戴瑋，肖蘇萍，郭凱，王繼永，趙潤(rùn)懷

(中國(guó)藥材公司，北京 100195)

GC測(cè)定苗藥大果木姜子中1，8-桉葉素的含量△

戴瑋，肖蘇萍，郭凱，王繼永，趙潤(rùn)懷*

(中國(guó)藥材公司，北京 100195)

目的：采用氣相色譜法建立大果木姜子中指標(biāo)性成分1，8-桉葉素的含量測(cè)定方法。方法：Agilent DB-624毛細(xì)管(30 m×0.25 mm，1.4 μm)色譜柱，載氣為高純氮?dú)?，進(jìn)樣口溫度為200 ℃，檢測(cè)器溫度為250 ℃，程序升溫：50 ℃保持5 min，5 ℃·min-1升溫至150 ℃保持1 min，10 ℃·min-1升溫至250 ℃，保持20 min。結(jié)果：1，8-桉葉素在0.307 8～3.078 mg·mL-1與峰面積呈良好線性關(guān)系，Y=364.287 47X+2.816 98(r=0.999 9)，平均加樣回收率為99.14%(RSD=3.14%)。結(jié)論：本方法操作簡(jiǎn)便、靈敏準(zhǔn)確，可用于大果木姜子的質(zhì)量控制。

1，8-桉葉素；大果木姜子；氣相色譜

苗藥大果木姜子為樟科植物米槁CinnamomummigaoH.W.Li的干燥成熟果實(shí)[1]，味苦、辛，性溫，能夠散寒祛濕、行氣止痛，臨床用于治療胸腹疼痛、胸悶腹脹、哮喘等[2]。大果木姜子是一些治療冠心病、心絞痛、胃脘疼痛苗藥制劑的主要原料[3]，另據(jù)研究發(fā)現(xiàn)其在治療偏頭痛方面具有廣闊的應(yīng)用前景。目前該藥被收錄在《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》中，作為地方標(biāo)準(zhǔn)僅有薄層色譜鑒別項(xiàng)目[4]，為了建立準(zhǔn)確、可靠的大果木姜子指標(biāo)性成分的含量測(cè)定方法，提升藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，作者采用氣相色譜法建立大果木姜子藥材中指標(biāo)性成分1，8-桉葉素的含量測(cè)定方法，并對(duì)不同采集時(shí)間、不同產(chǎn)地的藥材進(jìn)行了含量測(cè)定和質(zhì)量比較。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent7890A氣相色譜儀；Agilent7693自動(dòng)進(jìn)樣器；氫火焰離子化檢測(cè)器；氮?dú)淇瞻l(fā)生器(上海析友分析儀器有限公司)；DENVER電子分析天平(十萬分之一，北京賽多利斯儀器系列有限公司)；KQ3200超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司)。

1.2 試藥

1，8-桉葉素對(duì)照品(上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)20120412，純度>99%)；無水乙醇為分析純。

大果木姜子16批，分別采集自貴州羅甸、冊(cè)亨、貞豐、望謨及廣西天峨等地，經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院江維克教授鑒定為樟科樟屬植物米槁CinnamomummigaoH.W.Li的干燥果實(shí)。憑證標(biāo)本保存于中國(guó)藥材公司科技研發(fā)部。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent DB-624毛細(xì)管柱(30 m ×0.25 mm，1.4 μm)；載氣：高純氮?dú)?N2)；流速：1.5 mL·min-1；進(jìn)樣量：1 μL；分流比：25∶1；進(jìn)樣口溫度：200 ℃；升溫程序：50 ℃保持5 min，5 ℃·min-1升溫至150 ℃保持1 min，10 ℃·min-1升溫至250 ℃，保持20 min；檢測(cè)器溫度：250 ℃。對(duì)照品溶液及供試品溶液色譜圖如圖1。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取1，8-桉葉素對(duì)照品適量，精密稱定，加無水乙醇配制成6.156 mg·mL-1的溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取大果木姜子適量，粉碎過四號(hào)篩，取約1 g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加入無水乙醇8 mL，稱定重量，浸泡1 h，超聲處理30 min，放置至室溫，補(bǔ)足失重，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。

A.1,8-桉葉素對(duì)照品 B.大果木姜子供試品圖1 大果木姜子供試品及對(duì)照品GC圖

2.4 線性關(guān)系考察

取1，8-桉葉素對(duì)照品適量，精密稱定，加無水乙醇制成每1 mL含6.156 mg的溶液，分別精密吸取1，8-桉葉素對(duì)照品儲(chǔ)備液5.0，4.0，1.5，1.0，0.5 mL至10 mL量瓶中，分別加無水乙醇至刻度，搖勻。分別精密吸取上述溶液按上述色譜條件進(jìn)行分析，以對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=364.287 47X+2.816 98(r=0.999 9)，結(jié)果表明，1，8-桉葉素在0.307 8～3.078 mg·mL-1與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

取1，8-桉葉素對(duì)照品溶液，在上述色譜條件下，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，經(jīng)計(jì)算RSD=0.9%，表明本方法精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液，分別于0，2，4，8，12 h進(jìn)樣，測(cè)定1，8-桉葉素峰面積，結(jié)果RSD=0.5%，表明供試品溶液中1，8-桉葉素含量在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批大果木姜子樣品6份，按供試品溶液的制備方法制備，按照上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果樣品中1，8-桉葉素平均含量為17.82 mg·g-1，RSD=1.2%，說明本法重復(fù)性良好。

2.8 回收率試驗(yàn)

取已知1，8-桉葉素含量的大果木姜子6份，每份0.5 g，精密稱定，分別加入已知量對(duì)照品(8.244 mg)，按供試品溶液制備方法操作，按上述色譜條件進(jìn)行分析，計(jì)算平均回收率，結(jié)果見表1。

2.9 樣品含量測(cè)定

取不同產(chǎn)地、不同采收時(shí)間的大果木姜子樣品，按供試品制備方法處理，按上述色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見表2。

表1 1，8-桉葉素加樣回收率試驗(yàn)

表2 不同產(chǎn)地及采收時(shí)間大果木姜子中1，8-桉葉素含量測(cè)定

3 結(jié)論與討論

1，8-桉葉素具有解熱、消炎、鎮(zhèn)痛等作用，與大果木姜子的臨床功效相似，而且藥材中含量較高[5]。文獻(xiàn)報(bào)道以該藥為主的中藥制劑均以其中的1，8-桉葉素成分作為質(zhì)量控制指標(biāo)[6-7]，故本研究采用1，8-桉葉素作為大果木姜子質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分。

目前，大果木姜子揮發(fā)油的提取方法主要有CO2超臨界萃取、水蒸氣蒸餾提取、乙醇超聲提取。CO2超臨界萃取對(duì)儀器設(shè)備要求較高，水蒸氣蒸餾法耗時(shí)較長(zhǎng)、需要高溫加熱，乙醇超聲提取大果木姜子揮發(fā)油操作簡(jiǎn)單、提取效率高。有文獻(xiàn)報(bào)道[8]，以正交試驗(yàn)結(jié)合面積歸一化法考察大果木姜子揮發(fā)油的提取工藝，優(yōu)選出最佳提取工藝為加8倍量溶劑、浸泡1 h、超聲提取30 min。本研究采用上述提取方法，可以充分提取大果木姜子中的指標(biāo)性成分。

文獻(xiàn)報(bào)道采用氣相色譜面積歸一化法測(cè)定大果木姜子中1，8-桉葉素含量[8]，該方法要求所有組分都要出峰，且不同組分檢測(cè)器響應(yīng)不同，無法準(zhǔn)確定量。本研究采用外標(biāo)法建立含量測(cè)定方法，操作簡(jiǎn)單，可以準(zhǔn)確定量。

前期采用HP-5毛細(xì)管色譜柱建立含量測(cè)定方法，此時(shí)1，8-桉葉素與其他成分色譜信號(hào)疊加，無法完全分離。經(jīng)考察，DB-624毛細(xì)管柱能夠有效分離1，8-桉葉素與揮發(fā)油中的其他成分，可以用于大果木姜子中1，8-桉葉素的定量分析。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，樣品采集時(shí)間對(duì)1，8-桉葉素含量影響較大，成熟果實(shí)中1，8-桉葉素含量明顯高于未成熟果實(shí)。由于大果木姜子主要以揮發(fā)油部位入藥，儲(chǔ)存年限對(duì)其質(zhì)量影響較大，隨著儲(chǔ)存時(shí)間增加，1，8-桉葉素含量明顯降低。故以大果木姜子入藥宜選用當(dāng)年10月新采的成熟果實(shí)，建議其1，8-桉葉素含量不低于10.00 mg·g-1，以確保藥效。

通過前期實(shí)地考察，大果木姜子主要應(yīng)用于貴州南部、西南部及廣西北部的苗族、布依族聚集區(qū)，在主產(chǎn)地以外的藥材市場(chǎng)普遍存在以香樟子、木姜子等作為大果木姜子銷售的現(xiàn)象。經(jīng)本方法檢測(cè)，香樟子、木姜子等混用品種中均不含1，8-桉葉素，故該方法可以作為鑒別大果木姜子真?zhèn)蔚妮o助方法。通過表2數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，相同采收時(shí)間不同采收地點(diǎn)的大果木姜子中1，8-桉葉素含量差異較大。以2012年10月采收的樣品為例，1，8-桉葉素含量在15.51～20.90 mg·g-1，說明除采收時(shí)間外還有其他因素影響藥材質(zhì)量，有待進(jìn)一步深入研究。

致謝：感謝樣品采集和實(shí)驗(yàn)過程中貴陽中醫(yī)學(xué)院周濤老師和實(shí)習(xí)生王梓寧的支持與幫助。

[1] 李錫文.中國(guó)樟科植物志資料[J].植物分類學(xué)報(bào)，1978，16(2)：90-92.

[2] 鄭亞玉，邱德文，梁光義，等.貴州苗藥大果木姜子的研究及產(chǎn)業(yè)化[J].世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2005，7(2)：112-114.

[3] 周濤，楊占南，江維克，等.民族藥大果木姜子果實(shí)揮發(fā)油成分的變異及其規(guī)律[J].中國(guó)中藥雜志，2010，35(7)：852-856.

[4] 貴州省藥品監(jiān)督管理局.貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[S].貴陽：貴州科技出版社，2003：36.

[5] 張永萍，邱德文，鄭亞玉，等.大果木姜子揮發(fā)油的GC-MS分析[J].中國(guó)醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2003，18(2)：119-120.

[6] 劉宏偉，邱德文.苗藥心胃止痛軟膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，8(27)：250-252.

[7] 李江，劉英波，邱德文.苗藥大果木姜子油口服乳劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2008，19(5)：1143-1144.

[8] 張永萍，林亞平，邱德文，等.大果木姜子揮發(fā)油的提取工藝研究[J].中國(guó)中藥雜志，2005，30(14)：1120-1122.

Determinationof1，8-cineoleintheMiaoEthnicHerbCinnamomummigaoH.W.LibyGasChromatography

DAI Wei，XIAO Su-ping，GUO Kai，WANG Ji-yong，ZHAO Run-huai*

(ChinaNationalCorp.ofTraditional&HerbalMedicine，Beijing100195，China)

Objective：To establish a method of GC for the content determination of 1，8-cineole in the miao ethnic herbCinnamomummigaoH.W.Li.Methods：The sample was separated on an Agilent DB-624(30 m×0.25 mm，1.4 μm)fused silica capillary column with helium as the carrier gas.The inlet temperature was 200 ℃ and the FID temperature was 250 ℃.Temperature programming was started at 50 ℃，holding for 5min，then increased to 150 ℃ at a rate of 5 ℃·min-1.After holding for 1min，increased to 250 ℃ at a rate of 10 ℃·min-1，holding for 20 min.Results：The calibration curve of 1，8-cineole was linear in the range of 0.307 8-3.078 mg·mL-1，r=0.999 9.The average recovery of 1，8-cineole was 99.14%(RSD=3.14%).Conclusion：The method was simple，sensitive，accurate，and could be used for the quality control of Fructus Cinnamomi.

1，8-cineole；CinnamomummigaoH.W.Li；Fructus Cinnamomi；GC

2013-02-17)

國(guó)家重大新藥創(chuàng)制科技重大專項(xiàng)(2011ZX09102-003-05)

*

趙潤(rùn)懷，E-mail：zhaorunhuai@gmail.com