蛋白 （LN）、纖維蛋白、蛋白多糖和核心蛋白，而LN亦為ECM的主要成分。既往研究已發(fā)現(xiàn)，LN作為構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)主體結(jié)構(gòu)的糖蛋白，首先介導(dǎo)了腫瘤細(xì)胞對(duì)基底膜的附著，然后在瘤細(xì)胞分泌的蛋白溶酶作用下發(fā)生分解，使腫瘤細(xì)胞得以突破基質(zhì)膜發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移［1］。在實(shí)體瘤中已經(jīng)證實(shí)與惡性腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)［2－3］。而腫瘤在浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移過(guò)程中在轉(zhuǎn)移部位必須形成新的血管，而血管結(jié)構(gòu)形成均需要ECM的降解和重建。近年有報(bào)道MMP－7與腫瘤脈管生成可能有關(guān)［4］。Conor C等［5］發(fā)現(xiàn) K562細(xì)胞高表達(dá) MMP－7，用 MMP－7單抗封閉MMP－7導(dǎo)致K562細(xì)胞侵潤(rùn)性顯著降低，提示高表達(dá)的MMP－7參與K562細(xì)胞的侵潤(rùn)。VEGF是血管形成的主要刺激因子，在急性髓細(xì)胞白血病 （AML）、ALL、慢性粒細(xì)胞白血病和慢性淋巴細(xì)胞白血病患者的骨髓和外周血白血病細(xì)胞中均發(fā)現(xiàn)有VEGF及其受體的表達(dá)［6］，Aguyo等［7］測(cè)定了90例未治的高白細(xì)胞性急性髓樣白血病 （AML）患者細(xì)胞內(nèi)VEGF水平，結(jié)果顯示，VEGF水平持續(xù)增高的患者完全緩解 （CR）率低，生存時(shí)間和無(wú)病生存期縮短。

在多種腫瘤中，VEGF的表達(dá)與MMP－7的表達(dá)密切相關(guān)，如老年骨肉瘤、乳腺癌、大腸癌等［8，9］。呂成方等［10］研究發(fā)現(xiàn)胃癌組織中VEGF以及MMP－7高表達(dá)與胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。Mitsiades等［11］認(rèn)為MMP－7能降解細(xì)胞膜上的Fas配體，抑制Fas介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，可能間接促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞分泌VEGF。而MMP－7和VEGF在急性白血病患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中表達(dá)的關(guān)系尚未見報(bào)道。本研究檢測(cè)了MMP－7和VEGF在急性白血病患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞的表達(dá)，結(jié)果表明急性白血病患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞MMP－7和VEGF的表達(dá)顯著高于對(duì)照組，提示高表達(dá)的MMP－7和VEGF可能參與急性白血病的發(fā)生。白血病預(yù)后差的一個(gè)很重要的因素就是其廣泛的浸潤(rùn)性，本研究發(fā)現(xiàn)浸潤(rùn)組 （肝脾淋巴結(jié)腫大）陽(yáng)性積分顯著高于無(wú)浸潤(rùn)組（無(wú)肝脾淋巴結(jié)腫大）（P＜0.05），進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)MMP－7和VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系，提示MMP－7和VEGF在急性白血病血管基質(zhì)的破壞與重建中起協(xié)同作用，促進(jìn)急性白血病髓外浸潤(rùn)。本文結(jié)果提示檢測(cè)急性白血病患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中MMP－7和VEGF的表達(dá)可作為預(yù)后的參考指標(biāo)，對(duì)化療方案的選擇有一定的指導(dǎo)意義。

［1］魯?shù)律?，周志耀，王章才，?前列腺癌層粘蛋白表達(dá)與其浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移相關(guān)性的研究［J］.江蘇醫(yī)藥雜志，2003，29（6）：437－9.

［2］黃建賢，朱寶和，黃林，等.MMP－2與 MMP－7在直腸癌中的表達(dá)及臨床意義［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2009，13（6）：773－775.

［3］趙振亞，宋曉昕.大腸管狀腺瘤癌變過(guò)程中MMP－7的表達(dá)及意義［J］.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2012，28（6）：620－623.

［4］Koskensaio S，Mrens J，Wiksten J P，etal.MMP－7overexpressin Is an independent prognostic mafker in gastric cancer［J］.Tumour Binl，2010，31（3）：149－155.

［5］ConorC.Lynch ＆ SusanMcDonnell，Theroleofmatrilysin（MMP－7）in leukaemia cellinvasion［J］.Clinical ＆Experimental Metastasis，2001，18（5）：401－406.

［6］Huasong JM，Rodgers GM，Shami PJ.Evidence of incteused euslogenesis in patients with acute mycloid leukemia［J］.Blood，2005，96（10）：3356－3357.

［7］Aguyo A.Estey E，Kantarjian H，et al.Ceuular vascular endothelial growth facter is a predictor 0foutcome in patients with acute myeloid leukemia［J］.Blood，2001，94（11）：3717－3721.

［8］沈興斌，王瑞婷，梅愛敏，等.VEGF及 MMP－7與大腸癌的關(guān)系［J］.腫瘤防治研究，2007，34（6），442－445.

［9］吳同申，孟彥.老年骨肉瘤組織中MMP－7和VEGF的表達(dá)及其意義［J］.中國(guó)老年學(xué)雜志，2012，32（3），606－607.

［10］呂成方，趙遠(yuǎn)，王永忠，等.胃癌組織中β－連環(huán)蛋白、基質(zhì)金屬蛋白酶－7的表達(dá)及意義［J］.江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2012，22（4）：346－349.

［11］Mitsiades N，Yu WH，Poulaki V，et al.Matrix metalloproteinase－7mediated cleavage of Fas ligand protects tumor cellsfrom chemotherapeutic drug eytotoxicity［J］.Cancer Res，2001，61（2）：577－581.