童凌斐，劉立民

(江西省人民醫(yī)院藥劑科，南昌 330006)

卡馬西平(carbamazepine,CBZ)為復(fù)雜部分性發(fā)作的首選藥,對控制癲癇大發(fā)作、局限性發(fā)作及混合型癲癇都有效,也可用于三叉神經(jīng)痛等慢性疼痛。卡馬西平安全血藥濃度范圍窄,個體的生理、病理等方面的差異也會造成藥物的吸收程度和速率、表觀分布容積、清除速率的不同,使得卡馬西平血藥濃度存在很大的個體差異?？R西平為肝藥酶誘導(dǎo)劑,能產(chǎn)生自身誘導(dǎo)作用,長期應(yīng)用其半衰期可下降2-3倍，應(yīng)根據(jù)血藥濃度監(jiān)測結(jié)果及時調(diào)整患者的用藥劑量，確保有效又不致中毒反應(yīng)發(fā)生[1]。國內(nèi)外常用的體內(nèi)藥物濃度的測定方法主要為熒光偏振免疫法(FPIA)、酶聯(lián)免疫法(EMIT)和高效液相色譜法(HPLC)等,FPIA和EMIT法操作簡便準確,測定周期短,應(yīng)用較廣泛，但成本昂貴，加重病人經(jīng)濟負擔[2]。目前國內(nèi)應(yīng)用較多的監(jiān)測方法為HPLC法，其分離度好、靈敏度高、專屬性強、成本低廉等優(yōu)點[3]。有報道過內(nèi)標法和外標法進行監(jiān)測，筆者通過反復(fù)實驗摸索出更簡便實用高效的測定方法，且對其干擾試驗進行監(jiān)測和研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 日本島津LC-2010AZH型高效液相色譜儀(包括四元高壓泵，在線真空脫氣機，自動進樣器，柱溫箱)，島津LC solution化學(xué)工作站，XS3DU精密電子天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)，LG16-A高速離心機 (北京雷勃爾離心機有限公司)。

1.2 試劑與藥品 卡馬西平對照品 (中國藥品生物制品檢定所 ，批號：0142-9503)；甲醇 (色譜純，天津市天茂化學(xué)試劑廠)；水為自制超純水；其他均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為Kromasil 100-5C18柱(4.6 mmx150mm,5μm)，流動相為甲醇：水(50：50)，流速 1.0 ml/min，柱溫 25℃；檢測波長為 215 nm；進樣量為 20μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 卡馬西平儲備液的制備 取卡馬西平對照品適量，精密稱量，加甲醇稀釋至刻度，制成濃度為310μg/ml的溶液，置于冰箱冷藏備用。

2.2.2 標準溶液的制備 取儲備液0.5ml，精密量取，置10ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻即得濃度為15.5μg/ml的標準溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 取儲備液0.5ml，精密量取，置10ml容量瓶中，加入血清100μl，再加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進行漩渦振蕩4min，精密取1ml溶液至離心管在10000 r/min轉(zhuǎn)速下離心6min，吸取上清液即得。

2.2.4 空白溶液的制備 取空白血清 100μl，置10ml容量瓶中，再加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進行漩渦振蕩4min，精密取1ml溶液至離心管在10000 r/min轉(zhuǎn)速下離心6min，吸取上清液即得。

2.3 空白干擾試驗 分別取空白溶液、標準品溶液和供試品溶液20μl進樣。結(jié)果表明：該色譜條件下卡馬西平的保留時間為10min左右，供試品溶液中卡馬西平的理論塔板數(shù)≥2000，分離度>2.0，空白血清對卡馬西平的測定無干擾。

2.4 線性關(guān)系考察 按 “2.2.2標準品溶液的制備”項下的方法，制備濃度為 1.95、3.9、7.8、15.5、31μg/ml濃度的卡馬西平溶液，按“2.1項下色譜條件”進樣，記錄色譜圖。以卡馬西平樣品的峰面積(Y)與卡馬西平的濃度(X)做標準曲線，得到回歸方程：Y=32959.84X+19250.95，r=0.9998，結(jié)果表明卡馬西平在1.95-31μg/ml范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.5 重復(fù)性試驗 取“2.2.3項”下制備所得的供試品溶液，按“2.1色譜條件”進樣，記錄色譜圖，計算其中卡馬西平含量。平行操作6次，其RSD=0.87%(n=6)。結(jié)果表明該方法重復(fù)性較好。

2.6 回收率試驗和精密度試驗 分別取卡馬西平儲備液適量，按“2.2.3項下供試品溶液的制備”,制備成卡馬西平溶液濃度分別為12.0、15.0、19.0μg/ml的溶液，即為低、中、高濃度的溶液。按“2.1色譜條件”進樣，記錄色譜圖，計算其中卡馬西平含量，結(jié)果見表1。將以上低、中、高3種濃度的溶液作為質(zhì)控樣品，分別在同1d內(nèi)測定4次計算日內(nèi)精密度和連續(xù)3日內(nèi)每日測定1次計算日間精密度，結(jié)果見表1。

表1 卡馬西平回收率與精密度

2.7 穩(wěn)定性試驗 取“2.2.3項”下制備所得的供試品溶液，在 0、6、12、18、24h 按“2.1 色譜條件”進樣，記錄色譜圖，計算其中卡馬西平含量。RSD為1.36%(n=5)，結(jié)果表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 耐用性

2.8.1 不同色譜柱的比較 取“2.2.3項”下制備所得的供試品溶液，經(jīng)島津VP-ODS(4.6mm×150mm,5μm)、Grace C18(4.6mm×150mm,5μm)和 Kromasil 100-5C18 柱(4.6 mmx150mm,5μm)色譜柱測定，結(jié)果卡馬西平的百分含量分別為94.6%，96.2%和96.7%，RSD=1.18%。結(jié)果表明：不同色譜柱對含量測定結(jié)果無顯著影響。

2.8.2 不同檢測波長的比較 取“2.2.3項”下制備所得的供試品溶液，在不同的檢測波長213,215,217nm下監(jiān)測(其余色譜條件不變)，計算質(zhì)控樣品中卡馬西平的含量。結(jié)果含量分別為92.5%，95.2%，93.3%，RSD為1.8%。結(jié)果表明：檢測波長發(fā)生小的變動時對本方法基本無影響。

3 討論

本研究使用的是HPLC法，對儀器無特殊要求，便于推廣，本法直接采用甲醇和水為流動相，操作簡單，靈敏度高，成本低，便于臨床推廣和應(yīng)用。

該法選取卡馬西平的最大吸收波長215nm作為檢測波長， 與文獻 285nm[4]、254nm[3]、240nm[3]、220nm[5]相比，靈敏度也較高，且血漿組分干擾少，該法所用血漿樣品處理方法與文獻[3]相比，無需酸化血漿樣品，過程較簡單，易于操作。本法所采取的萃取劑為甲醇，也嘗試過乙腈、乙醇等溶劑，從回收率、低成本和安全性考慮，甲醇為最佳萃取劑。由于吸附力太強會導(dǎo)致嚴重的峰展寬和拖尾甚至不可逆吸附，提高柱溫可降低流動相粘度、減少柱壓、改善傳質(zhì)、提高柱效，經(jīng)過對室溫20℃、25℃、30℃不同溫度的比較，在25℃和30℃的峰形較好，考慮到色柱的壽命問題，選擇25℃為柱溫。

[1]楊秀斐.余玉.姜建梅.卡馬西平治療癲癇血藥濃度監(jiān)測回顧性分析[J].醫(yī)藥導(dǎo)報,2004,23(6):418－419.

[2]李金恒.臨床治療藥物監(jiān)測的方法和應(yīng)用[M].北京:人民衛(wèi)生出版社.2003.28.

[3]劉光斌.江芳寧.高穎.HPLC法測定卡馬西平血藥濃度[J].中國藥事,2012,26(9)：991-993.

[4]黃浩.HPLC法測定卡馬西平血藥濃度[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2010,29(20):55-55.

[5]周青,余江平,范渝蓉.反相高效液相色譜法測定卡馬西平的血藥濃度[J].中國藥業(yè),2007,16(14):27-27.