區(qū)鈺強方 堅李海平李萬逸彭 建鄧春雷林柳陸

1.廣東省肇慶市中醫(yī)院骨傷科，廣東 肇慶 506020；2.廣州中醫(yī)藥大學第三附屬醫(yī)院骨科，廣東 廣州 510045

炎癥反應在大鼠創(chuàng)傷性深靜脈血栓形成的作用及消腫止痛湯干預機制的研究*

區(qū)鈺強1方 堅2李海平1李萬逸1彭 建1鄧春雷1林柳陸1

1.廣東省肇慶市中醫(yī)院骨傷科，廣東 肇慶 506020；2.廣州中醫(yī)藥大學第三附屬醫(yī)院骨科，廣東 廣州 510045

目的：探討 “消腫止痛湯”通過調控創(chuàng)傷后大鼠炎癥因子調控水平預防深靜脈血栓形成的機理。方法：SPF級大鼠80只隨機分成正常N組、空白B組、中藥C組、西藥W組，后3組再各分三小組，每小組8只。N組不做任何干預措施，余3組以 “定量擊打＋石膏固定”法建立創(chuàng)傷性深靜脈血栓形成模型，C組造模前1天起每日予消腫止痛湯灌胃，W組予低分子肝素皮下注射，B組不予藥物干預。分別于造模后第1、3、7天處死（B1、W1、C1）組、（B2、W2、C2）組、（N、B3、W3、C3）組，心臟取血檢測TNF－α、IL－1、IL－6，取下肢靜脈標本觀察靜脈血栓發(fā)生情況。結果：造模后1天3組大鼠血清TNF－α、IL－1、IL－6水平均高于N組，差異有顯著性意義（P＜0.05），各組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；造模后3天，3組上述因子水平進一步升高（P＜0.05），兩兩比較B1組明顯高于C2、W2組（P＜0.05），后2組間無明顯差異（P＞0.05）；造模后7天，C3、W3組各因子較造模后3天時明顯下降，差異有顯著性意義（P＜0.05），B3組則未見明顯下降（P＞0.05），兩兩比較B3組明顯高于C3、W3組，后2組間無明顯差異（P＞0.05）。B組12例DVT（B1組1例、B2組4例、B3組7例），C組3例DVT（C1組0例、C2組1例、C3組2例），W組4例DVT（W1組0例、W2組1例、W3組3例），造模后第7天DVT發(fā)生率比較，差異有顯著性意義 （P＜0.05）。結論：炎癥反應在大鼠創(chuàng)傷性深靜脈血栓形成中起重要作用，中藥消腫止痛湯可顯著的降低創(chuàng)傷后炎癥因子水平，有效預防創(chuàng)傷性DVT的發(fā)生。

創(chuàng)傷；深靜脈血栓形成／預防；炎癥因子；消腫止痛湯

創(chuàng)傷性深靜脈血栓形成（traumatic deep venous thrombosis，TDVT）是嚴重創(chuàng)傷／大手術后常見繼發(fā)癥［1］，非但減緩患者的康復預后，增加病人的費用負擔，甚至會發(fā)生致命的肺栓塞。以往中醫(yī)藥研究多集中在血液流變學等預測指標的觀察上，而通過抑制炎癥反應預防TDVT的機制，尤其分子水平的研究仍然空白［2］。前期研究提示，炎癥反應在TDVT發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用，炎癥介質表達的水平可能與血栓形成密切相關。本次實驗通過觀察不同組別創(chuàng)傷后大鼠炎癥因子的變化，進一步驗證炎癥與TDVT的相關性，觀察消腫止痛湯對相關因子的調控及預防TDVT的作用。

1 材料與方法

1.1 實驗設計 隨機分組設計對照動物實驗。

1.2 時間及地點 于2012－01～2012－08在肇慶學院動物中心完成。

1.3 實驗動物 健康SPF級SD大鼠80只（購自中山大學實驗動物中心，合格證號：SCXK粵2011－0029），體質量309.17±26.31g。實驗過程中，所有動物每周測量體重一次。所有動物均單籠喂養(yǎng)，自由飲水，標準飲食。

1.4 實驗藥物 低分子肝素鈣：法國賽諾菲－安萬特制藥

公司生產，0.2m l：1900IU／支，批號：1105021；中藥消腫止痛湯由秦歸、紅芍藥、土元、銀花藤、元柏、白秋霜、苡米等7味中藥組成，其提取的藥物含生藥量3.34g／m l（由肇慶市中醫(yī)院中藥制劑室提供）。

1.5 方法

1.5.2 造模 采取“定量擊打＋石膏外固定”法［3］：大鼠不麻醉，取俯臥位，采用創(chuàng)傷定量擊打裝置，瞬間打擊能量為5焦耳，分別擊打雙側大腿近端外側各1次，造成股骨骨折，行髖人字石膏固定。

1.5.3 干預 N組大鼠自由飲水和攝食，不作任何干預措施；B組大鼠造模成功后自由飲水和攝食，不使用任何藥物干預；W組和C組大鼠自由飲水和攝食，根據人與動物及各類動物間藥物劑量換算方法計算，自造模前1天至處死每日分別予33.3IU低分子肝素皮下注射或9.6g／kg消腫止痛湯灌胃。

1.5.4 取材 分別于造模后第1、3、7天處死（B1、W1、C1）組、（B2、W2、C2）組、（N、B3、W3、C3）組大鼠，進行心臟取血以及取股靜脈及主要屬支留為標本，測量血栓質量。

1.6 觀察指標與統(tǒng)計學方法

1.6.1 觀察指標 炎癥因子及血栓預測指標：以ELISA技術檢測腫瘤壞死因子－α（TNF－α）、白細胞介素1（IL－1）、白細胞介素6（IL－6）水平；血栓形成測定：取對象股靜脈標本光鏡鏡檢，觀察靜脈血栓發(fā)生的情況。

1.6.2 統(tǒng)計學方法 所有資料數(shù)據均輸入計算機，用SPSS18.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計處理。計數(shù)資料用卡方檢驗，計量資料用t檢驗。

2 結果

2.1 實驗動物數(shù)量分析 實驗過程中，因灌胃操作不當C2組死亡1只，W3組有1只因造模后食欲不振死亡，N組有1只因嚴重腹瀉死亡。最后N組7只，B組24只，W組、C組各有23只進入結果分析。

2.2 炎癥因子及D－Dimer水平變化比較 造模后1天B1、W1、C1組大鼠血清TNF－α、IL－1、IL－6水平均高于N組，差異有顯著性意義 （P＜0.05），各組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；造模后3天，3組上述因子水平進一步升高（P＜0.05），兩兩比較B1組明顯高于C2、W2組（P＜0.05），后2組間無明顯差異（P＞0.05）；造模后7天，C3、W3組各因子較造模后3天時明顯下降，差異有顯著性意義（P＜0.05），B3組則未見明顯下降（P＞0.05），兩兩比較B3組明顯高于C3、W3組（P＜0.05），后2組間無明顯差異（P＞0.05）。具體見表1。

F1因子：Au-Ag-As-Sb-W——金礦化因子。這些因子對方差的貢獻率很大，達到了37.143%。在這個第一因子組合中，出現(xiàn)了礦化組合的各個部位的元素，As、Sb在礦床原生暈分帶序列為礦體的前緣暈指示元素，Au、Ag為礦化中部的指示元素，W為礦化的尾暈指示元素，它們共存于同一組合可反映礦化的疊加關系，這就意味著深部還有良好的礦體[7]。Au與As、Ag、Sb的關系十分密切，這一方面表明Au與Ag是共沉淀，另一方面表明礦體中的Au可能賦存在毒砂和輝銻礦中。因此，As、Sb對Au的找礦具有指示意義。

表1 炎癥因子水平變化比較 （）

2.3 TDVT發(fā)生率比較 經過組織學檢查證實各組不同時間點處死大鼠TDVT發(fā)生率，B組12只發(fā)生TDVT（B1組1例、B2組4例、B3組7例）；C組3例TDVT（C1組0例、C2組1例、C3組2例）；W組4例TDVT（W1組0例、W2組2例、W3組2例）。造模后第7d，3組TDVT發(fā)生率比較，差異有顯著性意義（χ2＝7.7569，P＜0.05）；組間兩兩比較：B3組明顯高于W3組和C3組（P＜0.05，P＜0.05），W3組與C3組之間無明顯差異（P＞0.05）。具體結果見表2。

比較經卡方檢驗，P＝0.2982＞0.05，三組發(fā)生率相等；③B3、W3及C3組TDVT發(fā)生率比較經卡方檢驗，P＝0.0207＜0.05，三組發(fā)生率不相等。

表2 各組大鼠TDVT發(fā)生率比較（%）

5 討論

肢體創(chuàng)傷或手術后引發(fā)的炎癥反應是臨床DVT的高危誘因，易繼發(fā)急性創(chuàng)傷性深靜脈血栓形成 （TDVT），對患者造成很大的影響［4］。炎癥反應是由于機體損傷后白細胞粘附及遷移，同時釋放各種細胞因子刺激外源性和內源性損傷因子引起細胞多種損傷性病變，局部及全身則發(fā)生一系列復雜的反應，以局限和消滅損傷因子，并清除和吸收壞死組織，修復損傷，屬于機體的一種防御性反應。一方面炎性因子可激活凝血系統(tǒng)，促進凝血因子的釋放，致血液呈高凝狀態(tài)，易形成血栓；另一方面，凝血系統(tǒng)的啟動又可引起炎癥因子的釋放，引發(fā)或加重炎癥反應，進而循環(huán)影響，最終導致血栓形成［5］。

我們的前期研究顯示炎性反應的活躍程度可能與TDVT呈密切正相關［6］，炎癥因子高表達可使體內凝血系統(tǒng)作用顯著增強，血栓預測指標明顯升高，有可能導致TDVT在內的副作用的發(fā)生。因此，進一步探究炎性介質的活性差異與創(chuàng)傷性DVT發(fā)生之間的關系有助于揭示TDVT發(fā)病的機理。

當機體受到嚴重創(chuàng)傷或經歷大手術后，軟組織滲血溢出經脈而成停滯瘀血，阻礙氣血運行，聚而成瘀，瘀久變熱，瘀血與郁熱互為因果，往返循環(huán)，氣機不得暢達，不通則致痛。故TDVT預防應當以涼血化瘀、清熱解毒為法則。由秦歸、紅芍藥、土元、銀花藤、元柏、白秋霜、苡米等組成的消腫止痛湯是我院保密方，功能逐瘀活血、解毒瀉熱，補瀉有道，雙向調節(jié)，行而不燥，化瘀而存津陰；既可抑制炎癥過激反應，又能活血改善循環(huán)抗凝，改善血液高凝狀態(tài)，可促進凝血系統(tǒng)的自我調節(jié)［7］。本次實驗以TNF－α、IL－1、IL－6等炎癥因子為介入點研究中藥消腫止痛湯對其活性的調控作用，有可能揭示中藥防治TDVT作用機制中的一個重要環(huán)節(jié)。

在本次實驗中，TNF－α、IL－1、IL－6在造模后第1天均明顯升高，第3天達到峰值，第7天W組、C組各炎癥因子較前明顯下降，B組空白組則未見明顯下降；W組、C組TDVT發(fā)生率低于B組，W組、C組之間無明顯差異。這說明，消腫止痛湯預防TDVT效果與低分子肝素（LMWH）相當。我們知道，LMWH是目前臨床預防TDVT指南用藥，效果較確切，本研究佐證LMWH的抗靜脈血栓效果可能與其抗炎作用有關［8］。這一結果進一步印證了炎癥反應活性與TDVT發(fā)生具有密切正相關性，中藥消腫止痛湯可通過調控炎癥因子表達水平預防股骨頭壞死。

［1］寧志杰.對防范人工關節(jié)置換手術兩大高危并發(fā)癥的認識 ［J］.中國矯形外科雜志，2009，17（2）：120－123.

［2］Tousoulis D，Davies G，Stefanadis C，et al.Inflammatory and thrombotic mechanisms in coronary atherosclerosis［J］.Heart，2003，89（9）：993－997.

［3］周圍血管疾病診斷及療效標準.全國第四屆中西醫(yī)結合治療周圍血管疾病學會議論文選編［C］.1995，20：154.

［4］Chirinos JA，Heresi GA，Velasquez H.Elevation of endothelial microparticles，Platelets and leukocyte activation in patients with venous thromboembolism［J］.J Am Coll Cardiol，2005，45：1467－1471.

［5］中華醫(yī)學會骨科學分會.中國骨科大手術靜脈血栓栓塞癥預防指南［J］.中華骨科雜志，2009，29（6）：602－604.

［6］區(qū)鈺強，方堅，李萬逸，等.消腫止痛湯調控骨科大手術后炎癥反應及預防深靜脈血栓形成臨床觀察［J］.新中醫(yī)，2012，44（6）：79－81.

［7］鄧春雷，區(qū)鈺強.消腫止痛湯預防骨科大手術深靜脈血栓臨床療效與藥物經濟學分析［J］.國際醫(yī)藥衛(wèi)生導報，2010，16（3）：272－275.

［8］羅俊永，崔慧斐.低分子肝素的抗炎作用及機制 ［J］.生命的化學，2008，28（6）：727－730.

表2 兩組痛風性關節(jié)炎患者治療前后VAS疼痛評分及實驗室指標

3 討論

隨著人們生活水平的提高，痛風性關節(jié)炎已成為常見病，且發(fā)病率逐年增高。西醫(yī)在痛風的治療上尚無特殊方法根治，一般采用對癥止痛、抑制血尿酸生成或 （和）促進其排泄等。目前緩解癥狀的最佳藥物是秋水仙堿，同時選用抗尿酸生成及促進尿酸排泄的藥物，雖有一定緩解與控制癥狀的效果，但極易復發(fā)，療效不穩(wěn)定，且副作用較大，如它可能引發(fā)患者胃腸道、肌肉和周圍神經等發(fā)生病變，還可能導致脫發(fā)、皮疹和肝損傷等。特別是近幾年，有報道聲稱不良反應的發(fā)生率高達50%～80%［3］。

急性痛風性關節(jié)炎屬于中醫(yī)學 “風濕熱痹”范疇。多因進食膏粱厚味，傷及脾胃，運化失健，濕濁內生，郁久成濕熱。濕易趨下，再加外邪侵襲，勞損而致氣血不通，瘀血凝滯，阻塞經脈而致。病機關鍵為濕熱瘀血阻滯經脈。治療當以清熱除濕、通絡止痛。藥理研究表明四妙散有明顯的抗高尿酸血癥作用，其作用機制可能主要是促進尿酸排泄［4］。方中黃柏味苦，性寒，能燥濕勝熱，且祛下焦?jié)駸幔簧n術燥濕健脾，使?jié)裥办畛灰自偕?；牛膝祛風濕，補肝腎，引藥下行；薏苡仁利濕舒筋，主治濕熱下注之癥；秦艽有清熱祛濕，通絡止痛；丹參、桃仁、紅花活血祛瘀；知母清熱通絡；澤瀉利水滲濕。諸藥相合，共奏其效?，F(xiàn)代藥理證實，丹參具有良好的改善微循環(huán)的作用，其中丹參酮通過提高毛細血管的通透性而起消腫抗炎作用，特別是抑制關節(jié)腫脹。秦艽中所含的秦艽堿甲能興奮腎上腺皮質而實現(xiàn)抗炎作用。懷牛膝也具有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛作用。新癀片的主要成份是腫節(jié)風、田七、牛黃等中草藥，具有清熱解毒、活血化淤、消腫止痛的功效，它治療急性痛風性關節(jié)炎的作用機理，可能是通過抗炎作用即抑制尿酸鹽引起的炎癥反應，而達到消腫、止痛、退熱的效果。

綜上所述，四妙湯加味配合新癀片，四妙散外敷對急性痛風性關節(jié)炎具有消腫止痛作用，可以改善關節(jié)癥狀，是一種治療急性痛風性關節(jié)炎的安全、有效的方法。

參考文獻

［1］蔣明，張奉春.風濕病診斷與診斷評析 ［M］.上海：上?？茖W技術出版社，2004：323.

［2］國家中醫(yī)藥管理局.中醫(yī)病證診斷療效標準 ［S］.南京：南京大學出版社，1994：32.

［3］施桂英.走出痛風性關節(jié)炎診斷和治療的誤區(qū) ［J］.中華全科醫(yī)師雜志，2006，5（9）：519.

［4］陳光慶，段玉光，李莉，等.加味四妙湯對高尿酸血癥和痛風性關節(jié)炎防治作用的實驗研究［J］.中國實驗方劑學雜志，2008，14（3）：48－52.

（收稿日期：2013.04.17）

Study on the Inflammatory Reaction in Traumatic Deep Vein Thrombosis of Rats and the Interventional Mechanism of XiaoZhongZhiTong decoction

OU Yuqiang1，F(xiàn)ANG Jian2，LI Hai-ping1，LI Wan-yi1，PENG Jian1，DENG Chun-lei1，LIN Liu-lu1
（1.TCM Hospital of Zhaoqing City in Guangdong Province，Zhaoqing 526020，China；2.The Third Affiliated Hospital of Guangzhou University of TCM，Guangzhou 510045，China）

Objective To study the effect of XiaoZhongZhiTong decoction on regulating inflammatory cytokines levels and preventing traumatic deep venous thrombosis of rats.Methods 80 SPF rats were randomly and evenly divided into four groups：normal，blank，western medicine and chinese herb medicine.Rats in N－group did not received any intervention，while the others were established TDVT models by the means of“beating on the bilateral thigh quantitative and plaster fixation”.Rats in B－group did not received any medicine，rats in C－group were intragastric administrated with“XiaoZhongZhiTong”，rats in W－group were injected with low molecular weight heparin.The preventive effect and the change of inflammatory cytokines levels were compared in the different groups.Results①Comparison of inflammatory cytokines levels：All rats＇inflammatory cytokines levels increased significantly the day after model establishment（P＜0.05）.The increased inflammatory cytokines levels of theW－group and C－group decreased remarkably after treatment（P＜0.05），while those of the B－group hardly reduced（P＞0.05），with significant difference between the 3 groups（P＜0.05.②Comparison of TDVT incidence rates：There was statistical difference among the 3 groups at7th day after model establishment（P＜0.05）.Conclusion Inflammatory cytokines levels are correlated with TDVT incidence rate of rats.XiaoZhongZhi-Tong decoction is effective on decreasing these inflammatory cytokines levels and preventing TDVT after trauma.

Trauma；Deep venous thrombosis／prevention and control；Inflammatory cytokine；Animal experimentation；XiaoZhongZhiTong decoction

R364.5

A

1007－8517（2013）13－0020－03

2013.04.12）

（廣東省中醫(yī)藥管理局）中藥對創(chuàng)傷后炎癥反應調控及深靜脈血栓預防機制的研究 （編號：2010350）。

區(qū)鈺強 （1979－），男，醫(yī)學碩士，主治醫(yī)師，研究方向：骨關節(jié)創(chuàng)傷。