向 芳 張國(guó)豪 張信江 (遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院皮膚科，貴州 遵義 563003)

“壽星寶”保健酒是由淫羊霍、丹參、黃精等中藥和貴州茅臺(tái)酒經(jīng)現(xiàn)代工藝研制而成的一種藥酒，具有益氣活血、補(bǔ)腎防衰的功效。藥酒是中藥的一種劑型，有“酒的作用和藥物功效”的雙重作用。本實(shí)驗(yàn)從衰老生化指標(biāo)的角度來(lái)探討“壽星寶”保健酒對(duì)小鼠皮膚的抗衰老功效及其作用機(jī)制，為其實(shí)際應(yīng)用和功能學(xué)評(píng)價(jià)提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)12月齡的昆明種小鼠，雌雄兼用，體重45～55 g，由第三軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 受試藥物 藥酒以淫羊霍、丹參、黃精、葛根、紅花5種優(yōu)質(zhì)中藥材為主要原料，以貴州茅臺(tái)酒廠生產(chǎn)的酒度為53%醬香型的茅臺(tái)酒作為基酒，經(jīng)浸泡、過(guò)濾、提取制成。經(jīng)毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)后，作為本實(shí)驗(yàn)的受試藥物。

1.3 主要試劑與儀器 超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)試劑盒 、丙二醛(MDA)試劑盒、皮膚羥脯氨酸(Hyp)試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。SHHW21.420A型電熱恒溫水箱、Multiskan Spectrum全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀、FC104電子分析天平、Soniprep150型超聲波分解器、Thermo Heraeus Multifuge X1R冷凍離心機(jī)，實(shí)驗(yàn)儀器均由學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室提供。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 實(shí)驗(yàn)步驟 80只昆明種老齡小鼠隨機(jī)分成老齡對(duì)照組，保健酒低、中及高劑量組，每組20只。保健酒樣品按人體(60 kg)推薦劑量為每人 60 ml/d，設(shè)計(jì)為 5、10、20 ml·kg－1·d－1三個(gè)劑量組，其中 10 ml·kg－1·d－1相當(dāng)于人體推薦用量。對(duì)照組給予等量生理鹽水，各組均采用灌胃法，2次/d，連續(xù)3個(gè)月。給藥期間各組每周重新稱重1次，按體重的變化重新計(jì)算藥酒的劑量。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后小鼠斷頸處死，取背部皮膚迅速冷凍保存，擬作皮膚組織勻漿及測(cè)定皮膚抗衰老指標(biāo)用。

1.4.2 10%皮膚勻漿的制備 取脫毛后背部皮膚組織0.5 g左右，經(jīng)冷生理鹽水漂洗，除去皮下脂肪和血液，濾紙拭干，稱重量，放入小燒杯內(nèi)。用移液器量取該組織塊重量9倍冷生理鹽水，先取2/3量倒入裝有組織塊燒杯中，剪碎組織塊后倒入勻漿管中，將剩余1/3生理鹽水沖洗燒杯壁，一起倒入勻漿管中進(jìn)行勻漿，充分研碎使組織勻漿化。再將制備好的勻漿以轉(zhuǎn)速2 000 r/min離心15 min，取上清液備用。

1.4.3 皮膚組織勻漿生化指標(biāo)測(cè)定 皮膚組織勻漿SOD、GSH-Px活力、MDA及Hyp含量的測(cè)定，參照南京建成生物工程公司SOD、GSH-Px、MDA及Hyp試劑盒說(shuō)明書方法測(cè)定。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，數(shù)據(jù)以±s表示，各組間比較用單因素方差分析(ANOVA)進(jìn)行檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

保健酒對(duì)小鼠皮膚SOD活力、GSH-Px活力、MDA及Hyp含量的影響見表1。與老齡對(duì)照組相比，保健酒低、中、高劑量組小鼠皮膚SOD活力均明顯升高，MDA含量明顯降低(P＜0.01)，而GSH-Px活力、Hyp含量亦明顯升高(P＜0.05)。其中中劑量組SOD活力、Hyp含量明顯高于低劑量組，MDA含量明顯低于低劑量組(P＜0.01)，中劑量組GSH-Px活力高于低劑量組(P＜0.05)。高劑量組SOD活力、Hyp含量、GSH-Px活力均明顯高于低劑量組，MDA含量明顯低于低劑量組(P＜0.01)。高劑量組SOD活力、GSH-Px活力、Hyp含量高于中劑量組，MDA含量低于中劑量組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，提示“壽星寶”保健酒低、中、高劑量組均能明顯提高小鼠皮膚SOD活力、GSH-Px活力、Hyp含量及降低MDA含量。其中高劑量組和中劑量組功效明顯強(qiáng)于低劑量組，而高劑量組和中劑量組功效相當(dāng)。

表1 “壽星寶”保健酒對(duì)小鼠皮膚SOD活力、GSH-Px活力、MDA及Hyp含量的影響(±s，n=20)

表1 “壽星寶”保健酒對(duì)小鼠皮膚SOD活力、GSH-Px活力、MDA及Hyp含量的影響(±s，n=20)

與老齡對(duì)照組比較:1)P＜0.01，2)P＜0.05;與保健酒低劑量組比較:3)P＜0.01，4)P＜0.05

組別 劑量(ml/kg)SOD活力(U/mgprot) GSH-Px活力(U/mgprot) MDA含量(nmol/mgprot) Hyp含量(μg/mg)13.48±1.88 33.73±5.33 2.37±0.47 1.69±0.24保健酒低劑量組 5 16.98±2.941) 37.85±6.242) 1.60±0.371) 1.90±0.222)保健酒中劑量組 10 20.99±2.591)3) 42.74±6.922)4) 1.24±0.301)3) 2.21±0.272)3)保健酒高劑量組 20 22.65±3.691)3) 45.30±6.572)3) 1.06±0.291)3) 2.30±0.392)3)老齡對(duì)照組 －

3 討論

皮膚衰老是機(jī)體衰老的重要外在表現(xiàn)之一，而機(jī)體衰老源于細(xì)胞的衰老。自由基累積損傷是皮膚衰老的重要因素。隨著機(jī)體的衰老，體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)功能衰退，抗氧化酶的活性不斷降低，自由基過(guò)量積聚，就會(huì)引起機(jī)體損傷，將不飽和脂肪酸氧化成超氧化物，形成脂褐素。氧自由基過(guò)多還會(huì)破壞細(xì)胞膜及其他重要成分，使蛋白質(zhì)和酶變性，最后造成細(xì)胞組織功能及形態(tài)結(jié)構(gòu)損害，使皮膚表現(xiàn)出變性、萎縮、粗糙無(wú)光、彈性減退、皺紋顯現(xiàn)等。同時(shí)，氧化性損傷造成體內(nèi)具有合成膠原能力的成纖維細(xì)胞受損，從而使膠原蛋白合成也受到影響，加之細(xì)胞內(nèi)羥化酶在自由基攻擊下失去羥化功能，使羥脯氨酸的生成也減少，最終導(dǎo)致膠原纖維合成障礙〔1〕。SOD作為機(jī)體清除自由基的主要酶類，是抗衰老研究中公認(rèn)的參考指標(biāo)之一。由于各種原因引起的皮膚中SOD活性降低，會(huì)使自由基過(guò)度的攻擊正常細(xì)胞，破壞各種生物膜，使細(xì)胞發(fā)生衰老，功能喪失。MDA是體內(nèi)多價(jià)不飽和脂肪酸組分受活性氧作用后過(guò)氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，由其含量可推斷體內(nèi)自由基生成的多少及自由基對(duì)機(jī)體的損傷程度。GSH是一種低分子清除劑，它可以清除超氧陰離子、過(guò)氧化氫等，能夠穩(wěn)定含巰基的酶和防止血紅蛋白及其他輔助因子受氧化損傷，因此GSH量的多少是衡量機(jī)體抗氧化能力大小的重要因素。Hyp是真皮內(nèi)含量豐富而且比較穩(wěn)定的氨基酸，它的含量可以直接反映出真皮內(nèi)膠原纖維的含量變化，而膠原纖維的含量變化可以提示皮膚老化的程度。

現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明:淫羊霍中所含的黃酮及苷類具有清除自由基的能力，其抗氧化活性較強(qiáng)〔2〕。丹參中的丹參酮可減少自由基的產(chǎn)生，提高抗氧化酶活性，同時(shí)還可使成纖維細(xì)胞活性增強(qiáng)，膠原蛋白合成增加〔3〕。黃精中的黃精多糖可顯著提高抗氧化酶活性，增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力〔4〕。黃精外用有促進(jìn)膠原纖維合成，延緩衰老，改善皮膚功能狀態(tài)的作用〔5〕。葛根所含的葛根黃酮可提高抗氧化酶活性，增強(qiáng)其對(duì)自由基的清除能力，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化，降低體內(nèi)MDA的生成，從而起到保護(hù)機(jī)體組織的作用〔6〕。紅花中有效成分紅花黃色素有抗氧化活性，具有較強(qiáng)的清除羥自由基和超氧陰離子自由基的能力，尤其對(duì)羥自由基的清除效果很好，清除率達(dá)98.31%〔7〕。貴州茅臺(tái)酒具有獨(dú)特的釀造工藝，除含有豐富的氨基酸和維生素外，還含有SOD及各種人體必需的微量元素，具有清除自由基、抗氧化、保護(hù)細(xì)胞的作用〔8〕。將上述各種具有協(xié)同作用的中藥與酒融于一體制成藥酒，不僅配制方便、藥性穩(wěn)定、安全有效，而且酒精是一種良好的半極性有機(jī)溶劑，中藥的各種有效成分都易溶于其中，藥借酒力、酒助藥勢(shì)而充分發(fā)揮其效力，提高療效。

本實(shí)驗(yàn)說(shuō)明“壽星寶”保健酒可能是通過(guò)有效提高皮膚抗氧化酶的活性，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化和清除自由基的能力，刺激衰老皮膚成纖維細(xì)胞活力，促進(jìn)膠原蛋白的合成，從而起到預(yù)防和延緩皮膚衰老的作用。

值得一提的是，適量飲用保健酒有益健康與養(yǎng)顏，但過(guò)度濫飲則會(huì)導(dǎo)致皮膚內(nèi)毛細(xì)血管疲勞而缺氧，尤其是嗜酒者極易發(fā)展成慢性酒精中毒，久之不僅不利健康，而且有損容顏，故飲用保健藥酒也要適可而止。

1 王 萍，王小燕.本草養(yǎng)顏膏對(duì)老齡大鼠皮膚SOD和Hyp的影響〔J〕.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2009;37(1):18-20.

2 侯麗麗，張守勤，李東升，等.淫羊藿有效成分抗氧化活性研究〔J〕.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011;39(3):1376-7.

3 梁 杰，李 響.枸杞多糖與丹參酮延緩小鼠皮膚衰老的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2009;4(9):5-6.

4 王玉勤，吳曉嵐，張廣新，等.黃精多糖對(duì)大鼠抗氧化作用的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生，2011;49(5):6.

5 楊智榮，趙文樹，李建民，等.外用黃精制劑對(duì)小鼠衰老皮膚膠原纖維影響的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2005;33(4):42-3.

6 鄭王巧，郭春花，張曉一，等.葛根黃酮對(duì)亞急性衰老模型小鼠抗氧化作用的研究〔J〕.四川生理科學(xué)雜志，2009;31(4):145-6.

7 馮 濤，閻婷婷，閻國(guó)榮，等.紅花提取物清除自由基能力的初步研究〔J〕.天津農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010;17(1):6-9.

8 吳 君，程明亮，張國(guó)豪，等.茅臺(tái)酒與肝病關(guān)系的流行病學(xué)調(diào)查及病理組織學(xué)研究〔J〕.世界華人消化雜志，2001;9(12):1374-8.