孫淑靜，劉建忠，胡開輝，張燎原

(福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，福建 福州 350002)

真姬菇Hypsizigus marmorens(Peck)H.E.Bigelo，又名玉蕈、斑玉蕈、蟹味菇等，隸屬擔(dān)子菌亞門、層菌綱、傘菌目、白蘑科、玉蕈屬，營養(yǎng)豐富，風(fēng)味獨(dú)特，深受消費(fèi)者青睞。自上世紀(jì)80年代以來，真姬菇已在我國開始了商品化種植［1］，現(xiàn)已成為全國食用菌重要的工廠化生產(chǎn)品種之一。在栽培生產(chǎn)中其生產(chǎn)周期較長 (120 d～140 d)［2］，菌體的生長速度較慢，抑制雜菌的能力較差［3］，易染菌，而且易受栽培環(huán)境和栽培條件的影響，在生產(chǎn)中受到一定的限制。鳳尾菇(Pleurotus sajor－caju)在真菌分類學(xué)上隸屬擔(dān)子菌綱、傘菌目、側(cè)耳科、側(cè)耳屬，是一種腐生性真菌，降解纖維素、半纖維素、木質(zhì)素的能力較強(qiáng)，生產(chǎn)周期短，產(chǎn)量高，栽培粗放，抗雜菌能力較強(qiáng)的食用菌品種之一。朱海嘯等［4］研究發(fā)現(xiàn)鳳尾菇產(chǎn)漆酶能力較強(qiáng)，真姬菇9600無漆酶活性。漆酶具有降解木質(zhì)素，氧化降解酚類物質(zhì)，抑制雜菌，改善出菇品質(zhì)等作用［5］。因此，利用漆酶在食用菌生長中的功能并結(jié)合兩親本生產(chǎn)性能的差異，培育高產(chǎn)、生產(chǎn)周期短的真姬菇優(yōu)良新品種，將會(huì)極大地促進(jìn)真姬菇的工業(yè)化生產(chǎn)，降低真姬菇栽培的成本，同時(shí)提高品種的抗逆性，解決真姬菇工廠化栽培的關(guān)鍵技術(shù)問題，這對(duì)促進(jìn)食用菌業(yè)向著工廠化方向穩(wěn)步快速發(fā)展有著重要的意義。

真姬菇閩真1號(hào) (即金山1號(hào))本著以上育種目標(biāo)，采用酶學(xué)與原生質(zhì)體融合相結(jié)合的現(xiàn)代生物技術(shù)，以漆酶為融合菌株篩選新標(biāo)記于2008年育成。閩真1號(hào)相對(duì)其他真姬菇品種而言，在豐產(chǎn)性、生產(chǎn)周期、營養(yǎng)品質(zhì)、抗病性等方面具有明顯的提高，其大規(guī)模推廣應(yīng)用對(duì)提高社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益具有十分重要的意義，應(yīng)用前景廣闊。為加速該成果的快速轉(zhuǎn)化，近年來分別在省內(nèi)進(jìn)行多年多點(diǎn)的出菇試驗(yàn)，現(xiàn)將營養(yǎng)成分測(cè)定及農(nóng)藝性狀鑒定結(jié)果總結(jié)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株

真姬菇9600(灰色品種)和鳳尾菇為本實(shí)驗(yàn)室保存菌種，白玉菇 (白色品種)是工廠化栽培菌種，閩真1號(hào) (灰色品種)為真姬菇9600原生質(zhì)體與滅活鳳尾菇原生質(zhì)體融合選育的菌株，原名為金山1號(hào)［6］。

1.1.2 供試培養(yǎng)基

(1)PDA培養(yǎng)基

馬鈴薯200 g、蔗糖20 g、瓊脂20 g，加水至1 000 mL，pH自然。

(2)袋栽培養(yǎng)基

棉籽殼16%、木屑25%、玉米芯20%、麥麩23%、草粉10%、玉米粉5%、生石灰l%，含水量65%。

1.2 方法

1.2.1 營養(yǎng)成分測(cè)定

營養(yǎng)成分測(cè)定參照國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。水分:常壓干燥失重法，GB5009.3－2003;灰分:重量法，GB5009.4－2003;蛋白質(zhì):微量凱氏定氮法，GB5009.5－2003;粗脂肪:索氏提取法，GB5009.6－85;粗纖維:中性洗滌劑法，GB5009.10－2003;氨基酸:HPLC法，樣品處理按GB/T 5009.124－2003(色氨酸、胱氨酸除外)、JY/T 024－1996測(cè)定，色氨酸測(cè)定樣品處理按GB/T 18246－2000堿水解法，胱氨酸測(cè)定用過甲酸氧化。

1.2.2 工廠化栽培和數(shù)據(jù)分析

采用17 cm×40 cm×0.05 cm的聚丙烯塑料袋栽培出菇，每袋裝干料約400 g，高壓滅菌、接種，24℃恒溫培養(yǎng)70 d～80 d，然后轉(zhuǎn)入菇房開袋，進(jìn)行低溫 (17℃)刺激促進(jìn)原基的形成，原基形成后15℃進(jìn)行出菇管理，每種每批試栽培1 000袋～2 000袋，分3批進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用軟件 DPS 7.05分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 閩真1號(hào)子實(shí)體主要成分測(cè)定分析結(jié)果

閩真1號(hào)子實(shí)體 (鮮菇)主要成分含量與親本真姬菇9600相比具有明顯的差異，見表1。

表1 閩真1號(hào)與真姬菇主要營養(yǎng)成分

從表1可以看出，脂肪酸、總碳水化合物及鈉含量均低于真姬菇。蛋白質(zhì)總量與真姬菇相同，但17種氨基酸含量有明顯的變化，精氨酸、蘇氨酸、蛋氨酸及谷氨酸含量均高于親本，其中以精氨酸最為顯著，提高了7倍;天冬氨酸、絲氨酸、甘氨酸等氨基酸的含量與真姬菇相同;組氨酸、脯氨酸、丙氨酸、纈氨酸等氨基酸含量略有降低。經(jīng)品嘗發(fā)現(xiàn)閩真1號(hào)比真姬菇9600更鮮嫩，質(zhì)地更爽脆，苦味有所降低，這也說明子實(shí)體中總碳水化合物、鈉及各種氨基酸含量的變化直接影響鮮菇的口感。真姬菇子實(shí)體氨基酸含量最高的是谷氨酸 (0.34 g·kg－1)和天冬氨酸 (0.15 g·kg－1)，說明具有較強(qiáng)的鮮味，與實(shí)際相符，并與文獻(xiàn)報(bào)道一致［7］。

2.2 閩真1號(hào)的特征特性與農(nóng)藝性狀鑒定

2.2.1 主要特征特性

融合菌株閩真1號(hào)與真姬菇9600主要形態(tài)特征見表2。

表2 閩真1號(hào)與真姬菇9600形態(tài)特征

2.2.2 主要產(chǎn)量與品質(zhì)性狀表現(xiàn)

閩真1號(hào)龍巖新羅區(qū)火火食用菌有限公司試產(chǎn)量與品質(zhì) 性狀鑒定結(jié)果見表3和表4。

表3 真姬菇閩真1號(hào)農(nóng)藝性狀

表4 真姬菇閩真1號(hào)產(chǎn)量及生物效率

閩真1號(hào)70 d開袋出菇平均產(chǎn)量302 g·袋－1(成品菇)，比對(duì)照真姬菇9600(平均產(chǎn)量221 g·袋－1)增產(chǎn)36.7%，生物學(xué)效率提高16%以上。80 d開袋出菇平均產(chǎn)量327 g·袋－1(成品菇)，比對(duì)照真姬菇9600增產(chǎn)25.8%，成對(duì)樣本產(chǎn)量檢驗(yàn)分析結(jié)果表明，閩真1號(hào)與出發(fā)菌株真姬菇9600相比增產(chǎn)達(dá)到極顯著水平，與生產(chǎn)菌株白玉菇相比增產(chǎn)達(dá)顯著水平。整個(gè)生產(chǎn)周期比出發(fā)菌株9600提前5 d～8 d，菌袋長滿時(shí)間為28 d～32 d，菇蕾形成時(shí)間為8 d～11 d，菇體成熟時(shí)間為23 d～25 d，在70 d開袋即可達(dá)到預(yù)期產(chǎn)量，不同開袋時(shí)間獨(dú)立樣本產(chǎn)量分析檢驗(yàn)結(jié)果表明，70 d開袋和80 d開袋出菇對(duì)閩真1號(hào)產(chǎn)量沒有顯著性影響，而對(duì)出發(fā)菌株9600和生產(chǎn)菌株白玉菇產(chǎn)量有顯著性影響。菌蓋直徑1.2 cm～2.5 cm，每袋子實(shí)體有效個(gè)數(shù)30個(gè)～45個(gè)，具體商品性狀優(yōu)于出發(fā)菌株，味道鮮且微苦。

2.3 閩真1號(hào)豐產(chǎn)性、穩(wěn)定性、適應(yīng)性表現(xiàn)

2.3.1 品種豐產(chǎn)性區(qū)試鑒定

閩真1號(hào)于2008年6月～2010年10月期間，分別在龍巖市新羅區(qū)火火食用菌有限公司、龍巖泰和強(qiáng)農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司、武平英源食用菌有限公司進(jìn)行出菇試驗(yàn)，分別邀請(qǐng)有關(guān)專家進(jìn)行測(cè)產(chǎn)驗(yàn)收，結(jié)果見表5。

由表5可以看出，閩真1號(hào)3年平均產(chǎn)量308 g·袋－1，出發(fā)菌株真姬菇9600平均產(chǎn)量為254 g·袋－1，平均增產(chǎn)21.3%，白玉菇3年平均產(chǎn)量294 g·袋－1，平均增產(chǎn)4.8%。不同年度品種產(chǎn)量、不同試點(diǎn)品種產(chǎn)量生物統(tǒng)計(jì)方差分析結(jié)果表明，不同年度和不同試點(diǎn)間閩真1號(hào)、出發(fā)菌株真姬菇9600和生產(chǎn)菌株白玉菇間產(chǎn)量沒有顯著性差異，說明3個(gè)品種在不同年度、不同試點(diǎn)產(chǎn)量穩(wěn)定。不同品種間產(chǎn)量方差分析結(jié)果表明，閩真1號(hào)與出發(fā)菌株真姬菇9600相比增產(chǎn)達(dá)到極顯著水平，與生產(chǎn)菌株白玉菇相比增產(chǎn)達(dá)到顯著性差異。閩真1號(hào)出菇較整齊，色澤和菇體的商品性狀明顯優(yōu)于出發(fā)菌種真姬菇9600。

表5 閩真1號(hào)參加2008年～2010年福建省有關(guān)食用菌公司產(chǎn)量表現(xiàn)

2.3.2 品種穩(wěn)定性、適應(yīng)性鑒定

(1)產(chǎn)量穩(wěn)定性鑒定

采用Finlay的品種穩(wěn)定測(cè)定方法，估算參試品種的產(chǎn)量穩(wěn)定性，結(jié)果見表6。

表6 各參試品種的穩(wěn)定性回歸方程

Finlay評(píng)定品種穩(wěn)定性標(biāo)準(zhǔn):當(dāng)b=1表示該品種具有平均穩(wěn)定性;當(dāng)b＞1表示該品種低于平均穩(wěn)定性;當(dāng)b＜1表示該品種高于平均穩(wěn)定性。

綜合產(chǎn)量平均值和穩(wěn)定性參數(shù)看，閩真1號(hào)、白玉菇的b值接近于1，由于閩真1號(hào)產(chǎn)量平均值高于全體平均值，所以認(rèn)為閩真1號(hào)是適應(yīng)性廣，穩(wěn)定性強(qiáng)，生長量大的菌株，適宜在試驗(yàn)區(qū)內(nèi)大范圍推廣。

白玉菇產(chǎn)量平均值接近全體平均數(shù)，但高于對(duì)照真姬菇9600，b值接近于1和低于1，所以是一個(gè)理想的推廣品種。

真姬菇9600的b值大于1，適宜在環(huán)境較好的條件下栽種。

(2)品種穩(wěn)定性鑒定

閩真1號(hào)經(jīng)多次傳代后仍能使RB－PDA平板變色，說明具有漆酶活性，試驗(yàn)結(jié)果與初篩一致。組織分離法獲得的閩真1號(hào)純培養(yǎng)菌種能使RB－PDA平板變色，漆酶基因的PCR擴(kuò)增結(jié)果與初次擴(kuò)增結(jié)果一致。說明本研究采用RB－PDA平板顯色法篩選具有漆酶活性的閩真1號(hào)，其具有良好的遺傳穩(wěn)定性。多次出菇試驗(yàn)結(jié)果顯示，閩真1號(hào)生物學(xué)效率明顯高于出發(fā)菌株，且生產(chǎn)周期與出發(fā)菌株相比有一定的縮短。

(3)抗病性

經(jīng)龍巖市植保站鑒定，閩真1號(hào)在生產(chǎn)中不易染菌，抗雜菌污染的能力與對(duì)照菌種真姬菇9600相比有顯著提高，無病蟲害發(fā)生。

3 小結(jié)與討論

閩真1號(hào)子實(shí)體主要營養(yǎng)成分測(cè)定結(jié)果顯示，其具有較高的營養(yǎng)價(jià)值。菇廠栽培生產(chǎn)試驗(yàn)及農(nóng)藝性狀的鑒定顯示，閩真1號(hào)3年平均產(chǎn)量308 g·袋－1，出發(fā)菌株真姬菇9600平均產(chǎn)量為254 g·袋－1，平均增產(chǎn)21.3%，增產(chǎn)達(dá)到極顯著水平，閩真1號(hào)出菇較整齊，色澤和菇體的商品性狀明顯優(yōu)于出發(fā)菌種真姬菇9600，出菇可提前5 d～8 d。閩真1號(hào)相對(duì)其他真姬菇品種而言，菇型緊湊、整齊，短腿菇、大蓋菇較少，商品性狀明顯優(yōu)于真姬菇，在豐產(chǎn)性、生產(chǎn)周期、營養(yǎng)品質(zhì)、抗病性等方面具有明顯的提高，表現(xiàn)出閩真1號(hào)具有良好的生產(chǎn)應(yīng)用價(jià)值，其大規(guī)模推廣應(yīng)用對(duì)提高社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益具有十分重要的意義，應(yīng)用前景廣闊。

［1］劉蕾，寧麗，郭立忠，等.12個(gè)真姬菇菌株拮抗試驗(yàn)及部分同工酶分析 ［J］.食用菌，2008(1):12－14.

［2］胡開輝，黃桂英，顏松，等.斑玉蕈低溫脅迫下菌絲體酶活變化及差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究 ［J］.菌物學(xué)報(bào)，2009，28(4):584－590.

［3］胡開輝，出小平.外界因子對(duì)蟹味菇菌絲特性的影響［J］.中國食用菌，2008，27(2):16－18.

［4］朱海瀟，黃桂英，胡開輝，等.鳳尾菇漆酶性質(zhì)及應(yīng)用的研究［J］.福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2008，23(1):48－52.

［5］ Zhao J，Kwan HS.Characterization，molecular cloning，and differential expression analysis of laccase genes from the edible mushroom Lentinula edodes ［J］.Applied and Environmental Microbiology，1999，65(11):4908－4913.

［6］劉建忠，孫淑靜，胡開輝，等.真姬菇融合菌株生物學(xué)特性及生產(chǎn)性能的研究 ［J］.中國食用菌，2010，29(3):22－25.

［7］王耀松，邢增濤，馮志勇，等.真姬菇營養(yǎng)成分的測(cè)定與分析［J］. 菌物研究，2006，4(4):33－37.