羅春燕

(青海省農(nóng)林科學(xué)院青藏高原野生植物資源研究所食用菌研究室，青海 西寧 810016)

雞腿菇 (Coprinus comatus)學(xué)名毛頭鬼傘，在分類學(xué)上隸屬真菌門(mén)、擔(dān)子菌亞門(mén)、層菌綱、傘菌目、鬼傘科、鬼傘屬，又稱雞腿蘑、刺蘑菇。雞腿菇肉質(zhì)細(xì)嫩，味道鮮美，蓋肥柄脆，潤(rùn)滑爽口，營(yíng)養(yǎng)豐富，含有人體所必需的8種氨基酸?，F(xiàn)代研究表明雞腿菇具有抗氧化、降血糖、防止肝損傷、抗腫瘤、提高免疫力、抑菌等功效，其子實(shí)體中含有治療糖尿病的有效成分，并能從中提取具有較高免疫活性和抗腫瘤活性的多糖類物質(zhì)［1］，是一種具有較高商業(yè)開(kāi)發(fā)價(jià)值和應(yīng)用前景的食藥兩用真菌，被WHO和FAO確定為具“天然、營(yíng)養(yǎng)、保健”3種功能為一體的16種珍稀食用菌之一。雞腿菇適應(yīng)性廣泛，栽培容易，其開(kāi)發(fā)和應(yīng)用前景廣闊。近年來(lái)，雞腿菇栽培面積逐年增加，農(nóng)業(yè)科技工作者對(duì)雞腿菇菌絲生長(zhǎng)條件［2，3］、培養(yǎng)基配方［4，5］、覆土出菇方式［6－9］、栽培料配方與其生長(zhǎng)發(fā)育及產(chǎn)量的關(guān)系等［10，11］進(jìn)行了大量研究。但有關(guān)雞腿菇液體和固體菌種制作及栽培的對(duì)比試驗(yàn)尚未見(jiàn)報(bào)道。隨著我國(guó)食用菌產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展，運(yùn)用液體菌種進(jìn)行生產(chǎn)，不但能大幅提高食用菌的產(chǎn)量和質(zhì)量，同時(shí)也符合食用菌產(chǎn)業(yè)向機(jī)械化、集約化和周年化生產(chǎn)發(fā)展的趨勢(shì)。目前，在推進(jìn)食用菌產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的過(guò)程中，液體菌種應(yīng)用和推廣是關(guān)鍵一環(huán)。本試驗(yàn)對(duì)雞腿菇液體和固體菌種制作及栽培進(jìn)行對(duì)比研究，旨在為雞腿菇液體菌種推廣應(yīng)用于生產(chǎn)提供參考，為雞腿菇的豐產(chǎn)栽培提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株

供試菌株雞腿菇1號(hào)，由青海省農(nóng)林科學(xué)院食用菌研究室提供。

1.1.2 培養(yǎng)基

試管培養(yǎng)基:PDA培養(yǎng)基;搖瓶種子培養(yǎng)基:麥麩4%、玉米粉 3%、葡萄糖 2%、酵母粉 0.5%、KH2PO40.35%、MgSO40.1%;原種培養(yǎng)基:麥粒99%、輕質(zhì)碳酸鈣l%，含水率60%，pH 7.5(用石灰水調(diào)節(jié));栽培培養(yǎng)基:棉籽殼88%、麥麩 4.5%、玉米粉 3%、石膏 2%、石灰 2%、尿素0.5%，含水率65%，pH 8.0(用石灰水調(diào)節(jié))。

1.1.3 主要儀器與設(shè)備

恒溫?fù)u床THZ－92A，上海浦東物理光學(xué)儀器廠;培養(yǎng)箱MJ－25085－II，上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司;單人單面凈化操作臺(tái)SW－CJ－IFD，蘇州凈化設(shè)備有限公司;電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱DHG－914385－III，上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司;電子天平BL－2200H;不銹鋼立式壓力滅菌鍋，上海搏訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠制造等。

1.2 方法

通過(guò)對(duì)雞腿菇液體和固體菌種生產(chǎn)周期、成本效益的分析，對(duì)比在菌種制作過(guò)程中的異同，并在同等條件下進(jìn)行栽培管理，分析比較出菇情況及產(chǎn)量差異。液體菌種接種栽培袋的接種量設(shè)為10 mL、20 mL和30 mL，分別為處理I、處理II和處理III，固體菌種接種栽培袋為處理IV，液固菌種接種栽培袋為處理V，處理IV和處理V接種量一致。各處理以100個(gè)菌袋為1個(gè)小區(qū)，各小區(qū)設(shè)3次重復(fù)。分析各處理的發(fā)菌速度、出菇整齊度、子實(shí)體發(fā)育情況及產(chǎn)量差異。本試驗(yàn)將處理IV和處理V均視為液體菌種，兩者區(qū)別在于制種過(guò)程中搖瓶液體菌種的應(yīng)用方式不同，處理IV的液體菌種是將搖瓶液體菌種直接接入栽培袋料中培養(yǎng)，處理V的液固菌種則是將搖瓶液體菌種直接接入麥粒原種培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，待原種滿瓶后再接入栽培袋。

1.2.1 液體菌種的制備

將25℃恒溫培養(yǎng)10 d的斜面試管母種，切取0.5 cm2接種塊3塊在超凈工作臺(tái)上接種于250 mL三角瓶中，三角瓶的裝液量為150 mL，靜置48 h后在25℃、200 r·min－1條件下恒溫?fù)u床培養(yǎng)7 d，得到搖瓶液體菌種，然后將搖瓶液體菌種用注射器按10 mL、20 mL和30 mL分別接入經(jīng)126℃高壓滅菌2 h后冷卻的栽培袋中，25℃培養(yǎng)，待菌絲滿袋得雞腿菇液體菌種。

1.2.2 固體菌種的制備

將麥粒煮熟后控水，與輕質(zhì)碳酸鈣拌勻裝瓶，126℃高壓滅菌2 h，冷卻后將25℃恒溫培養(yǎng)10 d的斜面試管母種，切取1 cm2大小的接種塊在超凈工作臺(tái)上接種于麥粒原種培養(yǎng)瓶中，25℃培養(yǎng)，待菌絲滿瓶得到麥粒原種。然后將麥粒原種接種于經(jīng)126℃高壓滅菌2 h后冷卻的栽培袋中，每瓶原種接15個(gè)栽培袋，25℃培養(yǎng)待菌絲滿袋得雞腿菇固體菌種。

1.2.3 液固菌種的制備

將1.2.1所得搖瓶液體菌種，按5 mL·瓶－1接種于經(jīng)126℃高壓滅菌2 h后冷卻的原種培養(yǎng)瓶中，25℃培養(yǎng)，待菌絲滿瓶后接種于經(jīng)高壓滅菌的栽培袋中 (同1.2.2)，待菌絲滿袋得雞腿菇液固菌種。

2 結(jié)果與分析

2.1 雞腿菇液體與固體菌種制作流程比較

固體菌種制作工藝流程:試管母種→原種→栽培種。

液固菌種制作工藝流程:試管母種→搖瓶液體菌種→原種→栽培種。

固體菌種制作工藝流程:試管母種→搖瓶液體菌種→栽培種。

2.2 雞腿菇液體與固體菌種發(fā)菌速度比較

雞腿菇液體與固體菌種各階段發(fā)菌時(shí)間對(duì)照情況見(jiàn)表1。

表1 雞腿菇液體與固體菌種各階段發(fā)菌時(shí)間對(duì)照

由表1可知，液體菌種發(fā)菌速度最快，用時(shí)最少，節(jié)省時(shí)間最多，從試管母種到栽培種的整個(gè)制作過(guò)程僅需44 d。固體菌種發(fā)菌速度最慢，用時(shí)最多，從試管母種到栽培種的制備需要約70 d。液固菌種則介于前兩者之間，這種菌種制作方式極大地縮短了原種培養(yǎng)時(shí)間，僅僅需要常規(guī)固體原種培養(yǎng)的1/4時(shí)間即可，也顯著提高了制種效率，可以根據(jù)菌種制作的實(shí)際情況選擇應(yīng)用。

液體菌種接種量為20 mL時(shí)，菌種長(zhǎng)滿菌袋的時(shí)間比接種量為10 mL的菌袋提前4 d～5 d，接種量為30 mL時(shí)與接種量為10 mL的滿袋時(shí)間沒(méi)有明顯差異，可見(jiàn)并不是接種量越多越好，接種量過(guò)多，超過(guò)一定的量后，對(duì)菌絲生長(zhǎng)速度的影響反而不明顯，并不能縮短菌種滿袋的時(shí)間，從節(jié)約成本和節(jié)省發(fā)菌時(shí)間兩方面綜合考慮，液體菌種的接種量為10 mL最優(yōu)，這樣既節(jié)約成本又不影響發(fā)菌速度。

2.3 雞腿菇液體與固體菌種制作過(guò)程比較

液體菌種制作工藝簡(jiǎn)單，培養(yǎng)時(shí)間明顯縮短，固體菌種制作用時(shí)較長(zhǎng)，幾乎需要液體菌種的2倍 (表1)。液體菌種接種速度快，操作簡(jiǎn)便，一小時(shí)可以接種約400瓶，而固體菌種一小時(shí)最多能接100瓶，可見(jiàn)，液體菌種的接種時(shí)間僅是固體菌種的1/4，極大地提高了接種效率，同時(shí)節(jié)省了將近3/4的人工，從而也就顯著降低了成本投入，提高了工作效率。另外，液體菌種接種快捷方便，有力避免了一些由于接種過(guò)程繁雜而在接種時(shí)難免造成的污染，同時(shí)，由于其發(fā)菌速度快，在培養(yǎng)發(fā)菌過(guò)程中也明顯降低了污染率，使得從接種到培養(yǎng)過(guò)程中菌袋成功率大大提高。試驗(yàn)得出液體菌種污染率僅是固體菌種的1/3左右。

2.4 雞腿菇液體與固體菌種出菇情況與產(chǎn)量比較

試驗(yàn)表明，在同等播種量、同等栽培管理?xiàng)l件下，液體菌種比固體菌種提前3 d～5 d冒菌，相應(yīng)的頭潮菇出菇時(shí)間也提前3 d～5 d，而且出菇整齊，密度大，成品菇率達(dá)80%以上，死菇少。液固菌種較固體菌種提前1 d～2 d出菇，出菇整齊度、密度與固體菌種無(wú)明顯差異，兩者成品菇率均為70%左右。3種菌種出菇產(chǎn)量統(tǒng)計(jì)見(jiàn)表2。

表2 雞腿菇液體菌種和固體菌種產(chǎn)量對(duì)照

由表2可知，在同等栽培環(huán)境條件下，雞腿菇液體菌種出菇產(chǎn)量最高，分別高出固體菌種和液固菌種的17.48%和8.08%。另外，液體菌種頭潮菇產(chǎn)量高，所占比重最大，而頭潮菇一般是品質(zhì)最優(yōu)的上等菇，市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力強(qiáng)，經(jīng)濟(jì)效益高。可見(jiàn)，液體菌種的出菇產(chǎn)量和效益都優(yōu)于固體菌種。

2.5 雞腿菇液體與固體菌種成本比較

雞腿菇液體與固體菌種成本比較見(jiàn)表3。

表3 液體菌種和固體菌種投入成本比較

由于液體菌種和固體菌種制作流程不同，成本投入也有差異。液體菌種制作流程簡(jiǎn)單，所需原材料較少，成本投入低，固體菌種制作流程相對(duì)繁雜，原材料用量較大，所需成本是液體菌種的3倍之多，而液固菌種介于兩者之間。另外，從菌種制作流程比較，固體菌種制備所需要的場(chǎng)地大，并且菌種培養(yǎng)需要的時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，液體菌種制作簡(jiǎn)便快捷，所需要的制種場(chǎng)地小，靈活方便，可以節(jié)省一部分場(chǎng)地租用費(fèi)和水電能的消耗。同時(shí)，由于液體菌種接種速度快，效率高，與固體菌種相比，節(jié)省了將近3/4的人工，從而也就節(jié)省了相當(dāng)大的一部分成本投入。試驗(yàn)表明，雞腿菇液體菌種的總成本投入不到固體菌種的1/3。

3 結(jié)論與討論

在食用菌產(chǎn)業(yè)中，菌種生產(chǎn)作為這一產(chǎn)業(yè)的首道工序，關(guān)系著這一產(chǎn)業(yè)的成敗，其重要性不言而喻。近年來(lái)，液體菌種以其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)越來(lái)越受到食用菌生產(chǎn)者和企業(yè)的青睞，對(duì)雞腿菇液體菌種和固體菌種制作流程及栽培出菇試驗(yàn)進(jìn)行了對(duì)比研究。結(jié)果得出，首先，與固體菌種相比，液體菌種發(fā)菌速度快、培養(yǎng)時(shí)間短，從試管母種到栽培種僅需要44 d，而固體菌種需要近70 d，節(jié)省了制種時(shí)間，縮短了生產(chǎn)周期;其次，液體菌種菌齡整齊一致、出菇早、產(chǎn)量高、品質(zhì)好，較固體菌種大大提高了產(chǎn)品經(jīng)濟(jì)效益和市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力;再次，液體菌種制作簡(jiǎn)單、場(chǎng)地靈活、接種簡(jiǎn)便快捷、污染率低、節(jié)省人工、能耗低，從而大幅度降低了生產(chǎn)投入，成本不到固體菌種的1/3，這樣就顯著提高了生產(chǎn)效益，增加了生產(chǎn)者的積極性，并有利于食用菌規(guī)模化、工廠化生產(chǎn)。目前，隨著食用菌產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，傳統(tǒng)的食用菌生產(chǎn)模式越來(lái)越不能滿足食用菌日益發(fā)展的要求，液體菌種已成為當(dāng)前食用菌制種產(chǎn)業(yè)的發(fā)展趨勢(shì)。因此，利用液體發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行食用菌工業(yè)化制種的深入研發(fā)已成為當(dāng)前推動(dòng)食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要內(nèi)容，本試驗(yàn)的研究為雞腿菇液體菌種在生產(chǎn)中的進(jìn)一步推廣應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)，提供了理論依據(jù)。

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