何曉芬,方劍喬,蔣永亮,黃壘,裘晟晨,沈亞芳,尹小虎

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電針治療慢性炎性痛的促外周beta-END釋放作用

何曉芬,方劍喬,蔣永亮,黃壘,裘晟晨,沈亞芳,尹小虎

(浙江中醫(yī)藥大學(xué),杭州 310053)

觀察電針治療慢性炎性痛時(shí)對(duì)炎癥局部炎性介質(zhì)和外周阿片肽的雙重干預(yù)作用。建立大鼠弗氏完全佐劑(Complete Freund’s Adjuvant,CFA)誘導(dǎo)的慢性炎性痛模型,電針選用患側(cè)足三里和昆侖穴,并與傳統(tǒng)非甾體抗炎藥消炎痛進(jìn)行比較,觀察熱縮腿閾(thermal paw withdrawal latency,PWL)變化,檢測(cè)足跖炎癥組織前列腺素E2(PGE2)、白介素-1b(IL-1b)和beta-內(nèi)啡肽(beta-END)。電針和消炎痛均可提高慢性炎性痛大鼠痛閾;電針不能顯著降低炎癥局部組織PGE2、IL-1b水平,但能顯著升高炎癥局部組織beta-END水平(＜0.05);消炎痛能顯著降低PGE2和IL-1b水平(均＜0.01),但對(duì)beta-END水平?jīng)]有顯著影響。與傳統(tǒng)的非甾體抗炎藥相比,電針治療慢性炎性痛具有促外周beta-END釋放的作用。

電針;慢性炎性痛;炎性介質(zhì);阿片肽;內(nèi)啡肽;大鼠

慢性炎性痛是臨床上的常見癥狀,治療多采用抗炎鎮(zhèn)痛藥,但長(zhǎng)期使用常伴隨嚴(yán)重的胃腸道毒副反應(yīng)[1-3],其相應(yīng)的機(jī)理研究也多局限于對(duì)炎性介質(zhì)干預(yù)方面[4]。電針是臨床上治療慢性炎性痛的常用手段,具有良好的鎮(zhèn)痛效應(yīng)[5-6]。針刺鎮(zhèn)痛的中樞阿片機(jī)制已被證實(shí),但外周阿片肽是否參與針刺鎮(zhèn)痛尚未明確。有研究表明[7],炎癥局部的免疫細(xì)胞可釋放阿片肽,參與外周鎮(zhèn)痛。電針能否作為一種有效刺激促進(jìn)炎癥局部阿片肽的釋放,進(jìn)而發(fā)揮治療慢性炎性痛的作用,目前缺少相應(yīng)研究。本研究立足于電針治療慢性炎性痛是否存在對(duì)炎癥局部炎性介質(zhì)和外周阿片肽的外周雙重調(diào)節(jié)機(jī)制,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選用健康雄性Wistar大鼠32只,體重為(170±10)g,購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[SCXK (滬)2008-0016],由浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng)。飼養(yǎng)期間給予嚙齒動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼養(yǎng)(由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)及自由飲水,12 h循環(huán)燈光。

1.2 針具、藥物和試劑

0.25 mm×13 mm無菌針灸針(蘇州醫(yī)療用品廠有限公司);消炎痛片劑(廣東華南藥業(yè)有限公司)。弗氏完全佐劑(Complete Freund’s Adjuvant,CFA)由美國(guó)Sigma公司提供;PGE2EIA kit由美國(guó)Enzo公司提供; IL-1bEIA kit由美國(guó)Raybiotech公司提供;TNF-aEIA kit由美國(guó)Raybiotech公司提供;beta-END送至上海第二軍醫(yī)大學(xué)應(yīng)用RIA kit檢測(cè)。

1.3 儀器設(shè)備

足底測(cè)量?jī)x(意大利UGO BASILE公司)、韓氏穴位暨神經(jīng)刺激儀(北京華衛(wèi)產(chǎn)業(yè)開發(fā)公司)、BECKMAN超高速離心機(jī)(美國(guó)貝克曼儀器公司)、紫外分光光度計(jì)(美國(guó)BIO-RAD公司)。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 造模和分組

利用SPSS軟件,采用完全隨機(jī)分組法將大鼠分為4組,每組8只,分別為正常組、模型組、電針組、消炎痛組。除正常組不造模,僅注射等劑量生理鹽水,其余各組大鼠均于右后足足底內(nèi)注射CFA(0.1 mL/只),建立慢性炎性痛模型。

1.4.2 治療方法

電針組取患側(cè)足三里、昆侖穴(定位參照華興邦大鼠穴位圖譜)進(jìn)行電針治療。電針采用LH-202H韓氏穴位暨神經(jīng)刺激儀(北京華為產(chǎn)業(yè)開發(fā)公司),治療的參數(shù)為疏密波,2/100 Hz,1～2 mA(每15 min增加1 mA)。治療時(shí)間為30 min,每日1次。消炎痛組按1.5 mg/kg劑量每日灌胃治療1次。治療均從造模后第1天開始至第18天處死大鼠。模型組大鼠造模后不做治療處理,但在造模后第1天至第18天予以電針組相同的固定。

1.4.3 痛閾測(cè)量

采用足底測(cè)量?jī)x(dynamic plantar aesthesiometer 37370,UGO BASILE)檢測(cè)大鼠患足熱縮腿閾(Thermal Paw Withdrawal Latency,PWL)作為痛閾指標(biāo)。于造模前及造模后1 d、4 d、18 d檢測(cè)所有實(shí)驗(yàn)大鼠右后足熱縮腿閾。具體操作為測(cè)量前將大鼠置于透明塑料盒中,待大鼠安靜后(停止梳理毛發(fā)和探索性活動(dòng)),將聚焦的紅外熱源置于大鼠右后足中央,避開足墊,啟動(dòng)“START”按鈕對(duì)足底進(jìn)行熱刺激,儀器自動(dòng)記錄大鼠縮足反應(yīng)時(shí)的潛伏期和紅外輻射強(qiáng)度。20 s是刺激時(shí)間最上限,30為最大熱輻射強(qiáng)度。連續(xù)測(cè)量3次,每次間隔5 min。

1.4.4 ELISA測(cè)定足跖炎癥組織PGE2、IL-1b含量

采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)足跖炎癥組織PGE2、IL-1b含量。取足跖炎癥組織,研碎,按1 mg組織加100mL裂解液(江蘇碧云天)和1mL蛋白酶抑制劑(加拿大biobasic)比例加入配好的裂解液,冰浴中超聲粉碎,高速低溫離心后,取上清。分別按試劑盒說明書檢測(cè)PGE2、IL-1b含量(pg/mg)。

1.4.5 RIA測(cè)定足跖炎癥組織beta-END含量

采用放射免疫分析法。取足跖炎癥組織,研碎,按1 mg組織加100mL裂解液(江蘇碧云天)和1mL蛋白酶抑制劑(加拿大biobasic)比例加入配好的裂解液,冰浴中超聲粉碎,高速低溫離心后,取上清。將提取的上清液送至上海第二軍醫(yī)大學(xué)應(yīng)用RIA檢測(cè)足跖炎癥組織beta-END含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)均用(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)表達(dá),多組間比較采用單因素方差分析,析因分析采用檢驗(yàn)。以＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 電針對(duì)大鼠患側(cè)PWL變化的影響

由表1可見,各組大鼠造模前基礎(chǔ)PWL比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＞0.05)。模型組足趾注射后,模型組、電針組、消炎痛組PWL與正常組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.01),提示慢性炎性痛模型成功建立。電針組、消炎痛組治療后PWL與模型組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.01)。電針組治療18 d后PWL與消炎痛組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＞0.05)。

表1 各組大鼠患側(cè)熱縮腿閾比較 (±s,s)

注:與正常組比較1)＜0.01;與模型組比較2)＜0.01

2.2 電針對(duì)足跖炎癥組織PGE2含量的影響

由表2可見,造模后18 d,模型組大鼠足跖炎癥組織的PGE2含量顯著升高(＜0.01,與正常組比較)。與模型組比較,電針組PGE2含量有降低趨勢(shì),但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＞0.05)。消炎痛組治療后PGE2含量與模型組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.01)。

表2 各組大鼠足跖炎癥組織PGE2含量比較(±s,pg/mg)

注:與正常組比較1)＜0.01;與模型組比較2)＜0.01

2.3 電針對(duì)足跖炎癥組織IL-1b含量的影響

由表3可見,造模后18 d,模型組大鼠足跖炎癥組織的IL-1b含量顯著升高(＜0.01,與正常組比較);與模型組比較,電針組IL-1b含量有降低趨勢(shì),但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＞0.05)。消炎痛組治療后IL-1b含量與模型組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05)。

表3 各組大鼠足跖炎癥組織IL-1b含量比較(±s,pg/mg)

注:與正常組比較1)＜0.01;與模型組比較2)＜0.05

2.4 電針對(duì)足跖炎癥組織beta-END含量的影響

由表4可見,造模后18 d,模型組大鼠足跖炎癥組織的beta-END含量與正常組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＞0.05)。

電針組治療后大鼠足跖炎癥組織的beta-END含量與模型組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05)。消炎痛組治療后大鼠足跖炎癥組織的beta-END含量與模型組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＞0.05)。

表4 各組大鼠足跖炎癥組織beta-END含量比較(±s,pg/mg)

注:與模型組比較1)＜0.05

3 討論

中醫(yī)學(xué)理論認(rèn)為“經(jīng)脈者,所以能決死生,處百病,調(diào)虛實(shí),不可不通。”宗“病始于足脛,先取足陽明而汗出”的治療原則,我們選取足三里穴為治療主穴。昆侖穴具有通利關(guān)節(jié)、舒經(jīng)活絡(luò)止痛作用,所以我們同時(shí)選用昆侖穴進(jìn)行治療。有研究表明,以疼痛局部或鄰近穴位電針效果最佳[8-10]。國(guó)內(nèi)也有研究表明[11],足三里和昆侖穴可以減輕由弗氏完全佐劑引起的慢性炎性痛,并且具有良好的治療作用。

CFA模型是炎性痛的經(jīng)典模型,在造模后1 d即可出現(xiàn)足跖局部的紅、腫、熱、痛等炎癥癥狀,疼痛可持續(xù)4星期[12],是研究針灸治療慢性炎性痛機(jī)制的理想模型[13]。電針鎮(zhèn)痛作用已被廣泛證實(shí),與以往的研究結(jié)果一致[14-15],我們發(fā)現(xiàn)電針對(duì)慢性炎性痛有良好的治療作用,且療效類似傳統(tǒng)的非甾體類抗炎鎮(zhèn)痛藥消炎痛,但在降低局部炎癥組織的PGE2、IL-1b等炎性因子水平方面,電針作用不如消炎痛。因此,電針治療慢性炎性痛可能還存在其他的調(diào)節(jié)途徑。

內(nèi)源性阿片肽(EOP)的外周鎮(zhèn)痛作用日益引起人們的注意。研究表明,炎癥過程中,內(nèi)含阿片肽的免疫細(xì)胞在黏附分子等導(dǎo)向下聚集于足跖炎癥組織,遷移到炎癥局部的免疫細(xì)胞(T、B淋巴細(xì)胞,巨噬細(xì)胞,單核細(xì)胞)可合成大量的EOP[16]。在有效的刺激下,這些免疫細(xì)胞可釋放EOP,作用于炎癥局部感覺神經(jīng)末梢上的阿片受體,產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用。有報(bào)道冷水游泳可促使炎癥局部EOP的釋放[17]。那么,電針能否作為一種有效刺激促使外周EOP的釋放呢?在本實(shí)驗(yàn)中,我們發(fā)現(xiàn)電針能顯著提高慢性炎癥痛大鼠炎癥局部的beta-END含量,而消炎痛沒有明顯的影響;之前有研究也表明,足跖注射阿片受體拮抗劑納洛酮可拮抗電針對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的鎮(zhèn)痛效應(yīng)[18]。這些結(jié)果表明,外周beta-END參與電針的治療慢性炎性痛作用。這就很好解釋了本實(shí)驗(yàn)中為何電針在改善局部炎性因子方面作用不如消炎痛,而鎮(zhèn)痛作用卻與之相當(dāng)。本研究結(jié)果表明,電針治療慢性炎性痛可能涉及外周阿片機(jī)制,其中beta-END是重要的環(huán)節(jié)。

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Peripheral Beta-END Release-promoting Effects of Electroacupuncture in the Treatment of Chronic Inflammatory Pain

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,310053,

To investigate the dual intervening effects of electroacupuncture on inflammatory mediators and peripheral opioid peptides in local inflammatory tissue in the treatment of chronic inflammatory pain.A rat model of complete Freund’s adjuvant (CFA)-induced chronic inflammatory pain was made. Electroacupuncture at points Zusanli and Kunlun on the affected side were compared with conventional nonsteroidal anti-inflammatory drug indomethacin. Paw withdrawal latency (PWL), and prostaglandin E2(PGE2), interleukin-1b(IL-1b) and beta-endorphin (beta-END) in the plantar inflammatory tissue were measured.Both electroacupuncture and indomethacin raised pain threshold in the rats with chronic inflammatory pain. Electroacupuncture did not significantly reduce PGE2 and IL-1blevels but significantly increase beta-END levels (＜0.05) in the local inflammatory tissue. Indomethacin significantly increased PGE2 and IL-1blevels (both＜0.01) but did not produce a significant effect on beta-END levels.Electroacupuncture can promote peripheral beta-END release in the treatment of chronic inflammatory pain compared with the conventional nonsteroidal anti-inflammatory drug.

Electroacupuncture; Chronic inflammatory pain; Inflammatory mediator; Opioid peptide; Endorphin; Rats

1005-0957(2013)05-0407-03

R2-03

A

10.3969/j.issn.1005-0957.2013.05.407

2012-12-18

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81072855);浙江省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(Z2100979,LY12H27015);浙江省“重中之重”學(xué)科(針灸推拿學(xué))建設(shè)經(jīng)費(fèi)資助[浙教高科(2008)255號(hào)]

何曉芬(1986 - ),女,2010級(jí)碩士生

方劍喬(1961 - ),男,教授