溫立義，溫博，董慧，姜澤*

(1.吉林省食品藥品檢驗所，吉林 長春 130033；2.吉林省職業(yè)病防治院，吉林 長春 130000；3.中國人民解放軍裝甲兵技術(shù)學(xué)院 門診部，吉林 長春 130000)

加味天麻膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

溫立義1，溫博2，董慧3，姜澤1*

(1.吉林省食品藥品檢驗所，吉林 長春 130033；2.吉林省職業(yè)病防治院，吉林 長春 130000；3.中國人民解放軍裝甲兵技術(shù)學(xué)院 門診部，吉林 長春 130000)

目的：完善加味天麻膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用TLC法對方中天麻、羌活、當(dāng)歸進行了鑒別；采用HPLC測定了天麻中天麻素的含量。結(jié)果：樣品TLC色譜中，天麻、羌活、當(dāng)歸的鑒別斑點清晰，重現(xiàn)性好；含量測定中天麻素在0.01～0.296 μg呈良好線性關(guān)系(r=1.000 0)，天麻素的平均回收率為98.18%，RSD=1.02%(n=6)。結(jié)論：實驗方法結(jié)果準(zhǔn)確，操作簡便，為該制劑的質(zhì)量控制和標(biāo)準(zhǔn)提升提供了科學(xué)依據(jù)。

加味天麻膠囊；TLC；HPLC；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

加味天麻膠囊是由天麻、玄參、羌活、木瓜、獨活、地黃、牛膝、穿山龍、杜仲(鹽炒)、千年健、當(dāng)歸、鹿骨(制)、白鮮皮、地骨皮、附子(制)15味中藥組成，收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》第二冊，具有強筋骨，祛風(fēng)濕，舒筋通絡(luò)，活血止痛功能。用于中風(fēng)經(jīng)絡(luò)引起的風(fēng)濕痹痛，肢體拘攣，手足麻木，腰腿酸痛等癥[1]。為有效地控制其內(nèi)在質(zhì)量，作者以天麻素作為指標(biāo)性成分，采用反相高效液相色譜法測定加味天麻膠囊中天麻素的含量。并對天麻、羌活、當(dāng)歸進行了薄層色譜鑒別。

1 儀器與試藥

Agilent 1200 series高效液相色譜儀，硅膠G薄層板(青島海洋化工分廠，批號：20090903)。

試劑均為色譜純及分析純；天麻素對照品(批號：0807-200205，供含量測定用)、羌活對照藥材(批號120935-200405，供鑒別用)、當(dāng)歸對照藥材(批號120927-200613，供鑒別用)，購自中國食品藥品檢定研究院；水為經(jīng)MILLIPOR純水器所得純化水。

加味天麻膠囊共收集了3個企業(yè)9個批次的樣品，分別為通化東寶藥業(yè)股份有限公司(批號：110902，110904，110302)；葵花藥業(yè)集團(佳木斯)有限公司(批號：201108002，201109003，201109001)；清華德人西安幸福制藥有限公司(批號：110603，110604，110201)，規(guī)格均為0.25 g/粒。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 天麻的鑒別 取本品20粒內(nèi)容物，研細，加乙醇50 mL，置水浴上加熱回流2 h，濾過，取濾液蒸干，加水2 mL溶解，置已處理好的D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1 cm，填充高度12 cm)上，用10 mL水洗脫(流速：0.5 mL·min-1)，棄去洗脫液，再用10%乙醇60 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用乙醇1 mL溶解，作為供試品溶液；另取天麻素對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10 μL，對照品溶液5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(8∶3.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%磷鉬酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。見圖1。

1～3.供試品(批號：110902，110904，110302) 4.天麻素對照品 5.缺天麻陰性樣品圖1 天麻薄層色譜圖

2.1.2 羌活的定性鑒別 取本品10粒內(nèi)容物，研細，置回流瓶中，加乙醇20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液濃縮至0.5 mL，作為供試品溶液。另取羌活對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010版一部附錄Ⅵ B)試驗，吸取上述2種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60 ℃)-乙醚-醋酸(10∶10∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視，供試品色譜中，在與羌活對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。見圖2。

1～3.供試品(批號：110902，110904，110302) 4.羌活對照藥材 5.缺羌活的陰性樣品圖2 羌活薄層色譜圖(紫外254 nm)

2.1.3 當(dāng)歸的定性鑒別 取本品10粒，研細，加乙醚20 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液作為供試品溶液。另取當(dāng)歸對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010版一部附錄Ⅵ B)試驗，吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中在與當(dāng)歸對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點[2]。見圖3。

1～3.供試品(批號：110902，110904，110302) 4.當(dāng)歸對照藥材 5.缺當(dāng)歸陰性樣品圖3 當(dāng)歸薄層色譜圖(紫外365 nm)

2.2 天麻含量測定[3]

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取在80 ℃減壓干燥1 h的天麻素對照品適量，加流動相制成每1 mL含0.02 mg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品20粒內(nèi)容物，研細，取2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇50 mL，稱定重量，加熱回流3 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 mL，置水浴上蒸干，用流動相溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按照處方量制得不含天麻的陰性對照溶液，依2.2.2方法制備溶液。

2.2.4 系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.01%磷酸溶液(2∶98)為流動相；檢測波長為220 nm[4]；理論板數(shù)按天麻素峰計算應(yīng)不低于5 000。精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL[5]，注入液相色譜儀，在上述色譜條件下測定，色譜圖見圖4～6。

圖4 天麻素對照品HPLC圖

圖5 加味天麻膠囊樣品HPLC圖(批號：110904)

圖6 缺天麻的陰性樣品HPLC圖

2.2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 精密稱取天麻素對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.0147 8 mg的溶液，分別精密吸取1，5，10，15，20 μL測定，以對照品濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程Y=2 570.5X+1.100 2，r=1.000 0。結(jié)果表明天麻素進樣量在0.01～0.296 μg呈線性關(guān)系，符合外標(biāo)法定量測定的要求。

2.2.6 精密度試驗 對同一份供試品溶液(批號：110904)，按2.2.4的色譜條件，連續(xù)測定6次，結(jié)果天麻素的平均峰面積為533.756，RSD=1.53%，結(jié)果表明儀器的精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗 對同一份供試品溶液(批號：110904)，按正文擬定的色譜條件，每隔2 h測定1次，共考察32 h，測定了5次，結(jié)果5次測定天麻素平均峰面積為537.481，RSD=1.42%(n=5)。試驗表明，供試品溶液在32 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 重復(fù)性試驗 取加味天麻膠囊(批號：110904)樣品，按2.2.2方法制備供試品溶液，共6份，在2.2.4色譜條件下測定，結(jié)果天麻素平均含量為0.305 mg/粒，RSD=0.34%，表明本法的重復(fù)性良好。

2.2.9 回收率試驗 取加味天麻膠囊(批號：110904，天麻素含量為1.219 6 mg·g-1)1.0 g，共6份，精密稱定，置已分別精密加入對照品溶液(0.251 6 mg·mL-1)5 mL(揮干溶劑)的具塞錐形瓶中，每份分別精密加入甲醇50 mL，稱定重量，加熱回流3 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液10 mL，蒸干，用流動相溶解并稀釋至25 mL容量瓶中，制成6份供試品溶液。在2.2.4色譜條件下測定，計算回收率，結(jié)果符合定量分析的要求，見表1。

表1 天麻素回收率試驗

2.2.10 樣品含量測定 取不同生產(chǎn)批號的樣品，分別按2.2.2方法制備溶液，在2.2.4色譜條件下測定9批樣品，結(jié)果見表2。

表2 加味天麻膠囊天麻素含量測定結(jié)果(n=2) mg/粒

3 討論

3.1 薄層鑒別

分別對方中天麻、羌活、當(dāng)歸在21 ℃、相對濕度(RH)47%，4℃、RH 27%，30℃、RH 72%條件下進行薄層色譜鑒別及方法學(xué)驗證，結(jié)果表明陰性對照無干擾，耐用性良好。

3.2 含量測定

比較稀乙醇回流提取3 h、甲醇超聲提取30 min，甲醇回流提取3 h，結(jié)果表明超聲提取方法含量較低，稀乙醇回流提取與甲醇回流提取的含量無明顯差異，且稀乙醇回流提取的雜質(zhì)較多，故選擇用甲醇回流提取3 h為本法提取方法。對色譜柱Agilent-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)、Kromasil-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)和Diamonsil-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)進行了比較，3種色譜柱均達到方法系統(tǒng)適用性的要求，證明該方法耐用性良好。

實驗所建立的方法簡便可行，重現(xiàn)性好，對控制和評價加味天麻膠囊產(chǎn)品質(zhì)量提供了依據(jù)。

[1] 國家藥典委員會.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑[S].第二冊.1990：87.

[2] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：54.

[3] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：124.

[4] 趙慧，肖燕.天麻膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國醫(yī)藥指南，2012(24)：59-60.

[5] 周立，賈俊，王凌，等.加味天麻膠囊中天麻素的含量測定[J].貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2009(5)：79-80.

QualityStandardStudyofJiaweitianmaCapsule

WEN Li-yi1，WEN Bo2，DONG Hui3，JIANG Ze1*

(1.JilinInstituteforFood&DrugControl，Changchun130033，China；2.OccupationdiseasepreventionandcontrolcenterofJilinProvince，Changchun130061，China；3.ArmourTechniqueInstituteofPLA，Changchun130000,China)

Objective：Perfecting the quality standard of Jiaweitianma capsule.Methods：Gastrodiae Rhizoma，Notopterygii Radix et Rhizoma，and Angelica Radix et Rhizoma were identified by TLC method.The content of gastrodin in Gastrodiae Rhizoma was determined by HPLC method.Results：In TLC chromatography，the spots of Gastrodiae Rhizoma，Notopterygii Radix et Rhizoma，andAngelica Radix et Rhizoma were clear and had a good reproducibility.In the content determination experiments，gastrodin had a good linear relationship in 0.01-0.296 μg (r=1.000 0).The average recovery of gastrodin is 98.18%，RSD=1.02%(n=6).Conclusion：The method is accurate and convenient，which provide a scientific basis for the quality control and standard enhancing of Jiaweitianma capsule.

Jiaweitianma capsule；TLC；HPLC；Quality standard

2013-01-21)

*

姜澤，E-mail：jiangze119@hotmail.com