張彩英，曹華斌，胡國(guó)良，郭小權(quán)，羅軍榮，李 麟，黃愛(ài)民，黃金星

(江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，江西 南昌 330045)

鋅(Zn)作為動(dòng)物體內(nèi)一種重要的微量元素，是免疫器官生長(zhǎng)發(fā)育和免疫應(yīng)答所必需的營(yíng)養(yǎng)因子，能激活胸腺素，提高機(jī)體的免疫應(yīng)答，增強(qiáng)T淋巴細(xì)胞的功能，對(duì)免疫細(xì)胞的凋亡有調(diào)節(jié)作用［1］。鋅缺乏會(huì)導(dǎo)致免疫系統(tǒng)失調(diào)、體液免疫功能下降等。在養(yǎng)豬生產(chǎn)中，仔豬斷奶時(shí)因心理、環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)等發(fā)生變化，容易出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致腹瀉、生長(zhǎng)緩慢等綜合征，嚴(yán)重危害仔豬生產(chǎn)。研究表明，在斷奶仔豬日糧中添加高劑量的鋅，能明顯改善斷奶仔豬消化機(jī)能和食欲，提高仔豬的生產(chǎn)性能［2－6］，有效地防制仔豬斷奶綜合征。因此在現(xiàn)代養(yǎng)豬業(yè)中，通常在斷奶仔豬日糧中添加高劑量的鋅來(lái)防制仔豬斷奶綜合征。

隨著斷奶仔豬高鋅日糧的普遍使用，人們開(kāi)始關(guān)注高劑量鋅對(duì)環(huán)境的污染及對(duì)機(jī)體的毒副作用。因此，鋅添加水平在不同添加時(shí)間的生物學(xué)效應(yīng)及對(duì)機(jī)體代謝的影響，有待于進(jìn)行系統(tǒng)的探討。本試驗(yàn)以21日齡“杜×長(zhǎng)×大”三元雜交斷奶仔豬為試驗(yàn)對(duì)象，探討鋅添加水平對(duì)早期斷奶應(yīng)激仔豬生產(chǎn)性能及免疫機(jī)能的影響，為斷奶仔豬鋅的適宜添加劑量與添加時(shí)間提供一定的參考依據(jù)，為更好地指導(dǎo)生產(chǎn)實(shí)踐提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物的選擇與分組

選用21日齡“杜×長(zhǎng)×大”三元雜交斷奶仔豬30頭，按公母各半，體質(zhì)量相近，同一圈中每頭仔豬盡可能來(lái)自不同母豬的原則，隨機(jī)分成3組(Ⅰ～Ⅲ組)，每組2個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5頭。

1.2 試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧

試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧參照美國(guó)NRC(1998)斷奶仔豬營(yíng)養(yǎng)需要配合而成，基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)日糧配方及營(yíng)養(yǎng)水平Tab.1 The composition and nutrition level of basal diet

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

基礎(chǔ)日糧分別飼喂添加氧化鋅(以鋅量計(jì))Ⅰ組(對(duì)照組)100 mg/kg、Ⅱ組1000 mg/kg、Ⅲ組2000 mg/kg，日飼喂4次，讓豬群自由采食，自由飲水。預(yù)試驗(yàn)7 d，正式試驗(yàn)42 d。

1.4 樣品的采集與保存

1.4.1 血液樣品 在試驗(yàn)第14、28、42天分別于各組隨機(jī)選取3頭仔豬前腔靜脈采血，每頭采血7mL，其中5mL血液裝入一試管中，待血液自然凝固后3000 r/min離心5min，吸取血清裝于eppendorf管中，置－20℃冰箱保存，用于血清豬瘟抗體的檢測(cè);2mL血液注入無(wú)菌青霉素小瓶中，加入肝素鈉抗凝，用于血液淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)。

1.4.2 組織樣品 在試驗(yàn)第21、42天清晨，各組隨機(jī)選取2頭仔豬(公母各半)，稱(chēng)質(zhì)量后屠宰，屠宰前在自由飲水條件下禁食24 h。頸靜脈放血，開(kāi)膛剖取胸腺、脾臟，并剔除上面的結(jié)締組織，用于檢測(cè)胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)。

1.5 檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.5.1 生產(chǎn)性能測(cè)定 體質(zhì)量和日增重:分別于試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)、試驗(yàn)第14、28、42天清晨，分別逐欄逐頭稱(chēng)質(zhì)量，計(jì)算各組仔豬在各個(gè)階段的平均日增重。

采食量:每天統(tǒng)計(jì)各組仔豬的耗料量，計(jì)算每頭仔豬的平均日采食量。

料重比:根據(jù)各組仔豬的采食量和增重量，計(jì)算料重比。

腹瀉率:每天統(tǒng)計(jì)各組仔豬腹瀉頭數(shù)，計(jì)算腹瀉率。

腹瀉率(%)=試驗(yàn)期腹瀉總頭日數(shù)/試驗(yàn)期總頭日數(shù)×100。

1.5.2 免疫器官指數(shù)測(cè)定 免疫器官指數(shù)=免疫器官質(zhì)量g/體質(zhì)量kg

1.5.3 血液淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率測(cè)定(MTT法) 參考江西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院預(yù)防獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室［7－8］建立的方法進(jìn)行。

1.5.4 血清中豬瘟抗體水平的測(cè)定 采用中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所研制的豬瘟病毒(CSFV)抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。

1.6 數(shù)據(jù)處理與分析

數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(M±SD)表示，差異顯著性分析采用DPS統(tǒng)計(jì)軟件。

2 結(jié)果與分析

2.1 生產(chǎn)性能及腹瀉率

表2 生產(chǎn)性能及腹瀉率Tab.2 The growth performance and diarrhoea rate

從表2可知，正式試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，各組平均體質(zhì)量差異不顯著(P＞0.05);試驗(yàn)0～14 d，平均日增重和日采食量，Ⅲ 組顯著高于Ⅰ組(P＜0.05);料重比各組差異不顯著(P＞0.05);腹瀉率Ⅱ、Ⅲ組比Ⅰ組分別下降了38.76%、44%。試驗(yàn)15～28 d，平均日增重和日采食量，Ⅱ、Ⅲ組顯著或極顯著高于Ⅰ組(P＜0.05或P＜0.01);料重比Ⅲ組顯著低于Ⅰ組(P＜0.05);腹瀉率Ⅱ、Ⅲ組比Ⅰ組分別下降了24.71%、26.10%。試驗(yàn)29～42 d，各組平均體質(zhì)量差異不顯著(P＞0.05)，平均日增重和日采食量，各高鋅組隨添加劑量的增加呈下降趨勢(shì)，Ⅱ、Ⅲ組極顯著低于Ⅰ組(P＜0.01);料重比Ⅱ、Ⅲ組顯著高于Ⅰ組(P ＜0.05)，但Ⅱ、Ⅲ組間差異不顯著(P ＞0.05)。

2.2 免疫器官指數(shù)

由表3可知，Ⅱ、Ⅲ組免疫器官指數(shù)明顯高于Ⅰ組。在第21天，Ⅱ、Ⅲ組極顯著高于Ⅰ組(P ＜0.01)，Ⅱ、Ⅲ組間差異不顯著(P ＞0.05)，Ⅲ、Ⅱ組脾臟指數(shù)分別是Ⅰ 組的1.29、1.32倍;胸腺指數(shù)分別是Ⅰ組的1.57、1.48倍。在第42天，Ⅲ組極顯著高于Ⅰ組(P＜0.01)。

表3 免疫器官指數(shù)Tab.3 The index of immune organ g/kg

2.3 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和豬瘟抗體水平

由表4可知，淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率OD值:第14天時(shí)，Ⅱ、Ⅲ組顯著高于Ⅰ組(P＜0.05);第28天時(shí)，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組間差異不顯著(P＞0.05);第42天時(shí)，Ⅰ組極顯著高于Ⅱ、Ⅲ組(P＜0.01)。豬瘟抗體水平:第14天時(shí)，Ⅱ組極顯著高于Ⅰ、Ⅲ組(P＜0.01);Ⅲ組高于Ⅰ組，但差異不顯著(P＞0.05);第28天時(shí)，Ⅱ、Ⅲ組極顯著高于Ⅰ組(P＜0.01);第42天時(shí)，Ⅱ組極顯著高于Ⅰ組(P＜0.01)。

表4 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和豬瘟抗體水平Tab.4 Lymphocyte transfirmation rate and the level of CSFV antibody

3 討論

3.1 日糧高鋅對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能及腹瀉率的影響

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，在第1～28天內(nèi)即4周內(nèi)，在日糧中添加1000～2000 mg/kg氧化鋅可顯著提高斷奶仔豬平均日增重和日采食量(P＜0.01)，降低料重比(P＜0.05)，減少仔豬斷奶應(yīng)激，降低斷奶仔豬腹瀉的發(fā)病率，這與近年來(lái)國(guó)內(nèi)外的一些報(bào)道是一致的［2－6］。鋅是味覺(jué)素的組成成分，添加鋅可增強(qiáng)味蕾對(duì)味覺(jué)的敏感性，產(chǎn)生促進(jìn)采食的效果;適量的鋅能提高各種含鋅消化酶的活性、改善腸道形態(tài)，影響豬的消化。在第1～28天，添加2000 mg/kg鋅在提高日增重和降低料重比方面效果更好。這說(shuō)明日糧中適量高鋅的添加在促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)方面優(yōu)于低鋅。鋅具有抑制某些腸道有害微生物生長(zhǎng)的作用，降低腹瀉率，提高機(jī)體免疫力，增進(jìn)機(jī)體健康，從而提高生產(chǎn)性能，表現(xiàn)為添加1000、2000 mg/kg鋅組仔豬腹瀉率均大幅度下降。

本試驗(yàn)結(jié)果還顯示，在第29～42天，各高鋅組平均日增重和日采食量隨鋅添加劑量的增加呈下降趨勢(shì)，Ⅱ、Ⅲ組平均日增重和日采食量極顯著低于Ⅰ 組(P＜0.01)，料重比顯著高于Ⅰ 組(P＜0.05)，料重比Ⅱ、Ⅲ組之間差異不顯著(P＞0.05)。這說(shuō)明高鋅日糧飼喂時(shí)間超過(guò)28 d時(shí)，對(duì)仔豬生產(chǎn)性能逐漸顯現(xiàn)出不同程度的抑制作用，其原因可能是長(zhǎng)期飼喂高鋅時(shí)，鋅與其它營(yíng)養(yǎng)素之間的平衡受到破壞，阻礙了機(jī)體的生長(zhǎng)發(fā)育。

3.2 日糧高鋅對(duì)斷奶仔豬免疫器官指數(shù)的影響

鋅對(duì)于維持動(dòng)物中樞免疫器官和外周免疫器官的結(jié)構(gòu)和功能起著重要作用，鋅能作用于脾臟和胸腺細(xì)胞，促進(jìn)生長(zhǎng)，提高機(jī)體免疫力，缺鋅會(huì)使免疫器官的質(zhì)量減輕，使機(jī)體免疫力下降，但長(zhǎng)時(shí)間高劑量補(bǔ)鋅會(huì)抑制其生長(zhǎng)發(fā)育。本試驗(yàn)結(jié)果表明，添加1000、2000 mg/kg鋅組，脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)極顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)，這與大多數(shù)研究結(jié)果一致。荔霞等［9］的試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，鋅能顯著提高小鼠的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)。可見(jiàn)日糧高鋅可促進(jìn)胸腺和脾臟發(fā)育，究其原因，可能是斷奶仔豬胸腺和脾臟的發(fā)育尚未成熟，免疫器官內(nèi)細(xì)胞代謝旺盛，這些代謝過(guò)程需要多種含鋅酶如RNA聚合酶、DNA聚合酶、tRNA合成酶等的參與，適量鋅可促進(jìn)這些酶的活性，有利于胸腺和脾臟發(fā)育成熟。

3.3 日糧高鋅對(duì)斷奶仔豬細(xì)胞免疫和體液免疫的影響

以ConA作為促分裂因子來(lái)檢測(cè)淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化功能，其轉(zhuǎn)化率的高低常用作衡量機(jī)體免疫水平的指標(biāo)，T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率越高，意味著淋巴細(xì)胞在外來(lái)因子的刺激下增殖反應(yīng)上升，機(jī)體的細(xì)胞免疫能力增強(qiáng)。國(guó)內(nèi)外大多研究表明［10－12］，補(bǔ)鋅可明顯提高動(dòng)物機(jī)體T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。本試驗(yàn)結(jié)果還表明:添加1000、2000 mg/kg鋅組淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，第14天時(shí)顯著高于添加100 mg/kg鋅組(P＜0.05)，第28天時(shí)略低于添加100 mg/kg鋅組，而第42天時(shí)極顯著低于添加100 mg/kg鋅組(P＜0.01)，可見(jiàn)，添加1000、2000 mg/kg鋅組在14 d添加時(shí)間內(nèi)能提高淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，添加時(shí)間超過(guò)14 d則對(duì)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率產(chǎn)生不利影響，抑制機(jī)體細(xì)胞免疫功能，此試驗(yàn)結(jié)果與前人研究結(jié)果不一致，具體原因有待于進(jìn)一步研究。動(dòng)物免疫接種后，其抗體水平升高的快慢，體內(nèi)抗體水平的高低，?？勺鳛楹饬繖C(jī)體液免疫高低的指標(biāo)。鋅缺乏嚴(yán)重影響B(tài)淋巴細(xì)胞在骨髓中的發(fā)育，缺鋅使小核骨髓細(xì)胞(發(fā)育中的淋巴細(xì)胞百分比較高)顯著下降，而在斷奶仔豬日糧中添加高劑量的鋅能提高機(jī)體體液免疫水平。趙昕紅等［13］研究表明，飼喂高鋅日糧，血漿IgG濃度隨鋅濃度增加而增加;王勇等［6］報(bào)道，添加3000 mg/kg鋅組血清中IgG、IgM、補(bǔ)體C3和補(bǔ)體C4顯著高于對(duì)照組。本試驗(yàn)結(jié)果顯示:在整個(gè)試驗(yàn)期間，添加1000、2000 mg/kg鋅組豬瘟抗體水平始終高于添加100 mg/kg鋅組，說(shuō)明高鋅日糧能提高仔豬抗體水平。

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