田紅彪 張瑞紅 王燕 劉惠敏 韓福謙

【摘 要】目的：通過強(qiáng)抗氧化物維生素E干預(yù)綠膿菌素抑制金黃色葡萄球菌過程，研究維生素E能否起到拮抗和減弱綠膿菌素抑菌活性的作用。方法：在金黃色葡萄球菌的綠膿菌素藥敏試驗(yàn)中，比較維生素E干預(yù)其過程前后抑菌環(huán)的變化。結(jié)果：維生素E干預(yù)后比干預(yù)前抑菌環(huán)直徑明顯減小。結(jié)論：維生素E作為抗氧化物通過清除過氧化物等自由基起到拮抗綠膿菌素抑菌活性的作用。

【關(guān)鍵詞】抗氧化物；維生素E；干預(yù)；綠膿菌素；拮抗

銅綠假單胞菌是醫(yī)院感染中極其重要的條件致病菌之一，可引起各種感染。尤其是多重耐藥菌株和泛耐藥菌株的出現(xiàn)，不合理地應(yīng)用抗生素，臨床上治療越來越困難。由于銅綠假單胞菌的耐藥機(jī)制極其復(fù)雜，所以需用多種綜合手段來治療其感染。

1 材料與方法

1.1 菌株來源 收集從臨床標(biāo)本中分離的銅綠假單胞菌10株和金黃色葡萄球菌3株。

1.2 試劑 普通營養(yǎng)瓊脂和M-H培養(yǎng)基購自杭州天和微生物試劑公司，維生素E購自湖南公司。

1.3 方法

1.3.1 制備綠膿菌素紙片 分別挑取各株銅綠假單胞菌純菌落接種于普通營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基上，35℃孵育48小時(shí)后，用氯仿5ml沖洗斜面上的細(xì)菌，萃取綠膿菌素，各取20ul滴于濾紙上，制成綠膿菌素紙片，放置培養(yǎng)箱中干燥備用。

1.3.2 藥敏試驗(yàn) 將金黃色葡萄球菌用生理鹽水制成0.5麥?zhǔn)蠁挝痪鷳乙?，涂布劃線于M-H平板，貼綠膿菌素紙片作為對(duì)照組，試驗(yàn)組為同樣方法做藥敏試驗(yàn)，不同之處在于取50ul維生素E用棉簽涂在綠膿菌素周圍的金黃色葡萄球菌菌懸液上，為了不影響綠膿菌素的自由擴(kuò)散，貼綠膿菌素藥敏紙片后放置8～10分鐘，再涂維生素E。孵育18～24小時(shí)，測(cè)量抑菌環(huán)直徑。

1.4 統(tǒng)計(jì) 試驗(yàn)組和對(duì)照組數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件成對(duì)樣本t檢驗(yàn)處理分析。

2 結(jié)果

試驗(yàn)組抑菌環(huán)直徑為19.23±4.33，對(duì)照組抑菌環(huán)直徑23.61±3.98。經(jīng)成對(duì)樣本t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

據(jù)全國2011年度各醫(yī)院痰標(biāo)本分離菌株統(tǒng)計(jì)，前5位菌種分別為非發(fā)酵菌的銅綠假單胞菌和鮑曼不動(dòng)桿菌、腸桿菌科的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌以及金黃色葡萄球菌[1]。特別是多重耐藥和泛耐藥菌株的出現(xiàn)，臨床上對(duì)其引起感染的治療越來越棘手。研究發(fā)現(xiàn)，銅綠假單胞菌對(duì)細(xì)菌的抑制作用，主要是其產(chǎn)生綠膿菌素（PA）[2]。PA是一種具有生物活性的代謝產(chǎn)物，也是銅綠假單胞菌的重要致病因子。在有氧條件下，參與氧化還原循環(huán)周期，產(chǎn)生過氧化物誘導(dǎo)細(xì)胞損傷；另一方面，它對(duì)人體細(xì)胞的損傷的研究顯示，它能鈍化過氧化物酶，而不是錳超氧化物歧化酶（MnSOD）或銅-鋅超氧化物歧化酶（CuZnSOD）。PA能減少基因編碼的過氧化酶的轉(zhuǎn)錄，在無細(xì)胞系統(tǒng)中直接抑制過氧化酶的活性，通過添加MnSOD，過氧化物酶的鈍化可部分恢復(fù)，提示氧自由基在銅綠假單胞菌介導(dǎo)的損傷中具有重要意義[3]。PA通過自身的氧化產(chǎn)生氧自由基損傷細(xì)胞，引起細(xì)胞死亡，可見氧自由基在過程中起著關(guān)鍵性的作用。由于銅綠假單胞菌的耐藥機(jī)制非常復(fù)雜，單一手段治療往往很難奏效，針對(duì)它的耐藥機(jī)制選擇藥物，如產(chǎn)生物被膜的菌株，在治療中可加入大環(huán)內(nèi)酯類藥物，對(duì)PA造成的細(xì)胞損傷，可用抗氧化物維生素E清除銅綠假單胞菌殺菌過程中產(chǎn)生的氧自由基來拮抗其作用[4-5]。這樣可減少和濫用抗生素，達(dá)到合理使用抗生素的目的。

參考文獻(xiàn)

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