李瑩瑩 王 艷

哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，黑龍江哈爾濱 150000

肺癌是近年來發(fā)病率越來越高的一項(xiàng)疾病，隨著經(jīng)濟(jì)社會的發(fā)展，人們生活水平的不斷提高，隨之而來的環(huán)境污染也是日益嚴(yán)重，汽車尾氣，大氣污染和水資源污染日益嚴(yán)重，我們的生活環(huán)境越來越惡劣，人們的健康受到了嚴(yán)重的威脅，肺癌的發(fā)病率越來越高，肺癌成為危害人們健康的嚴(yán)重疾病。并且肺癌的產(chǎn)生除了跟惡劣的環(huán)境有關(guān)，也跟人類本身的基因有關(guān)，肺癌是一個多基因調(diào)控的疾病。科研工作者在研究肺癌機(jī)理的時候重點(diǎn)從基因的角度出發(fā)，從基因的角度找到控制肺癌發(fā)病的關(guān)鍵基因，為后續(xù)的找出治療肺癌的方法打下基礎(chǔ)。腫瘤相關(guān)基因Ki67時近年來被廣泛研究的一個重要的細(xì)胞增殖標(biāo)記，通過近年來相關(guān)肺癌病證的研究和診斷，發(fā)現(xiàn)腫瘤相關(guān)基因Ki67在肺癌中有很高表達(dá)率，并且有研究顯示腫瘤相關(guān)基因Ki67與癌癥的生物學(xué)行為和預(yù)后有一定的相關(guān)關(guān)系。腫瘤血管生成已成為判斷惡性腫瘤轉(zhuǎn)移及預(yù)后的重要指標(biāo)。

本研究的研究對象Ki67是一種增殖細(xì)胞相關(guān)的核抗原，與有絲分裂密切相關(guān)，是細(xì)胞增殖生長的關(guān)鍵基因，是作為標(biāo)記細(xì)胞增殖狀態(tài)的抗原兒存在的，腫瘤相關(guān)基因Ki67表現(xiàn)陽性說明癌細(xì)胞增殖活躍，腫瘤相關(guān)基因Ki67變現(xiàn)陰性說明癌細(xì)胞增殖狀態(tài)并不活躍。但根據(jù)目前的研究成果來看，腫瘤相關(guān)基因Ki67的確切機(jī)制并沒有一個明確的定義和概念，本研究力圖通過對肺癌患者的手術(shù)標(biāo)本的觀察，通過觀察Ki67在肺癌組織中的表達(dá)狀況及其與病理和臨床特征，力求找出診斷和治療肺癌的相關(guān)方法找出腫瘤相關(guān)基因Ki67控制的相關(guān)性狀，解決一直困擾我們的癌癥的問題和疑惑。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院2010—2012年的肺癌手術(shù)病例，獲取肺癌手術(shù)病人的手術(shù)標(biāo)本88例，其中男性患者50例，女性患者38例，年齡層面包括23～78歲的患者，平均年齡58歲，為了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，所選取的患者在術(shù)前都沒有進(jìn)行過放、化療等治療手段的治療。

1.2 試劑與方法

1.2.1 試劑 VEGF多克隆抗體，Ki67單克隆抗體。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法 實(shí)驗(yàn)方法采用免疫組化二步法。實(shí)驗(yàn)通過國際標(biāo)準(zhǔn)的免疫組化二步法進(jìn)行檢驗(yàn)，并且全程過程，要參照腫瘤相關(guān)基因Ki67試劑的說明書來檢測Ki67的表達(dá)，石蠟切片脫蠟至水，微波抗原修復(fù)，二步法過氧化物酶阻斷液孵育5 min，第一抗體NET-1。工作濃度1/200；鼠抗人單克隆抗體Ki67濃度1/100。室溫30 min，之后通過二步法HRP處理，采用DAB染色的方法。仔細(xì)觀察相關(guān)石蠟切片的標(biāo)本結(jié)果，通過p5法判斷相應(yīng)的現(xiàn)象，并得出結(jié)論。

1.3 結(jié)果判斷P5

肺癌組織中NET-1、Ki67的表達(dá)特征NET-1表達(dá)在癌細(xì)胞膜上或胞質(zhì)中，Ki67陽性定位于肺癌細(xì)胞核中。肺癌中MVD均值為27.8。實(shí)驗(yàn)選用的陽性對照組均顯示為陽性的表達(dá)。陰性對照均未檢出NET-1、Ki67的陽性表達(dá)。10例非腫瘤胃黏膜中NET-1均勻分布于胞漿，均呈低表達(dá)，MVD值9.46。5例偶見基底層細(xì)胞Ki67核表達(dá)。對39例三指標(biāo)均為過表達(dá)的病例進(jìn)行免疫組化三重標(biāo)記雙染，在同一張切片上的三種標(biāo)記通過不同的顯色劑分別表達(dá)了組織的不同部位，NET-1陽性表達(dá)在癌細(xì)胞胞質(zhì)或胞膜呈褐色，Ki67表達(dá)現(xiàn)象中，在癌細(xì)胞核呈藍(lán)黑色。免疫組化三重標(biāo)記雙染在組織原位顯示三指標(biāo)表達(dá)呈正相關(guān)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié)果表明基因Ki67的表達(dá)指標(biāo)的相關(guān)性分析用Spearman等級相關(guān)分析；用χ2檢驗(yàn)等級分組變量間表達(dá)陽性率的趨勢，用Fisher直接計(jì)算概率法比較不同臨床病理因素表達(dá)陽性率之間的差異；數(shù)據(jù)的相關(guān)處理用相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件Stata9.0進(jìn)行。用Logrank檢驗(yàn)比較兩組曲線，用Kaplan-Meier估計(jì)生存曲線。檢驗(yàn)意義水準(zhǔn)為P ＜ 0.05。

2 結(jié)果

Ki67與肺癌的發(fā)生和發(fā)展有一定的關(guān)系，了解Ki67的產(chǎn)生和發(fā)展機(jī)理，對診斷和治療肺癌起到有一定的作用，研究Ki67可以得出相關(guān)的結(jié)論，為治療肺癌打下了堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。

本研究結(jié)果表明，在肺癌患者手術(shù)標(biāo)本的同一張切片上，肺癌腫瘤細(xì)胞質(zhì)與膜NET-1表達(dá)時，癌細(xì)胞核Ki67也是相伴表達(dá)的，可見二者之間有一定的關(guān)聯(lián)性，通過對本研究對象哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院的88例肺癌患者的手術(shù)標(biāo)本進(jìn)行調(diào)查和研究的基礎(chǔ)上，結(jié)果通過科學(xué)的統(tǒng)計(jì)和分析，我們得出了一下的結(jié)論，肺癌組織中Ki67的陽性表達(dá)率分別為99．6%，證明了腫瘤相關(guān)基因Ki67與癌細(xì)胞的增殖有很強(qiáng)的正相關(guān)性，本研究還通過抽樣調(diào)查和結(jié)果分析，最終結(jié)果顯示肺癌中NET-1和Ki67表達(dá)呈顯著正相關(guān)，更客觀地表明NET-1基因表達(dá)不但能顯著促進(jìn)腫瘤血管的形成，并且與癌細(xì)胞增殖有關(guān)，Ki67的表達(dá)對于肺癌的發(fā)生和影響具有一定程度的重要的意義。

3 討論

本研究結(jié)果告訴我們，在我們研究肺癌機(jī)理的時候，要多從內(nèi)部基因機(jī)理的角度去發(fā)現(xiàn)和解決問題，基因?qū)用媸俏镔|(zhì)最原始和本身的層面，這些層面能夠告訴我們事物產(chǎn)生的最原始的機(jī)理，基因控制蛋白質(zhì)的合成，也就意味著控制了我們的生命活動的進(jìn)行和發(fā)展，要是我們可以從基因的層面了解了肺癌的發(fā)病和發(fā)展的話，也就意味著，我們掌握了肺癌的全部知識，對于以后對于肺癌進(jìn)行防治和治療診斷就有了十分重要的理論依據(jù)參考。發(fā)現(xiàn)基因問題，并解決基因問題，也是現(xiàn)代分子生物學(xué)研究的重要趨勢和方法，能夠從微觀的角度的分析事物對于我們來說是一種新的突破。本研究對Ki67在肺癌的產(chǎn)生和發(fā)展的趨勢中進(jìn)行了研究，并得出了一定的結(jié)論。這是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一個重大的突破。

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