張愛君，王秀青

（寧夏醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院，寧夏檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)研究所，寧夏 銀川 750004）

臨床寄生蟲學(xué)檢驗(yàn)是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)的一門專業(yè)課程，也是一門連接醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)與臨床醫(yī)學(xué)的橋梁課程，它是病原生物學(xué)檢驗(yàn)的一個(gè)組成部分，主要研究和人體健康有關(guān)的寄生蟲與人體和外界環(huán)境因素的相互關(guān)系[1]，以及確診寄生蟲病的病原學(xué)檢查方法，其實(shí)驗(yàn)教學(xué)尤為重要，而形態(tài)學(xué)是實(shí)驗(yàn)教學(xué)的根本，在寄生蟲病的實(shí)驗(yàn)室檢查中具有重要意義。隨著我國寄生蟲病的流行及實(shí)驗(yàn)室檢查技術(shù)和方法的進(jìn)步，僅僅以形態(tài)學(xué)檢查的實(shí)驗(yàn)教學(xué)方法已不能滿足學(xué)生對知識探究的欲望。因此，我們結(jié)合本地區(qū)感染寄生蟲病的實(shí)際情況和當(dāng)前臨床感染性疾病的實(shí)驗(yàn)室檢查方法，在對該課程常規(guī)實(shí)驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容進(jìn)行調(diào)整的同時(shí)，增加研究性實(shí)驗(yàn)教學(xué)，不僅提高了學(xué)生的學(xué)習(xí)主動(dòng)性和科研興趣，還將相關(guān)課程和檢驗(yàn)方法有機(jī)結(jié)合，融會(huì)貫通。

1 合理選擇實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，優(yōu)化傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)學(xué)生必須掌握與致病、診斷有關(guān)的寄生蟲各期形態(tài)結(jié)構(gòu)和相應(yīng)的檢查方法，因此，臨床寄生蟲學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)課的重點(diǎn)仍是基本技能的訓(xùn)練。為此，我們對現(xiàn)行教學(xué)大綱中的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容進(jìn)行了合理的選擇和整合。

實(shí)驗(yàn)標(biāo)本觀察是臨床寄生蟲學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的主要內(nèi)容，寄生蟲標(biāo)本具有蟲種多、標(biāo)本間易混淆等特點(diǎn)，所以在內(nèi)容安排上應(yīng)遵循由易到難的原則，從教材內(nèi)容編排順序和學(xué)時(shí)進(jìn)度上進(jìn)行調(diào)整。如蛔蟲、鞭蟲、蟯蟲等消化道寄生蟲實(shí)驗(yàn)由教學(xué)大綱安排的12學(xué)時(shí)調(diào)整為8學(xué)時(shí)，其他內(nèi)容也根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。調(diào)整后的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容不僅充實(shí)，而且通過鏡下形態(tài)結(jié)構(gòu)的直接比較和檢驗(yàn)方法的觸類旁通，提高學(xué)生對標(biāo)本的檢查能力、辨認(rèn)能力和強(qiáng)化對理論知識的理解，還可以留出一部分實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)結(jié)合實(shí)驗(yàn)室開放日開展綜合性強(qiáng)、具有研究性的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。

2 開展新的項(xiàng)目，滲透研究性實(shí)驗(yàn)

滴蟲性陰道炎是由陰道毛滴蟲（Trichomonas vaginalis）引起的一種常見性傳播疾病，其感染遍及世界各地。我們選擇陰道毛滴蟲作為研究對象，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室條件，提出研究方向，討論可行性方案，學(xué)生依興趣選擇研究內(nèi)容，利用實(shí)驗(yàn)課時(shí)和實(shí)驗(yàn)室開放日來完成，從而激發(fā)學(xué)生潛在的科研能力，發(fā)揮其主體作用[2]。

2.1 陰道毛滴蟲的體外培養(yǎng)

該實(shí)驗(yàn)周期短（2～3天完成），有較強(qiáng)的可操作性，滴蟲培養(yǎng)后用生理鹽水涂片法檢測，在觀察活體標(biāo)本的同時(shí)彌補(bǔ)了固定染色標(biāo)本的缺陷，符合臨床實(shí)際。此外，培養(yǎng)法可提高病原體的檢出率和陽性率，有很高的實(shí)用性。

2.1.1 培養(yǎng)基 選用肝浸液培養(yǎng)基，pH 5.6～5.8，經(jīng)高壓滅菌置4℃保存?zhèn)溆?。接種前每管加入肝浸液培養(yǎng)基4ml，加入12%滅活的小牛血清，青霉素和鏈霉素各100萬單位。

2.1.2 實(shí)驗(yàn)蟲株 取臨床診斷為滴蟲性陰道炎患者的陰道分泌物，接種于肝浸液培養(yǎng)基中，37℃無菌培養(yǎng)，24 h傳代一次，穩(wěn)定傳代3次后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.2 中草藥抗陰道毛滴蟲作用的體外效果研究

遴選幾種目前臨床上常用的治療陰道毛滴蟲感染的中草藥（學(xué)生自行選購于銀川市古方藥店）。對所選藥物進(jìn)行多個(gè)不同藥物濃度的實(shí)驗(yàn)：2 mg/ml，4 mg/m l，8 mg/m l，16 mg/m l，32 mg/ml等，同時(shí)設(shè)無藥對照組。取體外傳代培養(yǎng)的滴蟲，調(diào)整滴蟲濃度為2×105個(gè)/m l。將藥物實(shí)驗(yàn)組與無藥對照組分別加入滴蟲溶液 100 μl，置 37℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 2 h、4 h、8 h、12 h 和24 h，分別吸取各管蟲液滴片鏡檢，觀察滴蟲活動(dòng)狀態(tài)，并計(jì)數(shù)死亡蟲體數(shù)和計(jì)算死亡率。將蟲體圓形、不運(yùn)動(dòng)、邊緣不整、內(nèi)含大量顆粒、空泡甚至為碎片狀的蟲體判定為死亡滴蟲，所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件分析，并對結(jié)果進(jìn)行討論。

2.3 陰道毛滴蟲基因組DNA的提取

對肝浸液培養(yǎng)的蟲株進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。當(dāng)蟲體總數(shù)達(dá)1×106個(gè)/m l時(shí)收集蟲體，采用酚氯仿法提取陰道毛滴蟲的DNA。此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)可在本專業(yè)課程分子診斷學(xué)的理論基礎(chǔ)之上，聯(lián)合其實(shí)驗(yàn)課程內(nèi)容和實(shí)驗(yàn)室條件來完成。

3 細(xì)化實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)，突出研究性

學(xué)生選擇實(shí)施的各項(xiàng)研究性實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目包括實(shí)驗(yàn)選題、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)答辯、實(shí)施操作到結(jié)題答辯4個(gè)環(huán)節(jié)。綜合臨床寄生蟲學(xué)檢驗(yàn)、免疫學(xué)檢驗(yàn)、分子診斷學(xué)等學(xué)科的檢驗(yàn)方法和實(shí)驗(yàn)室條件，引導(dǎo)并指導(dǎo)學(xué)生依據(jù)各自的實(shí)驗(yàn)路線和實(shí)驗(yàn)內(nèi)容完成所選項(xiàng)目。

3.1 實(shí)驗(yàn)選題

課題組教師根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件、教學(xué)內(nèi)容以及本地區(qū)寄生蟲病特點(diǎn)，確定幾個(gè)實(shí)驗(yàn)方向，學(xué)生依興趣以小組為單位進(jìn)行選題。

3.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)答辯

學(xué)生小組結(jié)合所選課題，查閱文獻(xiàn)，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)路線，確定實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。通過查閱文獻(xiàn)鍛煉學(xué)生獲取信息、整理信息和分析信息能力，培養(yǎng)學(xué)生的科研素質(zhì)。研究方法、實(shí)驗(yàn)路線的設(shè)計(jì)則要根據(jù)選題的可行性，包括實(shí)驗(yàn)材料源、實(shí)驗(yàn)室條件、實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)等進(jìn)行設(shè)計(jì)。

模擬研究生開題報(bào)告答辯會(huì)的形式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)答辯。通過答辯來修正學(xué)生小組制定的研究方法和路線中存在的問題及不足，保證實(shí)驗(yàn)的可操作性，確保其順利完成，同時(shí)也鍛煉了學(xué)生的語言組織能力和分析問題能力。

3.3 實(shí)驗(yàn)操作

學(xué)生小組通過實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)答辯后，在教師的指導(dǎo)下分組完成各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。包括材料的準(zhǔn)備，試劑的配制，實(shí)驗(yàn)儀器的正確使用以及解決實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的問題，都要親歷親為，認(rèn)真思考。在此過程中，學(xué)生需將某些課程知識點(diǎn)結(jié)合并實(shí)際應(yīng)用，使綜合素質(zhì)得到提高。

3.4 結(jié)題答辯

研究性實(shí)驗(yàn)的特點(diǎn)就是要有研究結(jié)果。在書寫結(jié)題報(bào)告時(shí)，學(xué)生對實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)操作及實(shí)驗(yàn)原始記錄、實(shí)驗(yàn)結(jié)果等逐層進(jìn)行分析，充分論述。通過答辯，不僅讓學(xué)生積累、增長了知識，體驗(yàn)了課題答辯，同時(shí)也增強(qiáng)了團(tuán)隊(duì)協(xié)作意識。

研究性實(shí)驗(yàn)是一種將教學(xué)、科研、實(shí)踐三者相結(jié)合的教學(xué)模式，以培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)造能力和創(chuàng)新意識為著眼點(diǎn)，在教學(xué)過程中為學(xué)生提供類似于科學(xué)研究的場景，讓學(xué)生通過收集信息、分析信息、利用信息，經(jīng)過探索、發(fā)現(xiàn)和體驗(yàn)，激發(fā)學(xué)生對實(shí)驗(yàn)的興趣，培養(yǎng)學(xué)生自主學(xué)習(xí)能力和對未知領(lǐng)域的探究意識。同時(shí)，開展研究性實(shí)驗(yàn)也有利于淘汰那些陳舊、落后的實(shí)驗(yàn)方法，采用新穎、先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)方法，使學(xué)生的學(xué)習(xí)跟上學(xué)科發(fā)展的步伐。教育部在《關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)高等學(xué)校本科教學(xué)工作的若干意見》中指出，高等學(xué)校本科教學(xué)工作“要積極推動(dòng)研究性教學(xué)，提高大學(xué)生的創(chuàng)新能力，增加綜合性與創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)”[3]。因此，我們在實(shí)驗(yàn)教學(xué)中加入研究性實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，引導(dǎo)大學(xué)生了解多種學(xué)術(shù)觀點(diǎn)并開展討論、追蹤本學(xué)科領(lǐng)域的最新進(jìn)展。學(xué)生通過參與研究性實(shí)驗(yàn)的各個(gè)環(huán)節(jié)，提高了自主學(xué)習(xí)和團(tuán)隊(duì)協(xié)作能力，繼而對一些基本的科研方法有所了解并熟悉，早期接觸科研，培養(yǎng)了科研能力。

[1]李雍龍.人體寄生蟲學(xué)[M].7版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008.

[2]張春龍，何秋璨，劉新光，等.淺談學(xué)生主體性在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)開放式實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的積極發(fā)展[J].衛(wèi)生職業(yè)教育，2008，26（16）：121-122.

[3]仝曉燕.探索研究性實(shí)驗(yàn)教學(xué)提高學(xué)生的創(chuàng)新能力[J].高校實(shí)驗(yàn)室工作研究，2007（2）：20-22.